导读:本文包含了抗原性检测论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:斑点叉尾鮰,海豚链球菌,兼职蛋白,原核表达
抗原性检测论文文献综述
刘韬,陈德芳,段靖,王二龙,王亚军[1]（2018）在《海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测及免疫效果评价》一文中研究指出为检测斑点叉尾鮰源海豚链球菌兼职蛋白(fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10_RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(r FBA),制备了兔抗r FBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,海豚链球菌DX09 fba基因有1个882 bp的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸。生物信息学分析显示,其分子式为C_(1378)H_(2172)N_(368)O_(422)S_8,分子质量为30.9 ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100%;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位。SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47 ku。Western blot分析表明,兔抗r FBA血清能特异性结合菌体蛋白。同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55%,免疫后鱼体抗体水平相对对照组显着升高。本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09 rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值。(本文来源于《水产学报》期刊2018年09期）
孙卫平,吴倩倩,范伟伟,张剑,李超龙[2]（2017）在《2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测》一文中研究指出目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis 2致病过程中的作用奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2017年04期）
王安平,朱善元,王永娟,吴双,左伟勇[3]（2015）在《鸭源新城疫病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及抗原性检测》一文中研究指出为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒NP蛋白质,首先根据鸭源新城疫病毒NP基因序列设计引物,扩增出NP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体p Fast Bac1,获得重组转移载体p Fast Bac-NP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-NP,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒NP蛋白质。Western blot、间接免疫荧光试验结果均显示表达的重组蛋白质能够与全病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。以上结果说明鸭源新城疫病毒NP蛋白质在昆虫细胞中获得了成功表达。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年06期）
刘家星,汪开毓,陈德芳,刘韬,贺扬[4]（2016）在《罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白EF-Tu的克隆、表达及其抗原性检测》一文中研究指出为检测罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白EF-Tu(延伸因子Tu,Elongation Factor Tu)的抗原性,本实验克隆了罗非鱼源无乳链球菌HN0303的EF-Tu基因序列,并进行了蛋白相关性质的预测和系统发育树的构建。通过原核表达得到EF-Tu重组蛋白,同时利用纯化的蛋白免疫家兔获得多克隆兔抗EF-Tu重组蛋白血清以用于EF-Tu蛋白抗原性检测。结果显示,罗非鱼源无乳链球菌HN0303 EF-Tu基因有1个由1197个碱基组成的ORF,编码398个氨基酸。生物信息学分析显示其分子式为C_(1933)H_(3096)N_(532)O_(615)S_(11),分子质量为43.981 ku,理论等电点为4.749;具有多个磷酸化位点,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的EFTu结构域、EF-Tu-II结构域和EF-Tu-Ⅲ结构域,且与其他来源无乳链球菌的EF-Tu蛋白具有很高的同源性;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位。SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为66.4 ku。Western Blot分析表明,兔抗EF-Tu重组蛋白血清能分别特异性结合菌体蛋白和EF-Tu重组蛋白。同时使用兔抗EF-Tu重组蛋白血清封闭罗非鱼源无乳链球菌HN0303表面的EF-Tu蛋白后,无乳链球菌HN0303粘附EPC(Epithelioma papulosum cyprini,鲤鱼上皮细胞)的能力下降了79.99%±2.43%。本研究表明,原核表达的罗非鱼源无乳链球菌EF-Tu重组蛋白具备较好的抗原性,用其制备的兔抗血清能够较好地抑制罗非鱼源无乳链球菌的粘附,推测其可能为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的候选蛋白。(本文来源于《水产学报》期刊2016年03期）
潘延乐,汪开毓,王均,肖孟玮,李岚敏[5]（2015）在《鮰爱德华菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其抗原性检测》一文中研究指出根据GenBank中鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)外膜微孔蛋白N(outer membrane porin protein,OMP)基因序列(NC_012779.2)设计引物,以鮰爱德华菌Ms12基因组DNA为模板,经PCR扩增后克隆至pMD19-T载体,将阳性克隆菌送公司测序。测序结果通过生物信息学软件对ompN1、ompN2和ompN3序列的氨基酸序列相对分子质量、分子式、信号肽、跨膜区、亲/疏水性、B细胞表位进行预测,并构建系统发育树;根据去信号肽的B细胞表位相对集中区域设计特异性引物,经PCR扩增后,将截段序列克隆至pMD19-T载体,鉴定成功后克隆至原核表达载体pET32a(+)并转化至BL21(DE3)/Rosseta(DE3)进行IPTG诱导表达,最后用兔抗鮰爱德华菌血清对重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3进行免疫原性检测。结果显示扩增得到ompN1(1 143bp)、ompN2(1 056bp)和ompN3(1 053bp)的序列,获得的基因登录号分别为KJ831564、KJ831565和KJ831566。经生物信息学分析显示,OmpN1、OmpN2和OmpN3蛋白分子式分别为C1940H2993N543O622S7、C1817H2723N497O579S5和C1896H2843N519O563S7,相对分子质量大小分别为44 100、40 900和41 800,均为含有1个信号肽和跨膜区的疏水性蛋白,具有1个革兰阴性细菌OM_channels超家族结构域,是1种嵌入型的膜外蛋白;SDS-PAGE电泳检测发现,诱导表达的融合重组蛋白均以包涵体的形式出现在沉淀中,大小分别约为61 800、58 700和59 100;Western-blot分析表明,重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3均能与兔抗鮰爱德华菌全菌血清结合,表明鮰爱德华菌外膜微孔蛋白N具有亚单位疫苗开发的潜力。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2015年06期）
付丽君,李巍,谢晓峰,唐颖,李晓云[6]（2013）在《绵羊肺腺瘤病毒CA基因的原核表达及抗原性检测》一文中研究指出绵羊肺腺瘤病(OPA)于1850年发现,但国内外至今尚未建立绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的体外培养方法及快速有效的实验室检测方法。为表达JSRV的衣壳蛋白(CA)基因,本研究根据JSRV CA基因编码序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆至pEASY载体中进行测序,并构建重组表达质粒pET-CA,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。重组蛋白经SDS-PAGE检测约为28 ku,主要以可溶形式表达。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。以制备的抗血清对重组蛋白及病毒进行western blot鉴定。结果显示,该抗血清能够识别重组蛋白及天然的JSRV。本研究首次原核表达了完整的CA重组蛋白,并制备了能够与天然JSRV结合的抗CA蛋白的抗血清,为进一步建立JSRV ELISA方法奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2013年08期）
蔡家麟,潘欣,王颖,陈敏,廖万清[7]（2013）在《结核分枝杆菌融合抗原Rv3914-6His的原核表达、纯化与抗原性检测》一文中研究指出血清学诊断是目前临床诊断中应用最为广泛的方法之一,用原核表达并鉴定了系列结核分枝杆菌抗原融合蛋白Rv1908c-6His、Rv0733-6His、Rv0899-6His、Rv1411c-6His和Rv3914-6His,并以此包被酶标板,以Rv2031c-6His为阳性对照,采用间接ELISA方法比较了34例活动性结核病患者与35例健康体检者血清中抗结核分枝杆菌抗原的IgG水平。结果显示,活动性结核病患者中针对Rv1411c-6His、Rv3914-6His和Rv2031c-6His的IgG水平明显高于健康体检者,其中Rv3914-6His的AUC值(0.786 7)略高于目前临床应用的类似于16 ku的抗原Rv2031c-6His(AUCRv2031c=0.754),提示Rv3914抗原可能是结核病血清诊断的新的候选标志物。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2013年03期）
王光华,叶成玉,蔡其刚,王戈平,陆艳[8]（2013）在《青海牦牛BVDV E0基因的表达与抗原性检测》一文中研究指出将青海牦牛病毒性腹泻病毒(BVDV)QHZK株的E0基因亚克隆入原核表达载体pET-32(α),构建了重组表达载体pET-32(α)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达。表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,E0基因可在大肠杆菌中获得表达,表达产物的分子质量约为44ku,与预计的蛋白分子质量大小一致。Western-blot分析表明,该蛋白可以与BVDV标准阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为BVDV亚单位疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2013年04期）
曹琛福,虞建雄,杨俊兴,阮周曦,曾少灵[9]（2013）在《猪水泡病病毒VP1重组蛋白的表达及抗原性检测》一文中研究指出本研究利用猪水泡病病毒外壳蛋白VP1基因和pGEX-4T-1质粒成功构建重组质粒pGEX-4T-1-VP1,并转入BL21(DE3)表达菌中,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE凝胶电泳实验和考马斯亮蓝染色,结果显示在57KDu处出现特异性表达条带。经免疫印迹试验证实本研究所表达的重组蛋白VP1具有抗原性,可为利用重组蛋白VP1建立间接ELISA方法检测猪水泡病奠定基础。(本文来源于《上海畜牧兽医通讯》期刊2013年02期）
马小丽[10]（2011）在《幽门螺杆菌CagA和VacA重组蛋白的表达、纯化及抗原性检测》一文中研究指出目的：构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)细胞毒素相关基因A(Cytotoxin associated gene A, CagA)和空泡细胞毒素(Vacuolating cytotoxin A, VacA)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白,为检出幽门螺杆菌致病株和运用于临床检测Hp的感染奠定基础。方法：挑选CagA基因和VacA基因的优势抗原表位片段,收集H. pylori标准株NCTC11639,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断,将其分别克隆到克隆载体pGEM-T和pMD18-T载体并测序,构建重组质粒pGEM-T/CagA和pMD18-T/VacA,将鉴定正确的重组质粒进行双酶切,把目的基因克隆入表达载体pET-16b,构建重组表达载体pET16b/CagA与pET16b/VacA。转化至大肠杆菌E. Coli Rosetta后诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化,并透析复性后,ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA的免疫原性。结果：PCR扩增结果表明分别得到了大小约为1962bp和2256bp的目的片段；构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证明其中插入片段分别为CagA和VacA的目的基因,测序结果与Genbank上登录序列比对后,结果完全一致；SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,重组工程菌表达了一相对分子量(Mr)约为75KDa和87KDa的目的蛋白条带,表达量占细菌总蛋白的20%,镍亲和层析纯化率约90%；目的蛋白在菌体细胞内主要以可溶性蛋白和包涵体形式存在,经间接ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA具有一定免疫原性。结论：成功构建了pET16b/CagA、pET16b/VacA2个原核表达重组体,将其分别转化至大肠杆菌后,分别表达出了相对分子量(Mr)约为75KDa和87KDa的CagA和VacA重组蛋白,间接ELISA法检测重组蛋白CagA、VacA具有较好的免疫反应性,其中CagA蛋白的免疫反应性较VacA的强些,为H.pylori蛋白质疫苗的研制和以基因工程抗原为基础快速诊断试剂盒的研究打下了基础。(本文来源于《郑州大学》期刊2011-04-01）
抗原性检测论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis 2致病过程中的作用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原性检测论文参考文献
[1].刘韬,陈德芳,段靖,王二龙,王亚军.海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测及免疫效果评价[J].水产学报.2018
[2].孙卫平,吴倩倩,范伟伟,张剑,李超龙.2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测[J].中国病原生物学杂志.2017
[3].王安平,朱善元,王永娟,吴双,左伟勇.鸭源新城疫病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及抗原性检测[J].江苏农业学报.2015
[4].刘家星,汪开毓,陈德芳,刘韬,贺扬.罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白EF-Tu的克隆、表达及其抗原性检测[J].水产学报.2016
[5].潘延乐,汪开毓,王均,肖孟玮,李岚敏.鮰爱德华菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其抗原性检测[J].中国兽医学报.2015
[6].付丽君,李巍,谢晓峰,唐颖,李晓云.绵羊肺腺瘤病毒CA基因的原核表达及抗原性检测[J].中国预防兽医学报.2013
[7].蔡家麟,潘欣,王颖,陈敏,廖万清.结核分枝杆菌融合抗原Rv3914-6His的原核表达、纯化与抗原性检测[J].微生物学杂志.2013
[8].王光华,叶成玉,蔡其刚,王戈平,陆艳.青海牦牛BVDVE0基因的表达与抗原性检测[J].中国兽医杂志.2013
[9].曹琛福,虞建雄,杨俊兴,阮周曦,曾少灵.猪水泡病病毒VP1重组蛋白的表达及抗原性检测[J].上海畜牧兽医通讯.2013
[10].马小丽.幽门螺杆菌CagA和VacA重组蛋白的表达、纯化及抗原性检测[D].郑州大学.2011