核因子受体激活物配基论文_钱永,危由春,曹钟义,严俊峰,张行伟

导读:本文包含了核因子受体激活物配基论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:因子,受体,蛋鸡,活性,骨质疏松,细胞,生物。

核因子受体激活物配基论文文献综述

钱永,危由春,曹钟义,严俊峰,张行伟[1](2013)在《核因子κB受体激活因子配基在成釉细胞瘤中的表达及意义》一文中研究指出目的研究核因子κB受体激活因子配基(RANKL)在成釉细胞瘤(AM)中的表达及其在AM骨吸收机制中的作用。方法收集多囊或实性型AM石蜡标本34例、新鲜标本17例及由新鲜标本培养的AM细胞标本12例,采用免疫组化及Western blot方法检测RANKL在AM组织和细胞中的表达水平。结果 AM标本中,RANKL阳性表达率为86.27%(41/51)。RANKL在AM组织及体外培养的AM细胞中稳定表达。结论 RANKL在AM的骨吸收机制中可能发挥重要作用。(本文来源于《江苏医药》期刊2013年02期)

王艳[2](2008)在《鸡核因子-κB受体激活物配基(chRANKL)基因的克隆、表达及生物学活性研究》一文中研究指出核因子-KB受体激活物配基RANKL(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)最早发现于哺乳动物,属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一员,它参与破骨细胞形成的全过程:分化、融合、生存、激活,被认为是介导各种刺激因子诱导破骨细胞生成及功能信号传导的最终因子。鉴于RANKL在骨代谢中的重要调节作用,本文旨在克隆表达蛋鸡RANKL蛋白,并对其生物学活性进行研究,为进一步研究笼养蛋鸡骨质疏松发生机制提供新的思路。试验Ⅰ、chRANKL编码区基因的克隆与序列分析应用RT-PCR方法从体外培养鸡胚成骨细胞中扩增得到鸡RANKL编码基因(Genbank登录号EF379383),然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,经酶切、PCR鉴定及DNA序列测定。结果表明,扩增得到1203 bp的RANKL序列,扩增序列与GenBank上报道的预测序列具有很高的相似性,达到99.3%,与人、小鼠、犬的一致性分别为55.4%、52%和55.7%,进化树分析结果表明RANKL作为机体内调节骨代谢一种重要细胞因子,在进化中高度保守。RANKL基因的成功扩增为深入研究骨质疏松等代谢性骨病的发病机制及防治开辟广阔的领域。试验Ⅱ、chRANKL的原核表达和纯化设计一对引物用于克隆鸡RANKL成熟蛋白编码基因,然后构建鸡RANKL原核表达载体pET-32a(+)-chRANKL,通过IPTG诱导表达重组鸡RANKL成熟蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,原核表达产物为64 kD的重组蛋白,并主要以包涵体形式存在,western blot分析结果显示,表达得到的重组蛋白具有良好的抗原结合活性。试验Ⅲ、chRANKL诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞的研究建立简便有效的鸡胚骨髓破骨样细胞的诱导培养体系,获得高密度高纯度的破骨细胞,为进一步研究笼养蛋鸡骨质疏松症的发病机理奠定基础。剔取18日龄鸡胚胫骨和肱骨,用注射器抽取α-MEM培养液冲洗骨髓腔,获取的细胞悬液接种于培养板。2h后吸取未贴壁细胞,离心重悬,使细胞密度为2×106/mL,接种于培养板,加入诱导剂RANKL和M-CSF,成功获得具有破骨细胞特征的细胞:细胞大,多核;TRAP染色阳性,在骨片表面形成吸收陷窝;这表明chRANKL能诱导鸡破骨细胞前体细胞形成OLC,说明chRANKL在鸡OC分化、成熟过程中起重要作用。但加入chOPG后,则大大降低了OLC的形成以及OLC的骨吸收作用,表明chOPG阻断了RANKL介导的OC分化和骨吸收作用。试验Ⅳ、chRANKL在毕赤酵母中的表达和生物学活性研究设计另一对引物用于克隆鸡RANKL成熟蛋白编码基因,然后构建鸡RANKL真核表达载体pPICZa-A-chRANKL,以电穿孔法转化酵母X-33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物,表达产物相对分子量为54kDa,表达量约为220mg/L,经Western印迹验证,表达得到的蛋白能够与抗人RANKLIgG反应,表明通过酵母表达得到的蛋白具有较好的免疫原性。试验V、chRANKL酵母冻干产物体内、体外对成熟破骨细胞的影响50羽青年ISA蛋鸡分为5组,A组为对照组,只注射生理盐水,B、C、D、E组分别注射剂量为0.01 mg/kg,0.05 mg/kg,0.1 mg/kg,0.5 mg/kg的RANKL酵母表达冻干产物水溶物。2h后静脉采血,测定血浆钙离子浓度。同时将浓度为2 ng/mL,6ng/mL,10 ng/mL分别加入体外培养的成熟破骨细胞中,培养第3d观察骨吸收陷窝的变化,并测定培养液中钙离子浓度。结果表明,体内注射RANKL后,血浆钙离子浓度升高,且呈剂量依赖性增加。不同浓度的RANKL加入到体外培养的成熟破骨细胞能使骨吸收指数和骨吸收陷窝面积均呈剂量依赖性增加,同时钙离子浓度也有显着差异。结论:RANKL除了能诱导形成破骨样细胞外,也能刺激成熟破骨细胞,使之骨吸收功能增强。(本文来源于《南京农业大学》期刊2008-04-01)

王宝利[3](2002)在《1、核因子—κB受体激活物配基(RANKL)反义RNA影响破骨细胞样细胞生成的研究 2、小鼠RANKL活性区cDNA克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达 3、人护骨素(OPG)成熟肽基因酵母表达载体的构建》一文中研究指出护骨素(osteoprotegerin,OPG)及其同源配基核因子-κB受体激活物配基(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)在破骨细胞分化和激活的调控中具有十分关键的作用。它们都由成骨细胞/骨髓基质细胞谱系表达。在允许浓度的M-CSF存在时,RANKL有力促进破骨细胞的分化、成熟和激活,并抑制细胞凋亡,是这些过程所必需的终极效应分子。OPG是RANKL的诱骗受体,通过与表达于成骨细胞/骨髓基质谱系表面的RANKL结合阻断RANKL对破骨细胞生成等的诱导作用。多数趋钙激素和细胞因子通过影响RANKL与OPG的相对表达水平来调控破骨细胞的分化和功能。 本实验通过研究RANKL和OPGmRNA在OVX小鼠骨组织中的相对表达水平,探讨RANKL和OPG在PMO发病中的意义。 我们将40只6周龄昆明小鼠随机分为5组,分别为Ⅰ组:对动物行假手术,术后1周处死;Ⅱ组:行卵巢切除手术,安慰剂治疗,术后1周处死;Ⅲ组:行卵巢切除手术,安慰剂治疗,术后5周处死;Ⅳ组:行卵巢切除手术,术后给苯甲酸雌二醇治疗,5周后处死;Ⅴ组:行假手术,术后5周处死。动物处死后,提取胫、股骨骨组织总RNA,以GAPDH作为内参照,RT-PCR扩增检测OVX小鼠RANKL和OPG mRNA表达水平,发现手术后第1、5周去卵巢小鼠骨组织RANKL mRNA表达水平都较假手术组明显增高,采用雌激素治疗可显着降低RANKL mRNA表达水平。而OPG mRNA表达水平在去卵巢后第1周时较假手术组显着降低,在第5周时却比假手术组显着升高,可能是机体的一种代偿机制。雌激素治疗组则介于去卵巢5周组和假手术组之间,但与二者均无显着性差异。以RANKL/OPG来表示RANKL和OPG mRNA的相对表达水平,我们发现,去卵巢后,RANKL/OPG显着增高,采用雌激素防 天津医科大学博士学位论文 治可使RANKL/OPG与假手术组无显着差异。 本研究结果提示PMO发病中雌激素减退所导致的骨丢失与骨组织RANKL 和OPG的mRNA相对表达水平紊乱有关。(本文来源于《天津医科大学》期刊2002-05-01)

核因子受体激活物配基论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

核因子-KB受体激活物配基RANKL(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)最早发现于哺乳动物,属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一员,它参与破骨细胞形成的全过程:分化、融合、生存、激活,被认为是介导各种刺激因子诱导破骨细胞生成及功能信号传导的最终因子。鉴于RANKL在骨代谢中的重要调节作用,本文旨在克隆表达蛋鸡RANKL蛋白,并对其生物学活性进行研究,为进一步研究笼养蛋鸡骨质疏松发生机制提供新的思路。试验Ⅰ、chRANKL编码区基因的克隆与序列分析应用RT-PCR方法从体外培养鸡胚成骨细胞中扩增得到鸡RANKL编码基因(Genbank登录号EF379383),然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,经酶切、PCR鉴定及DNA序列测定。结果表明,扩增得到1203 bp的RANKL序列,扩增序列与GenBank上报道的预测序列具有很高的相似性,达到99.3%,与人、小鼠、犬的一致性分别为55.4%、52%和55.7%,进化树分析结果表明RANKL作为机体内调节骨代谢一种重要细胞因子,在进化中高度保守。RANKL基因的成功扩增为深入研究骨质疏松等代谢性骨病的发病机制及防治开辟广阔的领域。试验Ⅱ、chRANKL的原核表达和纯化设计一对引物用于克隆鸡RANKL成熟蛋白编码基因,然后构建鸡RANKL原核表达载体pET-32a(+)-chRANKL,通过IPTG诱导表达重组鸡RANKL成熟蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,原核表达产物为64 kD的重组蛋白,并主要以包涵体形式存在,western blot分析结果显示,表达得到的重组蛋白具有良好的抗原结合活性。试验Ⅲ、chRANKL诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞的研究建立简便有效的鸡胚骨髓破骨样细胞的诱导培养体系,获得高密度高纯度的破骨细胞,为进一步研究笼养蛋鸡骨质疏松症的发病机理奠定基础。剔取18日龄鸡胚胫骨和肱骨,用注射器抽取α-MEM培养液冲洗骨髓腔,获取的细胞悬液接种于培养板。2h后吸取未贴壁细胞,离心重悬,使细胞密度为2×106/mL,接种于培养板,加入诱导剂RANKL和M-CSF,成功获得具有破骨细胞特征的细胞:细胞大,多核;TRAP染色阳性,在骨片表面形成吸收陷窝;这表明chRANKL能诱导鸡破骨细胞前体细胞形成OLC,说明chRANKL在鸡OC分化、成熟过程中起重要作用。但加入chOPG后,则大大降低了OLC的形成以及OLC的骨吸收作用,表明chOPG阻断了RANKL介导的OC分化和骨吸收作用。试验Ⅳ、chRANKL在毕赤酵母中的表达和生物学活性研究设计另一对引物用于克隆鸡RANKL成熟蛋白编码基因,然后构建鸡RANKL真核表达载体pPICZa-A-chRANKL,以电穿孔法转化酵母X-33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物,表达产物相对分子量为54kDa,表达量约为220mg/L,经Western印迹验证,表达得到的蛋白能够与抗人RANKLIgG反应,表明通过酵母表达得到的蛋白具有较好的免疫原性。试验V、chRANKL酵母冻干产物体内、体外对成熟破骨细胞的影响50羽青年ISA蛋鸡分为5组,A组为对照组,只注射生理盐水,B、C、D、E组分别注射剂量为0.01 mg/kg,0.05 mg/kg,0.1 mg/kg,0.5 mg/kg的RANKL酵母表达冻干产物水溶物。2h后静脉采血,测定血浆钙离子浓度。同时将浓度为2 ng/mL,6ng/mL,10 ng/mL分别加入体外培养的成熟破骨细胞中,培养第3d观察骨吸收陷窝的变化,并测定培养液中钙离子浓度。结果表明,体内注射RANKL后,血浆钙离子浓度升高,且呈剂量依赖性增加。不同浓度的RANKL加入到体外培养的成熟破骨细胞能使骨吸收指数和骨吸收陷窝面积均呈剂量依赖性增加,同时钙离子浓度也有显着差异。结论:RANKL除了能诱导形成破骨样细胞外,也能刺激成熟破骨细胞,使之骨吸收功能增强。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

核因子受体激活物配基论文参考文献

[1].钱永,危由春,曹钟义,严俊峰,张行伟.核因子κB受体激活因子配基在成釉细胞瘤中的表达及意义[J].江苏医药.2013

[2].王艳.鸡核因子-κB受体激活物配基(chRANKL)基因的克隆、表达及生物学活性研究[D].南京农业大学.2008

[3].王宝利.1、核因子—κB受体激活物配基(RANKL)反义RNA影响破骨细胞样细胞生成的研究2、小鼠RANKL活性区cDNA克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达3、人护骨素(OPG)成熟肽基因酵母表达载体的构建[D].天津医科大学.2002

论文知识图

破骨细胞形成分化调节

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