维氏气单胞菌TH0426株ompW基因的克隆、生物信息学分析及其原核表达

论文摘要

为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)ompW基因的生物信息学特性及相关功能,试验克隆了维氏气单胞菌ompW基因片段,通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级及三级结构,并对其进行原核表达及反应原性检测。结果显示,ompW基因全长594 bp,编码197个氨基酸,TH0426株ompW基因与A.veronii B5B6株属于同一分支;该蛋白属于外膜蛋白,在19～29位氨基酸之间有一个典型的疏水区域,不存在跨膜区、信号肽,二级结构以β折叠与无规则卷曲为主。Western blot结果显示OmpW重组蛋白能与鼠抗维氏气单胞菌(A.veronii)TH0426株血清发生特异性结合。综上,OmpW重组蛋白具有一定的免疫原性,为进一步研究A.veronii疫苗奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株及实验动物
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 ompW基因的扩增
•   1.5 目的基因系统进化树的构建及相关生物信息学分析
•   1.6 重组pEASY-ompW克隆质粒的构建
•   1.7 重组pET32a （+） -ompW表达质粒的构建
•   1.8 重组pET32a-ompW表达条件的优化表达
•   1.9 重组OmpW蛋白的纯化与复性
•   1.10 鼠抗维氏气单胞菌多克隆抗体的制备
•   1.11 鼠抗维氏气单包菌多克隆抗体的效价测定
•   1.12 Western blot法检测
• 2 结果
•   2.1 维氏气单胞菌TH0426 ompW基因扩增
•   2.2 ompW基因系统进化树的构建
•   2.3 OmpW蛋白的蛋白序列分析及结构预测
•   2.4 ompW基因重组表达质粒的鉴定
•   2.5 重组pET32a （+） -ompW表达载体的优化
•   2.6 抗体效价检测结果
•   2.7 重组OmpW蛋白的Western blot检测鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵泽林,单晓枫,田磊,康元环,张冬星,田佳鑫,徐洋,钱爱东

关键词: 维氏气单胞菌,基因,生物信息学分析

来源: 中国兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,浙江省淡水渔业研究所农业部水产养殖重点实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31201927),农业部淡水渔业健康养殖重点实验室开放课题资助项目(ZJK201814),吉林省重点科技攻关资助项目(20150204065NY),吉林省教育厅“十三五”科学技术计划资助项目(JJKH2080694KJ)

分类号: S852.61

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.20

页码: 1545-1550

总页数: 6

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