一、HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进(英文)（论文文献综述）
柴欣秀[1]（2021）在《融合蛋白ABD-Fc-IL-2的载体构建、异源表达纯化及体外生物学活性和体内药效动力学的研究》文中指出目的:构建SP-ABD-Fc-IL-2基因片段,经双酶切后连接到载体质粒pcDNA3.1（+）上。将重组质粒瞬时转染到CHO-S细胞中进行外源性表达,通过r Protein A beads进行亲和层析纯化。分析融合蛋白对CTLL-2细胞活性以及HSA蛋白的相互作用来验证其体外生物活性。将融合蛋白注入小鼠体内进一步分析其半衰期的药效动力学。方法:1.设计并构建重组基因SP-ABD-Fc-IL-2,双酶切后连接到载体质粒pcDNA3.1（+）上,重组质粒进行双酶切检测和测序分析;2.将pcDNA3.1（+）/SP-ABD-Fc-IL-2质粒转染到CHO-S细胞中,收集上清使用r Protein A beads进行亲和层析纯化;3.通过SDS-PAGE和Western blot对融合蛋白ABD-Fc-IL-2及Fc-IL-2进行定性定量分析;4.采用MTT比色分析法,测定融合蛋白ABD-Fc-IL-2及Fc-IL-2对CTLL-2细胞的增殖量的影响,确定其生物学活性;5.通过Ni-Pull down-Western blot条带分析融合蛋白中ABD片段与HSA蛋白间的相互作用;6.将两种融合蛋白分别注射到小鼠体内,采集各个时间点的血清,通过ELISA双抗体夹心法来计算分析出血清中两种融合蛋白浓度,对其半衰期药效动力学研究。结果:1.重组质粒pcDNA3.1（+）/SP-ABD-Fc-IL-2的双酶切和测序分析结果表明用于表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2的质粒已构建成功;2.融合蛋白ABD-Fc-IL-2及Fc-IL-2的SDS-PAGE和Western blot分析表明融合蛋白能在CHO-S细胞中表达进行表达,并且用rprotein A beads亲和层析法可获得纯度很高的融合蛋白;3.采用MTT比色分析法可知融合蛋白ABD-Fc-IL-2和Fc-IL-2促进了CTLL-2细胞的增殖,保留了IL-2的生物学活性;4.Ni-Pull down-Western blot结果分析显示融合蛋白ABD-Fc-IL-2中ABD片段与HSA蛋白相互结合的构象未发生修饰;5.ELISA双抗体夹心法定量分析小鼠血清中的融合蛋白的浓度,分析数据可得融合蛋白ABD-Fc-IL-2的半衰期比融合蛋白Fc-IL-2的长。结论:1.成功构建了pcDNA3.1（+）/SP-ABD-Fc-IL-2质粒;2.纯化的融合蛋白ABD-Fc-IL-2具有生物活性;3.融合蛋白ABD-Fc-IL-2的延长了血浆半衰期。
杨颖[2]（2021）在《白术多糖的分离纯化与结构解析及其对急性酒精性肝损伤保护作用研究》文中研究表明本论文的原料是由陕西来森特生物科技有限公司按照水提醇沉工艺代工生产的白术粗多糖（BZCP）,研究首先对BZCP进行脱色、阴离子交换层析及透析处理制得含量为97.12%的白术精制多糖产物（BZJP）,利用化学与仪器分析等多种手段,解析了 BZJP一级结构,为聚木葡甘露多糖结构。利用动物实验和细胞培养技术手段验证了该产物缓解酒精性肝损伤作用,并在此基础上,进一步采用分子对接技术探讨了可能的药效作用机制。支撑本论文的主要研究内容包括以下几个部分:1.白术多糖的分离纯化采用单因素考察结合正交试验的方法对BZCP大孔树脂脱色方法进行优化,确定了大孔树脂脱色最佳工艺:大孔树脂类型为HPD600、样品浓度为25 mg/mL、样品pH为6、脱色温度为75℃、脱色时间为6h,在此条件下,多糖脱色率和保留率可分别高达79.75%和80.31%,多糖从深褐色转变为浅黄色。白术脱色多糖（BZTP）经DEAE Cellulose-52离子交换柱层析处理,再透析后,得到含量为97.12%的白术精制多糖（BZJP）。2.白术精制多糖结构鉴定采用苯酚硫酸法和考马斯亮蓝法对BZJP多糖含量和蛋白质含量分别进行测定,结果表明BZJP多糖含量为97.12%,几乎不含蛋白质。通过高效凝胶渗透色谱法、氨基柱法、PMP柱前衍生化法、气相色谱法、红外光谱法、甲基化分析法、核磁共振波谱等对BZJP进行结构分析。高效凝胶渗透色谱法表明BZJP为单一组分,相对分子质量为5465 Da;氨基柱法、PMP柱前衍生化法及气相色谱法表明BZJP主要由葡萄糖（Glc）、甘露糖（Man）和木糖（Xyl）组成,气相色谱法对其进行摩尔比测定,Glc:Man:Xyl=6.8:3.0:1.0;红外光谱法确定BZJP是含有D-葡萄吡喃环及β-端基差向异构的多糖;甲基化分析确定BZJP糖苷键类型有 5 种,分别为→4)-αGlcp（1→、→6）-αGlcp（1→、→2）-αManp(1→、βXylp（1→和→3）-βXylp(1→,大致推测出BZJP是线性多糖,其中一端为βXylp(1→;核磁共振波谱法进一步推测出 BZJP一级结构式为 βXylp-[（1→3）-βXylp]6-（1→6）-αGlcp-[（1→4）-αGlcp]40-[（1→2）-αManp]12。3.白术脱色多糖对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用研究考察BZTP对酒精性肝损伤小鼠的肝脏保护作用,24只小鼠分为4组,即空白对照组、模型组、低剂量组（100mg/kg）和高剂量组（400mg/kg）,灌胃给药8天,末次给药2 h后,除正常对照组灌等量蒸馏水外,其余各组灌服50%酒精12 mL/kg造成急性酒精性肝损伤模型,12 h后取材,测定血清谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）及甘油三酯（Triglyceride,TG）;测定肝脏匀浆丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase,GSH-Px）;测定肝脏指数并观察组织病理学。结果显示,白术多糖能显着抑制急性酒精性肝损伤所引起的血清AST、ALT和TG的升高、有效逆转肝损伤所引起的肝脏指数的升高、降低肝脏中MDA含量的升高、提高SOD和GSH-Px活性的降低。结论:白术多糖对酒精诱导的小鼠急性肝损伤有较好的保护作用,能缓解小鼠的肝损伤。4.白术精制多糖对乙醇诱导的L-02人正常肝细胞损伤的保护作用研究（1）旨在筛选出酒精最佳造模条件,采用MTT法对酒精造模浓度与时间进行确定。结果表明100 mmol/L的乙醇浓度对肝细胞进行6 h的损伤造模效果最好。（2）旨在筛选出BZJP给药浓度,采用MTT法测定不同浓度BZJP对L-02细胞相对增殖率的影响。结果显示,BZJP终浓度在0～800 μg/mL内作用24h对L-02人肝细胞没有显着增殖抑制作用。结合其他文献中多糖作用浓度范围,最终选择50、100、200μg/mL三个BZJP浓度作为低、中、高三个剂量进行后续细胞实验研究。（3）考察BZJP对乙醇诱导的L-02肝细胞损伤的保护作用。对不同浓度BZJP预孵育不同时间的药效学进行评价,以细胞培养上清液中ALT和AST及相应的氧化应激指标MDA、SOD及GSH-Px为评价指标,从而评价BZJP对肝细胞受乙醇氧化损伤的保护效应。结果表明,BZJP对肝损伤引起的上述指标变化均有显着改善,高剂量预孵育1h作用效果更好。5.基于分子对接技术探讨BZJP对急性酒精性肝损伤保护作用机制研究采用分子对接技术对白术多糖抗酒精性肝损伤保护作用机制进行初探。对BZJP经胃肠道可能的降解产物与肝实质细胞上特异性受体去唾液酸糖蛋白受体（Asialoglycoprotein receptor,ASGPR）以及肝脏枯否细胞（Kupffer cells,KC）上的甘露糖受体（Mannose receptor,MR）进行分子对接,研究发现不同寡糖与两个受体均有不同程度的作用,主要影响因素为寡糖聚合度以及单糖组成。因此,BZJP抗酒精性肝损伤作用机制之一很有可能是:BZJP经胃肠道可能的降解产物与ASGPR和/或MR结合进入肝脏发挥作用。
于忠芳[3]（2020）在《自噬在硫酸化银杏叶多糖体外诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究》文中研究表明肝癌是人类和动物常发的恶性肿瘤性疾病,其中肝细胞癌（HCC）在临床上的发病率最高,约占肝癌总发病率的70%-90%。目前,对于HCC的治疗主要采取姑息性手术治疗、化学药物治疗等方法,虽然这些方法具有一定的治疗效果,但同时具有高风险、毒副作用大、对机体损伤严重等弊端。因此,开发治疗HCC的天然新药物、提高药物作用于HCC的敏感性,是当前抗肿瘤药物研发的重点。银杏叶多糖（GBLP）是从银杏叶中提取出来的一种活性成分,它具有调节免疫、抗肿瘤、抗氧化等多种生物学活性。有研究表明,经硫酸化分子修饰后,许多中药多糖的抗肿瘤活性明显增强。因此,本研究采用氯磺酸-吡啶法制备了硫酸化银杏叶多糖（SGBLP）,以肝癌HepG2细胞为试验模型,检测了SGBLP对HepG2细胞细胞活性、主要凋亡蛋白和自噬蛋白及信号转导通路PI3K/AKT/mTOR的影响。主要研究结果如下:1.采用水提醇沉法从银杏叶干粉中提取银杏叶粗多糖,经过脱蛋白、除色素、透析等一系列处理得到精制银杏叶多糖,苯酚-硫酸法测得多糖含量为84.66%,考马斯亮蓝法测得蛋白含量为0.561%,然后用氯磺酸-吡啶法对GBLP进行硫酸化分子修饰,氯化钡-明胶比浊法测得硫酸基取代度为2.7。2.将不同浓度的GBLP溶液与HepG2共孵育24h、48h和72h,MTT试验结果显示,随着SGBLP浓度的升高,作用时间的延长,HepG2细胞活力逐渐降低,并且呈时间-剂量依赖关系,结果表明SGBLP对HepG2增殖具有明显的抑制作用。3.采用免疫印迹技术（Western Blot）检测不同浓度的SGBLP作用HepG2细胞48h后,自噬相关蛋白LC3、p62、以及Beclin1的表达水平,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的变化以及信号通路蛋白p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达情况。试验结果显示,随着SGBLP浓度的不断增加,自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白表达量升高,p62表达量降低;凋亡相关蛋白Bax表达量升高,Bcl-2表达量减少;信号通路蛋白总AKT和mTOR蛋白表达量变化不明显,而p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达量随SGBLP浓度的升高而降低。结果表明SGBLP可以诱导HepG2细胞自噬和凋亡,且PI3K-AKT-mTOR信号通路参与了该过程。4.在对HepG2细胞给予不同浓度SGBLP作用前,先用自噬抑制剂3-MA预处理HepG2细胞1h,从而抑制HepG2细胞自噬的发生。分别用MTT法检测HepG2细胞活力,以Western Blot技术检测中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达量的变化。结果显示,3-MA预处理后加入SGBLP组,与单纯的SGBLP组相比,细胞活性显着降低,抗凋亡蛋白表达减少,促凋亡蛋白表达增加。这表明抑制自噬后,可以增强SGBLP对HepG2细胞的增殖活性的抑制,促进HepG2细胞的凋亡。
项婷[4]（2020）在《蛹虫草中核苷类化合物的分离鉴定及其对人肝癌HepG2细胞的抑制作用研究》文中认为肝癌（Hepatic carcinoma）是常见的恶性肿瘤之一,由于发病率高、发病隐匿,晚期化疗药物毒副作用大等特点,患者的治愈率普遍偏低且愈后不佳。因此,从天然产物中分离提取安全、高效的活性成分,用以研发肝癌预防、治疗和愈后调理的新产品,已然成为国内外的研究热点。蛹虫草（Cordyceps militaris（L.）Link）是虫草真菌侵染昆虫幼虫或昆虫蛹而形成的子实体,研究表明,蛹虫草提取物（Cordyceps militaris extract,CME）具有广谱抗肿瘤活性,且该功效与其富含核苷类化合物密切相关。本文以蛹虫草为原料,采用正交实验法优化核苷类化合物的提取工艺,通过制备液相分离纯化获得四种单体化合物,再利用超高效液相色谱-三重四级杆飞行时间质谱（UPLC/Q-TOF/MS）、核磁共振波谱法（Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy,NMR）对未知物进行结构鉴定,最后以HepG2细胞为模型,对化合物Ⅰ（PTUh）、化合物Ⅱ（PTGh）和虫草素的抗肿瘤能力进行比较,并初步推断PTUh与PTGh的抗肿瘤机制。本文研究结果如下:（1）以虫草素提取率为指标,采用正交法优化提取条件,并综合考量提取液稳定性,确定蛹虫草中核苷类化合物的最佳提取工艺为:1%醋酸水溶液浸提,料液比为1:30,提取温度为40℃,提取时间为40 min,经此提取工艺得到的虫草素提取率为87.33%±3.83%。（2）比较C18和C18-HCE两种液相色谱柱对蛹虫草粗提液中各组分的分离效果。结果显示:C18色谱柱的选择性和分离度较差,但能有效保留虫草素和腺苷,可用于一次制备;C18-HCE色谱柱对粗提液中的6种化合物具有较高的分离度,可用于二次制备,分离虫草素和腺苷以外的核苷类化合物。（3）运用高效制备液相法,经一次制备从蛹虫草粗提液中分离得到虫草素和腺苷,经二次制备分离得到PTUh和PTGh,色谱纯度分别为98.11%、90.49%、96.34%和98.33%。利用UPLC/Q-TOF/MS、NMR对PTUh和PTGh进行结构鉴定,确定两者皆为氨基酸及其衍生取代的核苷类化合物。经Sci Finder数据库比对,证实PTGh为新化合物。（4）采用MTT比色法和细胞划痕实验,分析虫草素、PTUh和PTGh对人肝癌HepG2细胞相对活力以及横向迁移能力的影响。结果表明:三者均可有效降低HepG2细胞活力,抑制细胞增殖,且呈时间-剂量依赖;给药72 h后,虫草素、PTUh和PTGh对HepG2细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.24 m M、0.09 m M和0.51 m M;相同时间范围内,三者均能抑制HepG2细胞横向迁移,且呈浓度依赖,其中,虫草素抑制效果最佳,PTUh和PTGh次之。（5）采用流式细胞仪分析人肝癌HepG2细胞凋亡与细胞周期分布情况。结果显示:给药48 h后,0.20 m M的虫草素、0.20 m M的PTUh和0.20 m M的PTGh分别将细胞的总凋亡率从4.75%极显着地提升至29.81%、29.15%和13.13%（p<0.01）;虫草素、PTUh和PTGh均可延缓细胞周期,从而有效抑制HepG2细胞增殖,其中,PTGh可造成细胞周期的G0/G1期阻滞,虫草素和PTUh则可造成G2/M期阻滞。（6）线粒体膜电位（mitochondrial membrane potentia,MMP）测定和实时荧光定量PCR技术（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）检测结果显示:虫草素和PTUh可极显着降低HepG2细胞的MMP（p<0.01）,且呈剂量依赖,其中,PTUh的作用效果优于虫草素;PTGh对HepG2细胞MMP影响较小;虫草素、PTUh和PTGh均可明显上调Fas、Cyt C、p53、caspase-9、caspase-8和caspase-3等凋亡相关基因的表达量,并提高Bax与Bcl-2基因表达量的比值,有效促进HepG2细胞凋亡。综上,采用C18和C18-HCE两种制备型色谱柱,运用高效液相制备法可以同时制备蛹虫草中多种核苷类化合物,且一步制备即得高纯度的虫草素。经体外细胞实验证实,从蛹虫草中分离纯化得到的PTUh和PTGh均具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,尤其是PTUh,其促进HepG2细胞凋亡的能力与虫草素相当。根据实验结果推断PTUh和PTGh的抗肿瘤具体机制为:诱导肿瘤细胞凋亡,分别阻滞细胞周期于G2/M期和G0/G1期,调控内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径相关基因的表达。本文的研究结果为蛹虫草在肝癌的预防、治疗及愈后调理等方面的应用开发提供理论依据。
阚连宝[5]（2020）在《高粱乌米多糖提取纯化及对消化系统癌细胞抑制作用研究》文中提出据ACancer Journal for Clinicians报道,2018年全球范围内将会有1810万癌症新发病率和960万癌症死亡病例,相比于其他国家,我国癌症发病率、死亡率均为全球第一。在1810万新增癌症病例中,我国占380.4万例;在960万癌症死亡病例中,我国占229.6万例。国际上许多化疗药物既杀伤肿瘤细胞,也损伤正常细胞,而多糖是一种能够杀伤肿瘤细胞且增加机体免疫功能的生物活性物质,因此多糖就成为国内外研究的热点之一。高粱乌米（Sporisorium reilianum）是一种植物病原真菌,高粱乌米具有多种生物学活性,高粱乌米活性成分（多糖）也被证明具有抗肿瘤、抗氧化等作用。本文从高粱乌米子实体中分离纯化得到中性多糖级分（WM-N）和酸性多糖级分（WM-A）,而酸性多糖级分得率与糖含量极低且难于纯化,故本文主要针对均一级分中性多糖的结构和生物活性展开研究,包括以下几方面:（1）本文利用热水浸提乙醇沉淀方法从高粱乌米子实体中提取高粱乌米粗多糖（WM）,经DEAE-纤维素离子交换柱层析分级、膜分离和醇沉纯化等分离纯化后获得均一级分的多糖,命名为WM-NP-60。采用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定分子量,使用高效液相色谱法（HPLC）法分析单糖组成,多糖WM-NP-60分子量为15.6 kDa,且由Glc（93.3%）和Gal（6.7%）组成;紫外光谱显示多糖级分中不含蛋白质和核酸。多糖WM-NP-60的旋光度为右旋0.049。红外光谱（FT-IR）分析表明其具有吡喃糖结构。通过高碘酸氧化、Smith降解、核磁共振谱（1D/2D NMR）和甲基化法对多糖WM-NP-60的表征分析,我们可以推测出多糖WM-NP-60的结构是以β-1,6-D-Glcp作为主链,约3%主链上的糖基在3位形成分支连接侧链,侧链以线性β-1,3-D-Glcp为主,Gal可能多以末端形式作为侧链连接在主链上,或者连接在线性β-1,3-D-Glcp侧链上。（2）多糖WM-NP-60抗氧化作用研究结果显示,多糖WM-NP-60都具有显着地清除DPPH（1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl）自由基、羟基自由基（·OH）、超氧负离子（O2-·）和过氧化氢（H2O2）的能力,螯合二价铁离子Fe2+和抑制邻苯三酚自氧化的能力,以及出色的还原力,表明其具有良好的抗氧化活性。（3）MTT实验证明多糖WM-NP-60对HepG2、SGC7901和HCT116细胞的抑制作用呈现浓度和时间依赖效应,且对HCT116细胞抑制作用最为显着;多糖WM-NP-60能够阻滞HepG2、SGC7901和HCT116细胞周期于G1期,从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡;荧光显微镜方便而直接地检测到磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）的外翻这一细胞凋亡的重要特征;透射电镜观察HepG2、SGC7901和HCT116细胞凋亡形态特征,可见典型的凋亡小体。（4）利用 TMT（Tandem Mass Tags）和 2D-LC-MSMS 技术鉴定分析了多糖 WM-NP-60处理对HCT116细胞中蛋白表达的影响,369个蛋白被鉴定为差异表达蛋白（Differentially Expressed Proteins,DEPs）,其中下调有 129 个,上调有 240 个;并进行了相应的生物信息学分析,发现 KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路富集到15项差异显着的代谢通路（P<0.05）,其中Focal adhesion信号通路和TGF-β信号通路跟细胞周期和细胞凋亡相关;PPI（Protein-Protein Interaction）分析表明6个差异表达蛋白都处在关键节点上,qRT-PCR和Western blot验证实验发现在TGF-β信号通路上,多糖WM-NP-60上调了TGFβR1、p107和DP1基因表达,并下调了THBS1基因表达,从而阻滞细胞周期于G1期,抑制了 HCT116细胞增殖并诱导其凋亡;在Focal adhesion信号通路上,多糖WM-NP-60能上调ITGA7和Rap1基因,从而阻滞细胞周期于G1期。本研究首先利用热水浸提乙醇沉淀方法,从高粱乌米子实体中提取纯化得到均一多糖WM-NP-60;然后对多糖WM-NP-60的结构特征进行分析,推测出多糖WM-NP-60的结构;并研究证明多糖WMNP-60的抗氧化作用和对HepG2、SGC7901和HCT116细胞的抑制并诱导其凋亡;最后采用TMT和2D-LC-MSMS技术分析鉴定差异表达蛋白,结合细胞周期、细胞凋亡、生物信息学和相关蛋白验证实验推测多糖WM-NP-60抗肿瘤的分子机制。
刘金虎[6]（2019）在《磷酸壳寡糖脂质体的构建及用于骨肉瘤治疗的体内外研究》文中研究表明骨肉瘤（OS）是在青少年中常见的一种原发性恶性骨肿瘤,易发生肺转移,预后差。目前常规的治疗方法为新辅助化疗结合手术治疗。然而,在新辅助化疗模式下,药物通常缺乏组织选择性,故需要大的治疗剂量,却因此对病人产生严重的副作用。为了降低化疗药物所带来的药物毒副作用或者相应提高疗效,有必要开发专门靶向于OS的药物传递系统,以期减少药物向正常组织的分布。本研究以提高化疗药在骨中的浓度以及对OS的靶向性为目的,利用磷酸壳寡糖（PCS）与羟基磷灰石（HAp）之间有特异亲和性的特点,设计了PCS修饰的纳米脂质体。以阿霉素（DOX）为模型药物,然后对脂质体的理化性质、细胞摄取与毒性、体内骨靶向及药代动力学等分别进行了研究。为研究新型的骨靶向纳米药物载体提供了新的思路。本文主要从以下方面进行了研究:1、PCS-Chol的合成与表征PCS可能是潜在的骨靶向分子。为了提高对脂质体的修饰效率,我们在该聚合物上引入了疏水的Chol部分。首先,分两步合成了PCS-Chol两亲性接枝聚合物。其中,第一步是以壳寡糖（CS）与胆固醇琥珀酸单酯（CHEMS）为原料,利用它们之间氨基和羧基发生的缩合反应,合成出壳寡糖-胆固醇接枝物（CS-Chol）。第二步,以P2O5为原料,对CS-Chol的糖链部分进行磷酸化,得到磷酸壳寡糖-胆固醇接枝物（PCS-Chol）。然后,依次运用红外光谱（FT-IR）和核磁共振(31P-NMR)对这两种聚合物的结构进行了表征,对Chol和磷酸基团的取代度（DS）分别进行了测定。结果表明CS-Chol和PCS-Chol上Chol的取代度相差不大（分别为90.9%和82.0%）,PCS-Chol上磷酸基团的接枝率为（3.9±0.4）%。2、PCS载药脂质体的制备与表征采用逆相蒸发法制备空白脂质体,然后以硫酸铵梯度法载药,形成阿霉素脂质体（DOX-L）。用后插入法分别以CS和PCS进行修饰后,最终得到了CS修饰的载药脂质体（CS-DOX-L）和PCS修饰的载药脂质体（PCS-DOX-L）。结果表明PCS-DOX-L的粒径为（209.5±0.5）nm,比CS-DOX-L（245.3±2.6 nm）略小;PDI为0.215±0.011;包封率为（85.4±2.2）%。透射电镜（TEM）下观察,这些脂质体外观为规则的球形。以不同pH的PBS（pH=7.4和5）为释放介质,考察它们的体外释放情况。结果表明它们有一定缓慢释药和pH响应的特点。PCS-L对红细胞的溶血率低于CS-L,表明体内安全性更好。3、PCS载药脂质体的体外细胞摄取及细胞毒性研究用MTT法考察了PCS-DOX-L对MG63细胞的毒性。结果表明它的毒性具有时间依赖和浓度依赖的特点。然而,PCS-DOX-L在很大程度上却弱于相同浓度下的CS-DOX-L。运用倒置荧光显微镜考察了MG63细胞对PCS脂质体的摄取情况。结果表明该脂质体能携带DOX进入MG63细胞的细胞核;且摄取过程具有时间依赖性,即随着孵育时间延长,细胞摄取程度增加。相对于DOX溶液,PCS-DOX-L在任意相同时刻的摄取速度更快,然而PCS-DOX-L的荧光强度却弱于CS-DOX-L。此外,细胞流式结果表明CS-DOX-L在任意相同时刻的平均荧光强度略高于PCS-DOX-L,与倒置荧光显微镜的结果一致。原因可能与PCS-DOX-L在弱酸性条件下的加速释药及其所携带的zeta电位偏小有关,这在一定程度上影响了它的细胞毒性与摄取。4、PCS脂质体的组织分布研究首先向裸鼠右肢的胫骨内接种MG63细胞来建立OS疾病模型。然后以DiR为荧光探针,考察各种脂质体在OS小鼠体内的骨靶向性。采取尾静脉注射的途径给药。结果表明,在给药后的最初12 h内,CS-DiR-L和PCS-DiR-L有相似的OS靶向性。然而PCS-DiR-L在肿瘤部位持续的时间更长（至少24 h）,表明它的骨靶向能力比CS-DiR-L更强。该现象可能与CS的磷酸化有关。5、PCS脂质体的药动学研究建立了血浆中DOX浓度的HPLC-MS/MS分析方法,对PCS-DOX-L在大鼠体内的药动学进行了研究。结果为PCS-DOX-L的生物半衰期(t1/2)和平均滞留时间（MRT）与PEG-DOX-L和CS-DOX-L均基本一致,而药时曲线下面积（AUC）则介于其它二者之间。结果表明PCS-DOX-L在体内有较好的缓释、长循环作用及较高的AUC。总之,本研究首次证实PCS是良好的骨靶向分子,所形成的PCS脂质体对OS原位瘤有较强的靶向能力;并且在细胞水平和药动学方面也体现出了一定的特点,为今后骨靶向药物载体的开发及OS的靶向治疗提供了有益的参考。
陈天丽[7]（2019）在《复方参草菌质颗粒制备工艺及其抗肿瘤活性研究》文中提出目的:优化人参-冬虫夏草发酵菌质（参草菌质）的发酵工艺和质量标准,建立复方参草菌质颗粒的制备工艺,揭示复方参草菌质颗粒抗肿瘤活性及其作用机理,以期为复方参草菌质颗粒后续的研究和开发奠定基础,为中药复方抗肿瘤提供新的理论依据。方法:1.采用单因素实验和响应曲面等统计学方法对用冬虫夏草菌发酵人参药材的工艺进行系统优化;采用HPLC-Q-TOF-MS技术对参草菌质中主要皂苷类成分进行辅助定性分析;引入HPLC-QQQ-MS技术中的MRM模式,同时对参草菌质中11个皂苷类成分进行了定量分析;按优选工艺制备10批参草菌质,以确定相应含量测定范围。2.MTT法检测含人参复方与含参草菌质复方对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,通过检测细胞存活率,对比两个复方的抗肿瘤活性。3.采用正交试验等方法对复方参草菌质颗粒的提取及分离工艺、浓缩干燥工艺、制剂成型工艺等进行研究,制备中试样品,并对不同批次的样品进行质量检查。4.药效学研究方面,首先采用MTT法检测不同浓度的复方参草菌质颗粒对A549细胞增殖的抑制作用;通过划痕实验和Transwell实验检测复方参草菌质颗粒对A549细胞迁移和侵袭的调控作用;利用流式细胞仪检测了药物处理后A549细胞周期和细胞凋亡情况;并通过Western Blot实验检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白Caspase3、Bax、Bcl-2的表达及相关通路蛋白TGF-B、smad2、p-smad2、smad3、p-smad3、E-cadherin的表达。进而以接种肺癌细胞的裸鼠为体内模型,检测给药后裸鼠体重和肿瘤体积变化;流式细胞仪检测血液及脾脏细胞中相关表面蛋白CD4、CD8a、CD11b、Ly-6G/Ly-6c的表达。5.采用TMT标记、高效液相色谱分级技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术,对使用复方参草菌质颗粒水溶液处理A549细胞前后的样本进行定量蛋白组的研究。结果:1.建立了稳定的参草菌质制备工艺,参草菌质的平均得率约为69.8%;通过对参草菌质的主要皂苷类成分进行定性和定量分析,发现其中所含11种皂苷Rg1、Re、Rb1、Rh1、Ro、Rd、Rf、Rb2、Rg3、F2和Rg2的平均含量可以分别达到:1.50mg/g、1.32mg/g、0.64mg/g、1.12mg/g、1.79mg/g、3.56mg/g、0.37mg/g、0.48mg/g、0.33mg/g、0.51mg/g和0.70mg/g;确定了相应成分的含量测定范围,规定参草菌质中人参皂苷Rd不得少于0.3%,人参皂苷Rh1不得少于0.1%,人参皂苷Rb1、Re、Rg1总量不低于0.3%,并最终制定了参草菌质的质量标准。2.对比含参草菌质复方和含人参复方处理A549细胞后细胞的存活率,发现含有参草菌质的复方抗肿瘤效果明显优于含有人参的复方;遵循传统中药制剂的制备特点,采用水煎煮法提取,以代表整体效果的总黄酮提取量为考察指标,确定了复方参草菌质颗粒的最佳提取条件和制剂成型工艺,制备的三批中试样品质量符合《中国药典》2015年版四部附录0104颗粒剂项下的有关规定。3.复方参草菌质颗粒能够显着抑制A549肺癌细胞的增殖,当浓度达到100μg/m L时,其作用最为显着（P<0.05）;流式细胞仪检测结果表明复方参草菌质颗粒能抑制细胞进入G1期,同时降低G1/S期,延长G2期,阻止细胞增殖,诱导A549细胞凋亡;肿瘤相关蛋白检测表明复方参草菌质颗粒能有效调节凋亡相关蛋白的表达;提高Caspase3、Bcl-2和E-cadherin的表达,同时降低TGF-β1、Bax的表达。4.复方参草菌质颗粒对A549细胞的迁移和侵袭具有显着的抑制作用（P<0.01）;对A549肺癌皮下移植肿瘤有一定的治疗效果,能有效改变小鼠血液及脾脏细胞中的免疫蛋白细胞CD4和CD8、细胞Ly-6G/Ly-6C和CD11b的变化,且对免疫蛋白和免疫细胞的刺激作用呈剂量依赖性。5.对复方参草菌质颗粒处理前后的A549细胞进行了定量蛋白质组学检测。一共鉴定了5641个蛋白质,其中4569个蛋白质包含定量信息。以1.2倍为差异表达变化阈值,以统计学检验t-test p-value<0.05为显着性阈值,与对照组相比192个蛋白表达发生上调,272个蛋白表达发生下调。对所有鉴定到的蛋白质进行了系统的生物信息学分析（蛋白功能注释）,并且对所有差异表达蛋白进行了功能分类、功能富集及基于功能富集的聚类分析,进而通过免疫组化、反转录PCR的方法验证了复方参草菌质颗粒靶蛋白HDAC3的表达水平。结论:本研究优化了参草菌质的发酵工艺,制定了参草菌质的质量标准,为制剂开发过程中原料的质量控制提供了理论依据;建立了复方参草菌质颗粒的制备工艺,为后续研究和扩大生产奠定了基础;通过细胞水平证实了复方参草菌质颗粒具有抗肿瘤活性,说明了复方参草菌质颗粒在抑制非小细胞肺癌方面作用显着,并通过蛋白质组学进一步阐释了其作用机理,筛选出潜在作用靶点HDAC3,为肺癌的临床治疗提供了新方向。
吴凡[8]（2019）在《靶向SRPK-1的嵌合抗体用于非小细胞肺癌治疗的初步探讨》文中提出目的:非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）是最常见的人类肿瘤之一,以生长快速、易转移、易侵袭和易复发为其特点。有证据表明丝氨酸-精氨酸蛋白激酶-1（serine-arginine protein kinase-1,SRPK-1）的蛋白或m RNA水平在NSCLC组织中上调。然而,SRPK-1的功能和SRPK-1靶向治疗在NSCLC的进展和治疗中仍然知之甚少。本课题的研究目的拟通过基因工程抗体技术构建SRPK-1的嵌合抗体（chimeric antibody of SRPK-1,Chan SRPK-1）,通过体内体外研究证实NSCLC中SRPK-1的表达增加;评价构建合成的Chan SRPK-1对NSCLC治疗效果,探讨Chan SRPK-1治疗后NSCLC的迁移和侵袭是否受到抑制。期望通过这一研究探索Chan SRPK-1作用机制,为NSCLC提供新的治疗思路。方法:（1）通过使用常规方法筛选SRPK-1的抗体靶向,为了增强SRPK-1抗体的稳定性和半衰期,成功构建靶向SRPK-1的嵌合抗体Chan SRPK-1,在大肠杆菌表达体系中稳定表达分泌Chan SRPK-1。（2）通过使用SDS-PAGE凝胶电泳确定Chan SRPK-1;使用ELISA和western印迹分析确定Chan SRPK-1具有对SRPK-1的高亲和力,检测Chan SRPK-1表达水平及其具有与SRPK-1特异性结合的能力。（3）通过使用RT-q PCR分析和ELISA分析检测非小细胞肺癌衍生血管内皮细胞（NSCLCDVECs）和MRC-5细胞中的SRPK-1表达水平变化。（4）通过使用MTT比色法检测Chan SRPK-1对NSCLCDVECs生长的体外作用比较细胞活力。（5）通过不同浓度SRPK-1及Chan SRPK-1处理NSCLCDVECs和MRC-5细胞,比较细胞活力、测定迁移和侵袭,证实SRPK-1对迁移和侵袭的作用;Chan SRPK-1对非小细胞肺癌肿瘤细胞存活力、迁移和侵袭的抑制作用。（6）通过使用ELISA和western印迹分析确定NSCLC模型小鼠体内Chan SRPK-1对迁移相关促进蛋白的表达变化,以及分析Chan SRPK-1对肿瘤细胞松弛素D和G-肌动蛋白的表达水平以及GSK3-β的磷酸化的影响。（7）通过给荷瘤小鼠静脉注射400mg Chan SRPK-1,同时注射相同体积的PBS给对照组小鼠,每天1次注射,持续治疗14天后,分别观察25天至120天,记录荷瘤小鼠生存情况分析Chan SRPK-1治疗携带NSCLC的小鼠的肿瘤细胞生长、生存时间、根除率、转移率。结果:（1）使用SDS-PAGE凝胶电泳确定制备的Chan SRPK-1的分子量为约67.5k Da。另外,使用ELISA和western印迹分析确定Chan SRPK-1与SRPK-1保持高亲和力并且具有与SRPK-1结合的能力。（2）使用RT-q PCR分析和ELISA分析NSCLCDVECs和MRC-5细胞,结果显示NSCLCDVECs中SRPK-1的表达与MRC-5人肺细胞中的表达相比上调;Chan SRPK-1处理以剂量依赖性方式（200-2000mg/ml）中和了SRPK-1的表达;Chan SRPK-1处理也以时间依赖性方式中和了SRPK-1的表达;结果还显示Chan SRPK-1（400mg/ml）从48h起抑制NSCLCDVECs生长。（3）Chan SRPK-1对非小细胞肺癌迁移和侵袭的体外抑制作用结果显示,与MRC-5细胞相比,Chan SRPK-1处理组（200、400和1000mg/ml,48小时）NSCLCDVECs的存活力显着降低;与未处理组相比,SRPK-1的存在显着促进NSCLCDVECs在200、400和1000mg/ml剂量下处理24小时的迁移和侵袭;相反Chan SRPK-1显着抑制NSCLCDVECs的迁移、侵袭并促进凋亡发生。NSCLCDVECs中TCF、MMP、CT1和FBC的m RNA表达水平显着高于Chan SRPK-1处理的细胞中的m RNA表达水平（P<0.01）,Chan SRPK-1和对照组之间迁移促进蛋白的表达存在显着差异（P<0.01）。Chan SRPK-1处理的肿瘤细胞中细胞松弛素D和G-肌动蛋白表达的下调和GSK3-β的磷酸化显着不同。（4）在动物实验发现与对照组相比Chan SRPK-1处理组中的异种小鼠的肿瘤尺寸受到显着抑制;在用Chan SRPK-1治疗之后,长期存活（超过120天）显着增加;与对照小鼠相比,用Chan SRPK-1（每组中n=10）治疗延长携带NSCLC小鼠的存活时间;Chan SRPK-1治疗对荷瘤小鼠起保护作用;与对照组PBS处理的荷瘤小鼠相比,Chan SRPK-1抑制NSCLC肿瘤转移。结论:（1）结果表明通过使用常规方法构建靶向SRPK-1的嵌合抗体Chan SRPK-1,在大肠杆菌表达体系中稳定高水平表达分泌Chan SRPK-1;Chan SRPK-1具有与SRPK-1特异性结合的能力。（2）结果初步证明Chan SRPK-1在体内和体外均明显抑制NSCLC肿瘤生长、迁移和侵袭,能够控制肿瘤转移、延长生存时间、增加根除率。
王天石[9]（2019）在《蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901的抑制及其应用》文中认为蜂王浆别名蜂乳、蜂皇浆。近些年有大量的研究报告表明,蜂王浆具有多种生物活性,如抗肿瘤、抗氧化、增强记忆力、调节免疫力、抗菌、修复组织损伤等。目前大部分学者主要研究蜂王浆的整体功效,而对于某些成分的具体功效报道较少。蛋白质是生物生长发育所需的必需营养素,蜂王浆蛋白是蜂王浆的主要成分,而蜂王浆的重要医疗保健作用和生物学功能,如抗肿瘤、抗氧化、抗菌等,与其中的蜂王浆蛋白密切相关。因此,本研究对不同条件提取出的蜂王浆蛋白进行研究并探究其体外消化产物的抗肿瘤作用,为蜂王浆蛋白在食品、医药领域的发展提供实验依据。1、采用六种方法（水提酸沉法、水提氨沉法、碱提酸沉法、碱提氨沉法、盐提酸沉法、盐提氨沉法）提取蜂王浆蛋白,通过SDS-PAGE凝胶电泳技术分别研究各实验组蛋白亚基组成,氨基酸分析仪测定各实验组蛋白氨基酸含量。SDS-PAGE电泳图显示水提酸沉法提取的蛋白质在52 kDa有三条清晰的条带,水提氨沉法提取的蛋白质在52kDa有两条清晰的条带。碱提酸沉和碱提氨沉所提取蛋白质在31 kDa、52-72 kDa、102-150kDa处有五条清晰的条带,两者亚基分布基本一致。盐提酸沉法,盐提氨沉法所提取的蛋白质分别在52kDa处有四条清晰的条带,两者亚基分布基本一致。六种方法提取的蛋白质中均含有52 kDa主蛋白,且水提酸沉法提取的主蛋白含量最高。氨基酸含量测定结果显示六种提取方法中,两种沉淀方法酸沉法和氨沉法相比,酸沉法的总氨基酸含量、必需氨基酸含量以及非必需氨基酸含量数值均要高于氨沉法;水提酸沉法提取的蛋白质氨基酸总含量和非必需氨基酸含量最高,盐提酸沉所提取的蛋白质必需氨基酸含量最高,碱提酸沉法提取的蛋白E/N,E/T值含量最高。六种方法提取的蛋白中含量较高的五种氨基酸依次为苏氨酸、谷氨酸、精氨酸、门冬氨酸以及缬氨酸。由于碱提酸沉所提取的蜂王浆蛋白种类最为丰富,并且氨基酸含量适中,被筛选为实验用蛋白。2、通过单因素、响应面设计实验对蜂王浆碱溶性蛋白的提取工艺进行优化。在单因素实验基础之上,采用四因素三水平响应面实验确定蜂王浆蛋白最佳提取工艺。结果表明,当温度为38.59℃、料液比为1:8、pH值为10.15、超声时间为84.27 min时蜂王浆蛋白提取率最高为73.78%。利用LC-MS液相色谱质谱联用技术对其进行定性分析,得出该蜂王浆蛋白中共含有63种蛋白质并含有403种肽段。3、根据体外消化模拟实验制备蜂王浆蛋白体外消化模拟产物,水解产物水解度为28.80±1.42%;消化率为72.32±3.30%;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析技术发现蜂王浆蛋白全部被水解成分子量≦1015 kDa的小分子肽。通过倒置显微镜观察蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901的细胞形态的影响;MTT法检测蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞的增殖抑制率;集落形成实验测定其对胃癌细胞的集落形成能力抑制作用;流式细胞术检测蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞周期的影响;Western blot法探讨其影响机制,实验结果显示蜂王浆蛋白体外消化产物使胃癌细胞形态发生皱缩,细胞密度降低,降低其集落形成能力（P<0.05）,对胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用,在体外消化产物浓度为0.2 mg/mL时,24 h和48 h抑制率分别达到54.58±3.48%和62.84±1.98%（P<0.05）。与空白对照组相比,蜂王浆蛋白体外消化产物呈剂量依赖性抑制胃癌细胞SGC-7901细胞增殖,S期细胞减少,从而引起细胞凋亡。且经蜂王浆蛋白体外消化产物诱导后,胃癌细胞中p53表达增高（P<0.05）,PARP-1蛋白表达降低（P<0.05）。4、利用蜂王浆蛋白体外消化模拟产物为主要原料,配以蔗糖、柠檬酸对蜂王浆蛋白口服液进行研制。通过三因素三水平的正交实验确定口服液最佳配制方法为:蜂王浆蛋白体外消化产物冻干粉30%、蔗糖8%、柠檬酸0.2%。经测定,该蜂王浆蛋白口服液感官、理化、微生物指标均符合国家标准。通过MTT法检测蜂王浆蛋白口服液对胃癌细胞SGC-7901的抑制率,发现其具有浓度、时间依赖趋势,48 h抑制率最高为17.97±2.31%。
王菲菲[10]（2018）在《环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究》文中研究说明研究目的环烯醚萜类化合物是一类在天然界中广泛存在的次生代谢产物,具有多种生物学活性,临床用于阿尔茨海默病、抑郁症以及心血管等疾病的治疗。目前研究认为,这些疾病的发生与机体内氧化应激水平有着密切的关系。氧化应激是指机体内氧化-还原体系失衡,产生过剩的不能被身体消除的自由基（ROS或RNS）。细胞内过量的ROS会诱发多种疾病。本文通过研究环烯醚萜类化合物降低机体氧化应激作用,探讨此类化合物的活性作用机制及其构效关系,对于环烯醚萜类化合物的活性研究及新药开发都具有重要意义。本文以环烯醚萜成分的氧化应激活性为中心,选取了栀 栀子苷、胡黄连苷Ⅱ、马钱苷、缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯等6种活性较强且具有代表性的化合物进行研究。通过结构确证、抗氧化能力分析、肿瘤细胞杀伤作用和神经细胞保护作用,研究化合物的活性差异,探讨该类化合物的作用机理及其构效的相互关系。研究方法1.环烯醚萜苷和酯类化合物结构的确定和体外抗氧化能力分析（1）乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯是同分异构体,其结构在文献中存在混淆情况。实验通过 UV、IR、MS 和1H-NMR、13C-NMR 和二维 NMR（HMQC 和 HMBC谱）进行分析,对乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯的结构进行全归属。（2）采用铁离子还原抗氧化力（Ferric reducing antioxidantpower,FRAP）、羟自由基（Hydroxyl free radical,OH·）、超氧阴离子（Superoxide anion,O-·）清除力、ABTS+·清除力和DPPH·的清除能力实验,研究栀子苷、胡黄连苷Ⅱ、马钱苷、缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯6种化合物自由基清除能力。2.环烯醚萜苷和酯类化合物促进肿瘤细胞调亡的可能机制选择不同的肿瘤细胞模型:人肝癌细胞（Human liver carcinoma cells,HepG2）、人宫颈癌细胞（human cervix carcinoma cells,HeLa）和人乳腺癌细胞（human breast cancer cells,MDA-MB-231）,及正常细胞系人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,采用MTT法对活细胞生存率进行分析。采用Annexin V-FITC/PI双标标记调亡细胞,通过流式细胞术检测HepG2细胞早期调亡和晚期调亡的细胞数量,并通过监测细胞内DCF荧光变化,分析给药前后细胞内ROS浓度变化,分析化合物是否是通过降低细胞内ROS浓度而表现出肿瘤细胞杀伤作用。3.环烯醚萜苷和酯类化合物神经细胞保护的可能机制选择已分化的PC12细胞系模拟神经细胞,用不同浓度和时间H202损伤PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型。通过MTT法对H202损伤的PC12细胞生存率进行分析,确定最适损伤浓度和时间。将实验分为空白组,模型组和给药挽救组,通过MTT法比较模型组和给药挽救组细胞生存率差异,分析不同化合物的挽救效果。采用Annexin V-FITC/PI双标标记调亡细胞,通过流式细胞术检测早期调亡和晚期调亡的细胞数量化合物的挽救效果,并通过监测细胞内DCF荧光变化,分析给药挽救前后细胞内ROS水平,分析化合物是否能通过降低损伤细胞内ROS浓度起到神经细胞保护作用。4.蜘蛛香及啤酒花缬草提取物片（制剂）的活性研究,与单体化合物活性比较为明确蜘蛛香药材及其制剂中抗氧化应激的物质基础,实验选择蜘蛛香药材（2批次）和制剂（3批次）进行研究,首先采用LC-MS对药材及制剂的极性和非极性成分进行分析,采用对照品比对和MS解析,确定药材和制剂的主要成分。通过挽救H202损伤PC12细胞模型研究药材和制剂对细胞的挽救效率。通过含量折算,分析缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯与药材、制剂之间的量效关系。5.缬草环烯醚萜类成分的强制降解实验及其降解前后抗氧化应激活性比较研究通过强制降解实验:酸性条件（0.01MHCl,25℃,5h）,碱性条件（O.O1MNaOH,25 ℃,10 min）,氧化条件（3%～6%H202,25℃,24h）,加热条件（甲醇溶液60℃,0,1,2,4,或6 h;固体4℃,7天;固体25 ℃,7天）和光照条件（强度5000 lx,3 h）。分析缬草环烯醚萜的可能降解规律,通过DPPH·-TLC-MS、LC-MS分析,对环烯醚萜热降解产物的结构进行推断;通过ABTS+·清除力、DPPH·的清除能力、肿瘤细胞杀伤实验对抗氧化能力和肿瘤细胞杀伤作用、促进细胞调亡能力和降低细胞ROS水平进行检测,从而分析环烯醚萜酯类化合物结构与活性之间的关系。研究结果1.乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯是同分异构体,差异仅为一个乙酰基团连接位置不同。通过HMBC图谱解析可以发现,与乙酰基相连的羰基碳会向高场移动,通过全谱归属（乙酰缬草三酯:δC 171.2（C-13）,169.8（C-16）,170.4（C-22）和 170.8（C-2’）;1-β乙酰缬草三酯:δC 171.2（C-13）,171.6（C-16）,167.6（C-22）和170.9（C-2’））,本文确定了乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯的结构。通过体外清除自由基能力分析可知,胡黄连苷Ⅱ具有较强的自由基清除能力,这可能其结构中的酚羟基和三元氧环结构有关系。环烯醚萜酯类化合物清除自由基能力次之,栀子苷和马钱苷在自由基清除能力中未表现出清除自由基能力。2.在肿瘤细胞杀伤实验中,环烯醚萜苷类化合物对实验中的肿瘤细胞无明显杀伤作用,在高浓度时还具有促进细胞生长的作用。环烯醚萜酯类化合物对肿瘤细胞具有明显细胞毒作用,实验表明环烯醚蔽酯类化合物可通过降低细胞内ROS水平促进HepG2细胞凋亡。对HepG2细胞的杀伤作用依次为:缬草三酯>乙酰缬草三酯>1-β乙酰缬草三酯。3.实验采用80 μM H202处理PC12细胞12 h（细胞生存率下降至空白对照组50%以下）作为模型组。通过加入不同浓度和环烯醚萜苷和酯类化合物挽救48小时进行比较,与模型组相比,给药组细胞存活率均显着上升,凋亡率显着下降,细胞内ROS水平也显着下降。其中,栀子苷对H202损伤PC12细胞挽救效果最佳（在给药浓度为10 mM时,挽救率为17.5%）,马钱苷和胡黄连苷Ⅱ作用次之（在给药浓度为20 mM时,挽救率分别为16.3%和12.9%）,缬草环烯醚萜酯类化合物挽救效果较环烯醚萜苷类化合物弱,在给药75mM时挽救效率在（11.5,15.5）%。对PC 12细胞修复作用:栀子苷>马钱苷>胡黄连苷Ⅱ>缬草三酯类化合物。4.蜘蛛香药材（提取物或制剂）与单体化合物的活性相当,表明缬草环烯醚萜酯类化合物是蜘蛛香药材及制剂的主要活性成分。缬草环烯醚萜酯类化合物、药材、制剂均可通过降低细胞内ROS水平对损伤的PC12细胞进行保护。5.通过强制降解实验可知,缬草环烯醚萜类成分对于酸碱和甲醇溶液加热不稳定。在酸碱条件下,降解产物以酯键断裂为主,且反应剧烈不易控制;在甲醇溶液加热条件下,降解产物以三元氧环开环结构为主。在对热降解产物进行自由基清除实验和肿瘤细胞杀伤实验中发现,降解产物具有一定活性,但较原化合物活性下降明显,表明三元氧环是缬草环烯醚萜酯类化合物活性的重要结构基团。结论环烯醚萜苷和酯类成分具有较强生物学活性,推断环烯醚萜母核（半缩醛-烯醚环戊烷）是重要结构基础,抗氧化应激是其作用的重要途径之一。环烯醚萜酯可通过抗氧化应激起到肿瘤细胞杀伤作用。环烯醚萜酯是缬草及其制剂抗氧化活性的重要物质基础。三元氧环是缬草环烯醚萜酯类化合物抗氧化应激的重要结构基团。推断环烯醚蔽苷和酯类化合物可通过抗氧化应激起到神经细胞保护作用。
二、HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进(英文)（论文提纲范文）
（1）融合蛋白ABD-Fc-IL-2的载体构建、异源表达纯化及体外生物学活性和体内药效动力学的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组质粒pcDNA3.1(+)/SP-ABD-Fc-IL-2的构建 |
| 2.2 融合蛋白ABD-Fc-IL-2的表达与纯化 |
| 2.3 CTLL-2/MTT细胞增值比色法 |
| 2.4 融合蛋白ABD-Fc-IL-2与HSA的蛋白相互作用 |
| 2.5 ELISA双抗体夹心法定量分析血浆融合蛋白的浓度 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 融合蛋白ABD-Fc-IL-2的载体构建、异源表达纯化及体外生物学活性和体内药效动力学的研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）白术多糖的分离纯化与结构解析及其对急性酒精性肝损伤保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 抗酒精性肝损伤天然多糖的研究现状 |
| 第二节 白术多糖的研究进展 |
| 第三节 本课题设计思路、意义及技术路线 |
| 第二章 白术多糖分离纯化 |
| 第一节 大孔树脂脱色工艺研究 |
| 第二节 DEAE-52 Cellulose层析柱层析和透析 |
| 第三章 白术多糖结构鉴定 |
| 第一节 纯度鉴定及相对分子质量测定 |
| 第二节 白术多糖的单糖组成测定 |
| 第三节 红外光谱 |
| 第四节 甲基化分析 |
| 第五节 核磁共振 |
| 第六节 刚果红实验 |
| 第四章 白术多糖对急性酒精性肝损伤保护作用药效学评价 |
| 第一节 白术多糖对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用研究 |
| 第二节 白术精制多糖对乙醇诱导的L-02细胞损伤保护作用研究 |
| 第五章 基于分子对接技术探讨白术多糖对急性酒精性肝损伤保护作用机制研究 |
| 全文总结、创新和展望 |
| 一、全文总结 |
| 二、创新 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 (英文缩略词) |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）自噬在硫酸化银杏叶多糖体外诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 银杏叶多糖的研究进展 |
| 1.1.1 银杏叶生物学活性的研究进展 |
| 1.1.2 多糖的研究进展 |
| 1.1.3 银杏叶多糖的研究进展 |
| 1.2 硫酸化多糖的研究进展 |
| 1.2.1 多糖的硫酸化修饰 |
| 1.2.2 硫酸化多糖的生物活性 |
| 1.3 凋亡及其分子机制研究进展 |
| 1.3.1 细胞凋亡的概述 |
| 1.3.2 细胞凋亡与肿瘤 |
| 1.4 自噬及其分子机制研究进展 |
| 1.4.1 自噬的分类 |
| 1.4.2 自噬的发生过程 |
| 1.4.3 细胞自噬相关信号通路 |
| 1.4.4 细胞自噬与凋亡的关系 |
| 1.4.5 细胞自噬与肿瘤 |
| 1.5 本实验研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 主要溶液及试剂配制 |
| 2.4.1 磷酸缓冲盐溶液(PBS)的配制 |
| 2.4.2 硫酸化银杏叶多糖溶液配制 |
| 2.4.3 噻唑蓝(MTT)的配制 |
| 2.4.4 3-Methyladenine(3-MA)溶液配制 |
| 2.4.5 Western Blot所用试剂的配制 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.5.1 银杏叶多糖的提取和纯化 |
| 2.5.2 硫酸化银杏叶多糖的制备 |
| 2.5.3 多糖含量的测定 |
| 2.5.4 蛋白含量的测定 |
| 2.5.5 硫酸基取代度的测定 |
| 2.5.6 细胞培养与传代 |
| 2.5.7 细胞冻存 |
| 2.5.8 细胞复苏 |
| 2.5.9 MTT法检测HepG2 细胞活力 |
| 2.5.10 蛋白质印记法(Western Blot) |
| 2.5.11 3-MA对 SGBLP抗肿瘤作用的影响 |
| 2.6 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 GBLP与 SGBLP的理化特性 |
| 3.1.1 多糖的提取 |
| 3.1.2 总糖的含量 |
| 3.1.3 蛋白质含量 |
| 3.1.4 取代度 |
| 3.2 SGBLP对 HepG2 细胞活力的影响 |
| 3.3 SGBLP对 HepG2 细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 SGBLP对 HepG2 细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 3.5 SGBLP对 HepG2 细胞自噬通路的影响 |
| 3.6 抑制自噬对SGBLP诱导HepG2 细胞活力的影响 |
| 3.7 加入3-MA后,SGBLP对 HepG2 细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 3.8 加入3-MA后,SGBLP对 HepG2 细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 GBLP的提取、纯化及硫酸化修饰方法 |
| 4.2 SGBLP对 HepG2 细胞活力的影响 |
| 4.3 SGBLP诱导HepG2 细胞凋亡 |
| 4.4 SGBLP诱导HepG2 细胞自噬的发生 |
| 4.5 调控PI3K/AKT/mTOR信号通路是SGBLP发挥作用的分子机 |
| 4.6 3-MA抑制HepG2 细胞自噬后增强SGBLP抗肿瘤作用 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
（4）蛹虫草中核苷类化合物的分离鉴定及其对人肝癌HepG2细胞的抑制作用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 蛹虫草研究进展 |
| 1.1.1 蛹虫草概述 |
| 1.1.2 蛹虫草的产业现状 |
| 1.1.3 蛹虫草的生物学功效 |
| 1.1.4 蛹虫草中的化学成分 |
| 1.2 蛹虫草核苷类化合物研究概况 |
| 1.2.1 核苷类化合物的基本结构 |
| 1.2.2 蛹虫草中核苷类化合物的种类 |
| 1.2.3 核苷类化合物的提取工艺 |
| 1.2.4 核苷类化合物的纯化工艺 |
| 1.3 肝癌研究进展 |
| 1.3.1 肝癌概述 |
| 1.3.2 核苷类化合物对肝癌的抑制作用 |
| 1.4 本文研究的依据、意义和主要内容 |
| 1.4.1 研究依据 |
| 1.4.2 研究目的及意义 |
| 1.4.3 研究的主要内容 |
| 1.4.4 研究的创新点 |
| 第二章 蛹虫草中核苷类化合物的提取工艺优化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料试剂与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 虫草素标准曲线的绘制 |
| 2.3.2 样品前处理 |
| 2.3.3 蛹虫草粗提液的制备 |
| 2.3.4 虫草素含量及提取率测定 |
| 2.3.5 HPLC分析 |
| 2.3.6 单因素实验 |
| 2.3.7 正交实验设计 |
| 2.3.8 正交实验验证 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.4.1 虫草素标准曲线 |
| 2.4.2 单因素实验结果 |
| 2.4.3 正交实验结果 |
| 2.4.4 正交实验验证结果 |
| 2.5 本章结论 |
| 第三章 蛹虫草中核苷类化合物的分离纯化、结构鉴定及定量分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 蛹虫草粗提浓缩液的制备 |
| 3.3.2 液相色谱柱的选择 |
| 3.3.3 制备液相分离纯化蛹虫草中的核苷类化合物 |
| 3.3.4 分离制备所得活性组分后处理 |
| 3.3.5 各单体化合物含量的定量分析 |
| 3.3.6 未知单体化合物的结构鉴定 |
| 3.3.7 各单体化合物标准曲线的绘制 |
| 3.3.8 市售蛹虫草中各单体化合物的含量测定 |
| 3.3.9 统计学分析 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.4.1 液相色谱柱的选择结果 |
| 3.4.2 蛹虫草中核苷类化合物的分离纯化结果 |
| 3.4.3 分离纯化所得各单体化合物的含量及纯度 |
| 3.4.4 两种未知单体化合物的结构鉴定结果 |
| 3.4.5 市售蛹虫草中虫草素、腺苷、PTUh和 PTGh含量对比分析结果 |
| 3.5 本章结论 |
| 第四章 虫草素、PTUh与 PTGh对 HepG2 细胞的抑制作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料试剂和仪器 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 |
| 4.2.2 主要仪器和设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞实验基础操作 |
| 4.3.2 MTT法测定细胞相对活力 |
| 4.3.3 细胞划痕法测定细胞迁移能力 |
| 4.3.4 Annexin V-FITC/PI双标记染色法测定细胞凋亡 |
| 4.3.5 流式细胞技术测定细胞周期 |
| 4.3.6 统计学分析 |
| 4.4 实验结果与分析 |
| 4.4.1 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞活力的影响 |
| 4.4.2 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞横向迁移能力的影响 |
| 4.4.3 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞凋亡的影响 |
| 4.4.4 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞周期的影响 |
| 4.5 本章结论 |
| 第五章 虫草素、PTUh与 PTGh诱导HepG2 细胞凋亡的作用机理初探 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料试剂和仪器 |
| 5.2.1 实验材料和试剂 |
| 5.2.2 主要仪器和设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 细胞种板培养 |
| 5.3.2 JC-1 荧光染色法测定细胞线粒体膜电位 |
| 5.3.3 细胞总RNA提取 |
| 5.3.4 逆转录-聚合酶链式反应 |
| 5.3.5 实时荧光定量PCR扩增目的基因 |
| 5.3.6 统计学分析 |
| 5.4 实验结果与分析 |
| 5.4.1 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞MMP的影响 |
| 5.4.2 RNA纯度和浓度 |
| 5.4.3 虫草素、PTUh和 PTGh对 HepG2 细胞凋亡相关基因表达的影响 |
| 5.5 本章结论 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间论文发表 |
（5）高粱乌米多糖提取纯化及对消化系统癌细胞抑制作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 真菌多糖的研究概况 |
| 1.1.1 真菌多糖的提取及纯化技术 |
| 1.1.2真菌多糖的结构分析及鉴定 |
| 1.1.3 真菌多糖的生物活性研究 |
| 1.2 食用真菌高粱乌米的研究概况 |
| 1.2.1 高粱乌米的来源 |
| 1.2.2 高粱乌米的化学成分及生理功能 |
| 1.2.3 食用真菌高粱乌米加工与利用 |
| 1.2.4 高粱乌米多糖的研究 |
| 1.3 多糖抗氧化与细胞凋亡 |
| 1.3.1 真菌多糖抗氧化 |
| 1.3.2 细胞凋亡的概述及主要途径 |
| 1.4 蛋白质组学的研究 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 1.5.1 研究的目的 |
| 1.5.2 研究的意义 |
| 2 高粱乌米多糖的提取 |
| 2.1 突验材料 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 高效液相色谱仪及色谱柱 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 粗多糖的热水浸提 |
| 2.2.2 高粱乌米多糖有关性质测定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 高粱乌米粗多糖的提取 |
| 2.3.2 Phenol-硫酸法测定糖含量 |
| 2.3.3 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 |
| 2.3.4 间羟基联苯法测定多糖的糖醛酸含量 |
| 2.3.5 碘显色法测定多糖淀粉含量 |
| 2.3.6 多糖灰分测定 |
| 2.3.7 多糖的单糖组成测定 |
| 2.3.8 多糖的分子量测定和均一性 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 WM多糖的系统分级纯化及理化性质分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 高效液相色谱仪及色谱柱 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 WM多糖的离子交换分级 |
| 3.2.2 WM-N和WM-A多糖超滤膜与透析分级 |
| 3.2.3 WM-NP多糖的醇沉纯化 |
| 3.2.4 高粱乌米多糖有关理化性质测定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 WM多糖的离子交换分级 |
| 3.3.2 WM-N和WM-A多糖超滤膜与透析分级 |
| 3.3.3 WM-NP多糖的醇沉纯化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 多糖WM-NP-60的结构特征研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 FT-IR分析 |
| 4.2.2 高碘酸氧化和Smith降解 |
| 4.2.3 1D/2D NMR分析 |
| 4.2.4 甲基化分析 |
| 4.2.5 旋光度测定 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 FT-IR分析 |
| 4.3.2 高碘酸氧化和Smith降解 |
| 4.3.3 1D/2D NMR分析 |
| 4.3.4 甲基化分析 |
| 4.3.5 旋光度结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 多糖WM-NP-60的抗氧化活性研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 有机自由基(DPPH)的清除能力测定 |
| 5.2.2 羟基自由基(·OH)清除能力的测定 |
| 5.2.3 超氧负离子(O~(2-)·)清除能力的测定 |
| 5.2.4 过氧化氢(H_2O_2)清除能力的测定 |
| 5.2.5 二价铁离子Fe~(2+)螯合能力的测定 |
| 5.2.6 还原力的测定 |
| 5.2.7 邻苯三酚自氧化抑制能力的测定 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 DPPH的清除能力分析 |
| 5.3.2 羟基自由基的清除能力分析 |
| 5.3.3 超氧负离子的清除能力分析 |
| 5.3.4 过氧化氢(H_2O_2)的清除能力分析 |
| 5.3.5 二价铁离子的整合能力分析 |
| 5.3.6 还原力分析 |
| 5.3.7 1,2,3-苯酚自氧化的抑制能力分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 多糖WM-NP-60对癌细胞增殖与凋亡的影响 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 实验仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 细胞培养 |
| 6.2.2 细胞增殖抑制试验 |
| 6.2.3 细胞周期检测 |
| 6.2.4 细胞凋亡试验 |
| 6.2.5 细胞原位荧光检测 |
| 6.2.6 细胞凋亡形态检测电镜(TEM)试验 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 WM-NP-60对HepG2、SGC7901和HCT116细胞增殖抑制作用 |
| 6.3.2 WM-NP-60对HepG2、SGC7901和HCT116细胞周期的影响 |
| 6.3.3 WM-NP-60对HepG2、SGC7901和HCT116细胞凋亡的影响 |
| 6.3.4 细胞原位荧光检测观察HepG2、SGC7901和HCT116细胞凋亡特征 |
| 6.3.5 透射电镜观察HepG2、SGC7901和HCT116细胞凋亡形态 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 多糖WM-NP-60调控HCT116细胞的蛋白质组学研究 |
| 7.1 实验材料 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.2 实验试剂 |
| 7.1.3 实验仪器 |
| 7.1.4 主要软件 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 蛋白质定量与定性分析 |
| 7.2.2 蛋白酶解 |
| 7.2.3 TMT标记 |
| 7.2.4 2D-LC-MSMS分析 |
| 7.2.5 蛋白的数据库搜索与筛选 |
| 7.2.6 生物信息学分析 |
| 7.2.7 qRT-PCR检测相关mRNA表达 |
| 7.2.8 Western blot检测相关蛋白表达 |
| 7.3 结果与分析 |
| 7.3.1 蛋白浓度及条带分析 |
| 7.3.2 差异表达蛋白的鉴定 |
| 7.3.3 生物信息学分析 |
| 7.3.4 mRNA与蛋白水平表达验证实验 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 东北林业大学 博士学位论文修改情况确认表 |
（6）磷酸壳寡糖脂质体的构建及用于骨肉瘤治疗的体内外研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词说明 |
| 1 前言 |
| 1.1 骨肉瘤治疗的现状 |
| 1.2 壳聚糖、壳寡糖与磷酸壳聚糖的研究现状 |
| 1.2.1 壳聚糖 |
| 1.2.2 壳寡糖 |
| 1.2.3 磷酸壳聚糖 |
| 1.2.4 在药物制剂中的应用 |
| 1.3 DOX的研究进展 |
| 1.3.1 DOX的结构与性质 |
| 1.3.2 DOX的药理作用 |
| 1.3.3 DOX脂质体的研究进展 |
| 1.4 骨靶向载体的研究进展 |
| 1.4.1 双膦酸盐 |
| 1.4.2 酸性寡肽 |
| 1.4.3 其它 |
| 1.5 课题的提出 |
| 1.6 课题的设计思路及研究内容 |
| 2 聚合物的合成与表征 |
| 2.1 实验仪器与材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 CS-Chol的合成 |
| 2.2.2 PCS-Chol的合成 |
| 2.3 结构表征 |
| 2.3.1 红外光谱(FT-IR) |
| 2.3.2 核磁磷谱(31P-NMR) |
| 2.3.3 取代度(DS) |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 红外表征 |
| 2.4.2 核磁表征 |
| 2.4.3 DS的测定 |
| 2.5 小结 |
| 3 PCS修饰阿霉素脂质体的制备及理化评价 |
| 3.1 仪器与材料 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 实验材料 |
| 3.2 HPLC法测定DOX方法的建立 |
| 3.2.1 液相色谱条件 |
| 3.2.2 专属性考察 |
| 3.2.3 线性关系考察 |
| 3.2.4 精密度试验 |
| 3.2.5 回收率试验 |
| 3.3 脂质体的制备 |
| 3.3.1 空白脂质体的制备 |
| 3.3.2 DOX脂质体的制备 |
| 3.3.3 CS-DOX-L的制备 |
| 3.3.4 PCS-DOX-L的制备 |
| 3.3.5 PEG-DOX-L的制备 |
| 3.4 脂质体的考察 |
| 3.4.1 外观形态 |
| 3.4.2 粒径、PDI和 zeta电位 |
| 3.4.3 载药量和包封率 |
| 3.4.4 体外释放 |
| 3.4.5溶血实验 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 HPLC分析方法的建立 |
| 3.5.2 脂质体的制备 |
| 3.5.3 脂质体理化性质的表征 |
| 3.5.4 外观形态 |
| 3.5.5 体外释放 |
| 3.5.6溶血实验 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 体外细胞研究 |
| 4.1 试剂与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.2 细胞培养 |
| 4.2.1 实验准备 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞毒性 |
| 4.3.2 细胞摄取的定性研究 |
| 4.3.3 细胞摄取的定量研究 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 细胞培养 |
| 4.4.2 细胞毒性 |
| 4.4.3细胞摄取的定性实验 |
| 4.4.4 细胞摄取的定量研究 |
| 4.5 小结 |
| 5 荷瘤裸鼠的组织分布研究 |
| 5.1 实验仪器与材料 |
| 5.1.1 实验仪器 |
| 5.1.2 实验材料 |
| 5.1.3 动物 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 荷瘤裸鼠模型的建立 |
| 5.2.2 DiR制剂的制备 |
| 5.2.3 DiR制剂的组织分布研究 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.4 小结 |
| 6 药代动力学研究 |
| 6.1 实验仪器与材料 |
| 6.1.1 实验仪器 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 实验动物 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 分析方法的建立 |
| 6.2.2 大鼠体内的药动学研究 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 血药浓度分析方法的建立 |
| 6.3.2 药动学研究 |
| 6.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（7）复方参草菌质颗粒制备工艺及其抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 参草菌质发酵工艺优化及其质量控制标准研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 复方参草菌质颗粒制备工艺研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法与结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 复方参草菌质颗粒抗肿瘤活性研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 复方参草菌质颗粒在A549 细胞中的定量蛋白质组学研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论与小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间科研成果 |
| 个人简历 |
（8）靶向SRPK-1的嵌合抗体用于非小细胞肺癌治疗的初步探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、靶向 SRPK-1 的嵌合抗体的构建表达及其生物活性鉴定 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料和仪器 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 构建靶向SRPK-1 的嵌合抗体 |
| 1.2.2 测定SRPK-1 的嵌合抗体体外活性 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、靶向SRPK-1 的嵌合抗体用于非小细胞肺癌治疗的初步探讨 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物、仪器 |
| 2.1.2 实验材料和试剂 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 ChanSRPK-1对NSCLC细胞中SRPK-1 表达的体外作用 |
| 2.2.2 ChanSRPK-1 对非小细胞肺癌迁移和侵袭的体外抑制作用 |
| 2.2.3 ChanSRPK-1对NSCLCDVECs的作用通过靶向TCF和在NSCLC的小鼠体内作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901的抑制及其应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 蜂王浆概述 |
| 1.1.1 蜂王浆简介 |
| 1.1.2 蜂王浆的生物学活性 |
| 1.2 蜂王浆蛋白概述 |
| 1.2.1 蜂王浆蛋白简介 |
| 1.2.2 蜂王浆蛋白的提取 |
| 1.2.3 蜂王浆蛋白功能性研究 |
| 1.3 液相色谱质谱联用技术 |
| 1.4 抗肿瘤测定方法 |
| 1.4.1 MTT法 |
| 1.4.2 细胞集落形成实验 |
| 1.4.3 流式细胞技术 |
| 1.4.4 Western Blotting法 |
| 1.5 口服液简介 |
| 1.6 研究的目的及意义 |
| 1.7 研究内容 |
| 1.7.1 不同提取方法对蜂王浆蛋白的影响 |
| 1.7.2 蜂王浆碱提酸沉蛋白提取工艺优化 |
| 1.7.3 体外消化模拟实验及其产物对胃癌细胞SGC-7901 的影响 |
| 1.7.4 蜂王浆蛋白口服液的研制 |
| 第二章 不同提取方法对蜂王浆蛋白的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 2.2.2 Gel-Pro analyzer软件分析 |
| 2.2.3 蜂王浆蛋白氨基酸含量测定 |
| 2.2.4 蜂王浆蛋白氨基酸含量聚类分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 蜂王浆蛋白提取工艺优化及LC-MS鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1单因素实验 |
| 3.2.2 响应面优化实验 |
| 3.2.3 蜂王浆蛋白质谱检测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 蜂王浆蛋白体外消化物对胃癌细胞SGC-7901 的影响及其机制 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 蜂王浆蛋白体外消化过程中水解度的变化 |
| 4.2.2 蜂王浆蛋白体外消化产物消化率的测定 |
| 4.2.3 蜂王浆蛋白体外消化产物SDS-PAGE电泳图谱 |
| 4.2.4 蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901 的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 蜂王浆蛋白口服液的研制 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料与试剂 |
| 5.1.2 仪器与设备 |
| 5.1.3 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 蜂王浆蛋白口服液配方优化 |
| 5.2.2 产品指标检测 |
| 5.2.3 蜂王浆蛋白口服液对胃癌细胞SGC-7901 抑制作用 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与创新点 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文索引表 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 近年来环烯醚萜类化合物的结构和生物学活性研究进展 |
| 1. 环烯醚萜类化合物的结构 |
| 2. 环烯醚萜的生物学活性 |
| 参考文献 |
| 综述二 环烯醚萜类化合物对氧化应激诱发疾病的药效学研究进展 |
| 1. 氧化应激的可能机理 |
| 2. 环烯醚萜类化合物降低机体氧化应激诱导疾病的实例 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 环烯醚萜类化合物结构确定及体外抗氧化研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 仪器和试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据处理 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 环烯醚萜类化合物自由基清除能力比较 |
| 3.2 环烯醚萜酯类化合物的结构确定和结构与活性关系研究 |
| 4. 小结 |
| 第三章 环烯醚萜类成分基于抗氧化应激的肿瘤细胞杀伤作用研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器与实验方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 环烯醚萜类化合物对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 3.2 环烯醚萜酯类化合物对促进HepG 2细胞凋亡作用的比较 |
| 3.3 环烯醚萜酯类化合物对HepG2细胞内ROS浓度的作用研究 |
| 4. 小结 |
| 第四章 环烯醚萜类成分基于抗氧化应激的神经细胞保护作用研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 试剂与耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 PC12细胞形态观察 |
| 3.2 H_2O_2处理PC12细胞损伤模型的建立及鉴定 |
| 3.3 环烯醚萜化合物对PC 12细胞生长的影响 |
| 3.4 细胞存活率实验结果 |
| 3.5 环烯醚萜类化合物降低氧化损伤后的PC12细胞作用研究 |
| 3.6 环烯醚萜类化合物降低氧化损伤的PC12细胞内ROS浓度的作用研究 |
| 4. 小结 |
| 4.1 实验涉及的主要离子通道介绍 |
| 4.2 环烯醚萜苷类的主要离子通道分析 |
| 第五章 蜘蛛香药材及啤酒花缬草提取物片成分及生物活性分析 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器及实验方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 蜘蛛香药材中主要活性成分定性定量分析 |
| 3.2 蜘蛛香及其主要活性成分自由基清除能力分析 |
| 3.3 缬草啤酒花提取物片(制剂)成分分析 |
| 3.4 蜘蛛香药材、制剂及化合物生物活性比较 |
| 3.5 缬草环烯醚萜酯类化合物的降解规律探讨 |
| 4. 小结 |
| 4.1 蜘蛛香中抗氧化活性成分分析 |
| 4.2 缬草环烯醚萜酯类化合物信号通路分析 |
| 4.3 蜘蛛香药材和制剂在缓解由氧化应激诱导的睡眠障碍和焦虑症的讨论 |
| 4.4 药材、制剂与单体之间的相互关系 |
| 第六章 结语 |
| 1. 结果与讨论 |
| 2. 主要创新点 |
| 3. 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
四、HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进(英文)（论文参考文献）
- [1]融合蛋白ABD-Fc-IL-2的载体构建、异源表达纯化及体外生物学活性和体内药效动力学的研究[D]. 柴欣秀. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]白术多糖的分离纯化与结构解析及其对急性酒精性肝损伤保护作用研究[D]. 杨颖. 南京中医药大学, 2021(01)
- [3]自噬在硫酸化银杏叶多糖体外诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究[D]. 于忠芳. 山东农业大学, 2020(11)
- [4]蛹虫草中核苷类化合物的分离鉴定及其对人肝癌HepG2细胞的抑制作用研究[D]. 项婷. 浙江大学, 2020(02)
- [5]高粱乌米多糖提取纯化及对消化系统癌细胞抑制作用研究[D]. 阚连宝. 东北林业大学, 2020(01)
- [6]磷酸壳寡糖脂质体的构建及用于骨肉瘤治疗的体内外研究[D]. 刘金虎. 烟台大学, 2019(06)
- [7]复方参草菌质颗粒制备工艺及其抗肿瘤活性研究[D]. 陈天丽. 长春中医药大学, 2019(03)
- [8]靶向SRPK-1的嵌合抗体用于非小细胞肺癌治疗的初步探讨[D]. 吴凡. 天津医科大学, 2019(02)
- [9]蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901的抑制及其应用[D]. 王天石. 锦州医科大学, 2019(01)
- [10]环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究[D]. 王菲菲. 北京中医药大学, 2018(08)