导读:本文包含了基因破坏论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,转染,超声,晚疫病,糖苷酶,蛋白,质粒。
基因破坏论文文献综述
杨丽飞,王萍,马苏亚[1]（2019）在《超声靶向破坏微泡技术在糖尿病肾病基因治疗中的应用进展》一文中研究指出糖尿病肾病(DN)是糖尿病患者常见的慢性微血管并发症,是终末期肾病常见病因之一。临床上以控制血糖、血压或血液透析等治疗来维持肾脏功能,但这些方法均不能完全阻止DN的发生、发展。超声靶向破坏微泡(UTMD)技术的应用为DN提供了一个安全、高效和无创的治疗手段,具有良好的临床应用前景。本文就UTMD技术及其在DN基因治疗中的研究进展进行综述。(本文来源于《浙江医学》期刊2019年16期）
王丽华,宗建春,刘之川,简华刚,余萍萍[2]（2019）在《超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡治疗糖尿病大鼠烫伤创面的实验研究》一文中研究指出目的探讨超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡对糖尿病大鼠烫伤创面的治疗作用。方法制备载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡,检测其基本特性;MTT法检测其对大鼠真皮成纤维细胞活性的影响;Western-blot检测其在大鼠真皮成纤维细胞中的基因表达水平及转染效率。选取糖尿病大鼠27只,分为空白对照组、载基因纳泡组及超声破坏载基因纳泡组,超声破坏载基因纳泡组又分别于1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d及21 d观察创面愈合情况,以及bFGF及NGF蛋白表达水平及转染效率,并与空白对照组、载基因纳泡组21 d时的结果进行对照。结果所制备的阳离子纳泡形态规则,稳定性好,平均表面电位为12.7 mV;与基因结合量高达3.8mg/108个纳泡;基因结合率高达39.5%;MTT显示对细胞无明显毒性。Western-blot半定量结果显示,空白对照组和载基因纳泡组bFGF及NGF蛋白水平低;bFGF蛋白及NGF蛋白在载基因纳泡组48 h时转染效率及表达水平最高。超声破坏载基因纳泡48 h组bFGF水平在治疗第7天表达及转染率达到峰值,NGF水平在治疗第4天表达及转染率最高。结论载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡能显着增强超声显影;经超声基因转染仪破坏后可定位释放基因,且基因转染效率明显提高,对糖尿病大鼠烫伤创面有较好的治疗效果。(本文来源于《临床超声医学杂志》期刊2019年08期）
骆贞红[3]（2019）在《新型CRISPR RNA引导的FokI核酸酶靶向破坏bcr-abl基因清除慢性髓细胞白血病致病根源》一文中研究指出慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的骨髓增殖性肿瘤,其主要特征是9号染色体和22号染色体发生平衡易位形成bcr-abl融合基因。该融合基因编码的具有强烈的酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白,能持续激活下游JAK-STAT,MEK-EKR,CRKL等细胞信号转导通路,促进细胞的快速增殖并抑制其凋亡,从而发生恶性转化。目前,临床上主要使用酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKIs)来治疗CML并且取得了良好的治疗效果。但是,仍然有部分病人对TKIs不敏感或产生耐药。同时,CML的白血病干细胞(leukemia stem cells,LSCs)对TKIs的不敏感成为了CML复发的一个重要原因。因此,亟需探索新的治疗策略,使其对TKIs耐药和CML复发病人同样有效。基因编辑技术为我们提供了一个破坏bcr-abl从而清除CML致病根源的可能。本课题中采用的基于CRSPR/Cas9的RNA引导的Fok I核酸酶(RNA guided Fok I nuleuases,RFNs)技术既具有可变靶位点的灵活性,又具有切割特异性,非常适合用于CML细胞的基因编辑。在本研究中,我们针对bcr-abl基因设计并构建了多个靶向bcr-abl的g RNA,并筛选出效应最佳的作用位点。同时,我们通过同源定向修复(homology-directed repair,HDR)将含有8个碱基的Not I酶切位点成功插入到bcr-abl基因中,使其发生框移突变,提前遇到终止密码子,最终导致BCR-ABL蛋白翻译的提前终止。本课题初步探索了RFNs能否成功破坏bcr-abl融合基因,同时探究了RFNs作用于bcr-abl基因后对BCR-ABL蛋白表达及其下游效应分子活化的影响和机制,以及对CML细胞和CML干/祖细胞增殖和凋亡的影响,最后在小鼠CML血液瘤模型中探索了RFNs对K562/G01细胞致白血病能力的影响。采取的研究方法主要有:1.g RNA表达质粒和donor的设计与构建及其对bcr-abl的破坏作用。在Zi Fi T网页根据bcr-abl基因组序列设计g RNA靶位点,构建相应的g RNA表达质粒。同时,根据靶位点构建含有同源臂的donor,并在donor中插入8个碱基Not I酶切位点。将RFNs+donor电转入K562细胞中,通过免疫荧光,T7E1酶切和Not I酶切以及Sanger测序分析RFNs对bcr-abl的破坏作用。将RFNs+donor电转入K562和K562/G01细胞,分析RFNs对伊马替尼敏感和耐药细胞株中BCR-ABL蛋白和下游效应分子表达的影响。2.RFNs对慢性髓细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及其机制。将g RNA-17+donor,RFNs-half+donor,RFNs+donor各组质粒分别电转K562、K562/G01细胞和bcr-abl阴性的U937、HL60、AD293细胞及CML干/祖细胞和bcr-abl阴性的干/祖细胞。通过克隆形成实验和CCK-8实验检测RFNs对细胞增殖的影响;DAPI染色和FCM检测RFNs对细胞凋亡的作用;western blot检测PARP和Caspase-3的激活情况。3.RFNs对K562/G01细胞在小鼠体内致病能力的影响。将g RNA-17+donor、RFNs-half+donor和RFNs+donor各组质粒分别转染K562/G01细胞,以未处理的K562/G01细胞为阴性对照(wild type),将各组细胞通过尾静脉注射入NOD-SCID小鼠,构建血液瘤模型。通过小鼠生存状态、外周血白细胞计数、CD45+细胞比率、骨髓细胞学检查、肝脾大小和重量、生存时间等参数判断各组小鼠发病情况。通过组织病理学检查和免疫荧光实验检测BCR-ABL蛋白表达情况评估各组小鼠肝脾等组织浸润情况。取得的实验结果和结论如下:1.成功构建靶向bcr-abl的g RNA表达质粒。Western blot结果显示g RNA-17结合的位点效应最明显,作用于该位点的RFNs能有效切割bcr-abl,使其发生双链断裂。将RFNs+donor电转入K562细胞能够有效插入Not I酶切位点,使bcr-abl基因发生框移突变,在下游提前遇到终止密码子,从而终止BCR-ABL蛋白的翻译,BCR-ABL蛋白表达下调,下游的效应分子的活化也相应受到抑制。2.RFNs+donor转染K562和K562/G01细胞后,能抑制细胞增殖并促进其凋亡,在U937、HL60和AD393细胞中则无此效应。将RFNs+donor转染CML的干/祖细胞中也同样能抑制细胞增殖并促进凋亡,而对bcr-abl阴性干/祖细胞则无此作用。说明RFNs能靶向bcr-abl阳性的细胞,且并不影响bcr-abl阴性细胞的增殖。3.RFNs+donor组小鼠外周血白细胞平均计数,CD45+细胞比率,肝脾大小和重量均低于wild type,g RNA-17+donor,RFNs-half+donor组,且改组小鼠获得了更长的生存时间,肝脾浸润情况得到改善,说明RFNs+donor能使K562/G01细胞在小鼠体内的致白血病能力受损。综上所述,我们成功构建了能靶向并有效切割bcr-abl基因的RFNs,并且通过HDR的方式将外源模板中的Not I酶切位点成功插入bcr-abl基因,使其发生框移突变,提前终止BCR-ABL的翻译。该方法靶向破坏了bcr-abl基因,从而清除了CML的致病根源。本课题首次将RFNs引入CML的基因治疗中,为TKIs耐药患者或CML复发病人提供了一种新的治疗策略。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
邹朋林,陈惠莉,郑林丰,张焱锋,史秋生[4]（2019）在《超声靶向微泡破坏与载药/载基因纳米粒联合应用的生物物理学机制及应用研究进展》一文中研究指出超声靶向微泡破坏(ultrasound-targeted microbubble destruction, UTMD)能够安全、高效、简便地递送药物与基因,是当前超声医学领域的研究热点,其机制主要涉及超声辐照微泡引起的空化效应及其二级效应、内吞作用与声辐射力。近年来,随着生物医学材料科学迅猛发展,纳米载药系统取材更加广泛,制备方法愈发精良,载药量日益提高。将纳米载药系统与UTMD进行联合,可以扬长避短,为肿瘤等多种疾病的治疗带来新的思路与希望。本文旨在对UTMD与载药/载基因纳米粒联合应用的生物物理学机制及应用研究进行综述并提出展望。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2019年04期）
胡婷婷,邹小炎,叶芳[5]（2019）在《一个掌跖角化-牙周破坏综合征患者家系组织蛋白酶C基因突变分析》一文中研究指出目的对一个掌跖角化-牙周破坏综合征(PLS)患者及其家系组织蛋白酶C基因(CTSC)突变位点进行分析,探讨PLS的分子致病机制。方法提取1例PLS先证者及其直系血亲(父母、弟弟)的基因组DNA,应用聚合酶链反应和DNA直接测序技术分析先证者及其直系血亲CTSC基因的突变情况。结果 PLS先证者CTSC基因存在复合型杂合突变。先证者位于外显子6的第800位碱基发生了一个杂合错义突变,该碱基对中的碱基T被C取代(c.800T>C),其编码的氨基酸由亮氨酸改变为脯氨酸(p.L267P);位于外显子7的第1015位碱基发生了一个杂合错义突变,该碱基对中的碱基C被T取代(c.1015C>T),其编码的氨基酸由精氨酸改变为半胱氨酸(p.R339C)。其中,c.800T>C来自母亲,c.1015C>T来自父亲,弟弟的CTSC基因未见突变。结论 PLS的临床表征与CTSC基因突变有关。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2019年01期）
曾钰,熊亮,李洁,DENHAAN,Riaan,赵心清[6]（2018）在《UTH1基因破坏提高重组酿酒酵母分泌β-葡萄糖苷酶》一文中研究指出异源蛋白质分泌效率低限制了重组酿酒酵母的多种药用蛋白和工业酶生产。挖掘促进蛋白质生物合成和分泌的关键基因,是提高异源蛋白质生产效率的重要手段。酿酒酵母细胞壁完整性影响异源蛋白质分泌,本研究利用基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术,破坏了重组酿酒酵母Y294-BGL1中参与细胞壁合成的未知功能基因UTH1,发现所获得的突变体胞外β-葡萄糖苷酶酶活比出发菌株提高112.9%,而细胞壁完整性下降。对促进产酶的分子机理进行探索,发现突变体产酶条件下与细胞壁完整性相关的关键基因和与蛋白质分泌途径相关的基因转录出现明显差异,提示UTH1基因破坏不仅影响细胞壁完整性关键基因的表达,也影响蛋白质分泌途径。本文的研究结果有助于深入理解UTH1的基因功能,并为构建异源蛋白质高分泌酵母菌株提供了借鉴。(本文来源于《菌物学报》期刊2018年11期）
常学锋,关欣,朱艳彬,初贵富[7]（2018）在《超声介导微泡破坏结合慢病毒载体介导人connexin43基因的骨髓间充质干细胞归巢治疗心肌梗死》一文中研究指出目的探索超声介导微泡破坏结合慢病毒载体介导人connexin43基因的骨髓间充质干细胞归巢治疗心肌梗死的有效性。方法将20只造模犬随机分为两组,每组10只,分别为实验组(超声+微泡+connexin43基因转染BMSCs组),对照组(超声+微泡+未转染BMSCs组),比较造模后4h和造模后28d,两组LVEF、DA、FS、WMSI的变化。结果造模后28d,实验组较对照组心功能明显改善(LVEF对比,t=5.4976;DA对比,t=4.0681;FS对比,t=4.4229;WMSI对比,t=2.8844),P<0.05,差异具有统计学意义。结论 Connexin43基因转染BMSCs较未转染的BMSCs能更有效的改善心肌梗死的心功能,具有进一步研究的价值。(本文来源于《中国地方病防治杂志》期刊2018年04期）
综合中国农业转基因管理微信公众号、基因农业网[8]（2018）在《转基因育种会破坏生态环境吗 专家为你答疑解惑》一文中研究指出对于转基因技术,人们除了担心食用安全外,还担心种植转基因作物会破坏生态环境。究竟转基因技术会对环境产生哪些影响?转基因领域专家为你答疑解惑。欧文·帕特森,英国议员,任环境、食品和农村事务大臣转基因技术已被普遍用于使作物抵御特定的病虫害。以转基因马铃薯为例,马铃薯晚疫病是一种严重的真菌病害。为防治晚疫病,种植户需要使用重型喷雾器在田间来回喷洒药物、烧柴油、压实土壤、熏烟、对作(本文来源于《农民文摘》期刊2018年07期）
郑智唯,赵云,刘朝奇[9]（2018）在《超声靶向破坏微泡在糖尿病基因治疗中的应用》一文中研究指出糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病,常伴有各种组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经慢性损害和功能障碍,为治疗带来困难。近年来,糖尿病的基因治疗成为热点。超声靶向破坏微泡(UTMD)安全性高、重复性好,组织靶向高,已经成为基因潜在传递方法。本文就UTMD技术及其在糖尿病基因治疗中的研究进展进行综述。(本文来源于《中国介入影像与治疗学》期刊2018年06期）
邹敏[10]（2018）在《shRNA沉默Caveolin-1基因对HIV-1TAT诱导的血脑屏障破坏和Aβ的转运蛋白的作用机制》一文中研究指出目的:Caveolin-1 shRNA(Cav-1 shRNA)慢病毒载体构建,进一步构建稳定低表达Cav-1的单克隆人脑微血管内皮细胞株,实时荧光定量PCR筛选抑制率最好的单克隆人脑微血管内皮细胞株。方法:(1)筛选出人Cav-1基因干扰序列。制备双链DNA oligo,利用基因重组技术克隆慢病毒表达载体pHBLV-U6-Scramble-ZsGreen-Puro,提取质粒并双酶切后行DNA测序鉴定慢病毒载体。将慢病毒包装辅助质粒和制作的含Cav-1-shRNA的慢病毒载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用孔稀释法测定病毒滴度。另外,利用上海汉恒生物科技有限公司的阴性序列病毒作为阴性对照。(2)将病毒感染人脑微血管内皮细胞株,挑取2组GFP强表达的细胞克隆团转移种植,建立稳定单克隆细胞株,荧光定量PCR检测Cav-1抑制率,选取抑制率最好的克隆组。结果:经测序鉴定成功构建了慢病毒载体Cav-1 shRNA;利用293T细胞包装重组慢病毒载体后,收集到重组慢病毒颗粒,病毒滴度为:2×10~8TU/mL;成功扩增获得2株稳定低表达Cav-1的单克隆人脑微血管内皮细胞株;单克隆株的Cav-1抑制率分别85.7%和81.4%。结论:成功构建Cav-1shRNA干扰慢病毒载体,并成功获得抑制效率较好的低表达Cav-1稳转人脑微血管内皮细胞株,为下一步探讨沉默Cav-1对艾滋病相关的神经认知障碍(HIV-associated neurocognitive dysfunction,HAND)的实验奠定良好的基础。目的:探讨小窝蛋白(Caveolin)-1相关的信号通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障(blood–brain barrier,BBB)破坏和淀粉样蛋白(Aβ)沉积的影响。方法:(1)培养前期实验筛选成功稳定低表达的Cav-1 sh RNA以及对照sh RNA(Ctr sh RNA)的人脑微血管内皮细胞,以不同浓度HIV-1 Tat刺激细胞24小时,用CCK8检测其对细胞活力的影响。(2)Cav-1 sh RNA以及Ctr sh RNA组用HIV-1 Tat处理24小时,蛋白免疫印迹(western blot,WB)或实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)或免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测紧密连接蛋白Occludin、Aβ转运蛋白RAGE和LRP-1的蛋白和m RNA表达变化。(3)WB检测HIV-1 Tat处理Cav-1 sh RNA以及Ctr sh RNA组24小时后RhoA蛋白表达。结果:(1)HIV-1 Tat在1μg/m L以下时对(Cav-1 sh RNA)以及感染对照sh RNA(Ctr sh RNA)活力无明显影响(P>0.05);(2)用HIV-1 Tat处理Ctr sh RNA和Cav-1sh RNA转染的细胞,HIV-1 Tat导致Occludin蛋白与m RNA水平(P<0.01,P<0.01)较Ctr sh RNA组下调;与HIV-1 Tat组对比,Cav-1 sh RNA组可显着上调Occludin蛋白与m RNA水平(P<0.01,P<0.01)。(3)用HIV-1 Tat处理Ctr sh RNA组和Cav-1sh RNA组细胞,HIV-1Tat诱导RAGE蛋白与m RNA水平(P<0.05;P<0.01)Ctr sh RNA上调,免疫荧光反应性增强;与HIV-1 Tat组对比,Cav-1sh RNA能下调RAGE蛋白及m RNA水平(P<0.01,P<0.01),免疫荧光反应性减弱。HIV-1 Tat导致LRP-1蛋白与m RNA水平(P<0.01;P<0.05)较Ctr sh RNA下调,免疫荧光反应性减弱;与HIV-1 Tat组相比,Cav-1sh RNA能上调LRP-1蛋白及m RNA水平(P<0.01;P<0.05),免疫荧光反应性增强。(4)HIV-1 Tat诱导Rho A蛋白水平较空白对照的Rho A蛋白水平上调(p<0.05);再以1μg/m L HIV-1 Tat刺激Cav-1 sh RNA和Ctr sh RNA,HIV-1 Tat诱导Rho A蛋白水平(P<0.05)Ctr sh RNA上调;与HIV-1 Tat组对比,Cav-1 sh RNA组可显着下调Rho A蛋白(P<0.01)。结论:HIV-1 Tat可导致Occludin蛋白和m RNA下调而使血脑屏障破坏,同时诱导转运血液中的Aβ到脑内的RAGE蛋白和m RNA增加及转运脑内Aβ到血液的LRP-1蛋白和m RNA下调,从而影响Aβ在脑内沉积;用sh RNA沉默Cav-1基因可抑制HIV-1Tat诱导的Occludin、RAGE、LPR-1的破坏,减少Rho A蛋白表达,可能减少Aβ在脑内沉积。(本文来源于《广西医科大学》期刊2018-05-01）
基因破坏论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡对糖尿病大鼠烫伤创面的治疗作用。方法制备载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡,检测其基本特性;MTT法检测其对大鼠真皮成纤维细胞活性的影响;Western-blot检测其在大鼠真皮成纤维细胞中的基因表达水平及转染效率。选取糖尿病大鼠27只,分为空白对照组、载基因纳泡组及超声破坏载基因纳泡组,超声破坏载基因纳泡组又分别于1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d及21 d观察创面愈合情况,以及bFGF及NGF蛋白表达水平及转染效率,并与空白对照组、载基因纳泡组21 d时的结果进行对照。结果所制备的阳离子纳泡形态规则,稳定性好,平均表面电位为12.7 mV;与基因结合量高达3.8mg/108个纳泡;基因结合率高达39.5%;MTT显示对细胞无明显毒性。Western-blot半定量结果显示,空白对照组和载基因纳泡组bFGF及NGF蛋白水平低;bFGF蛋白及NGF蛋白在载基因纳泡组48 h时转染效率及表达水平最高。超声破坏载基因纳泡48 h组bFGF水平在治疗第7天表达及转染率达到峰值,NGF水平在治疗第4天表达及转染率最高。结论载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡能显着增强超声显影;经超声基因转染仪破坏后可定位释放基因,且基因转染效率明显提高,对糖尿病大鼠烫伤创面有较好的治疗效果。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因破坏论文参考文献
[1].杨丽飞,王萍,马苏亚.超声靶向破坏微泡技术在糖尿病肾病基因治疗中的应用进展[J].浙江医学.2019
[2].王丽华,宗建春,刘之川,简华刚,余萍萍.超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡治疗糖尿病大鼠烫伤创面的实验研究[J].临床超声医学杂志.2019
[3].骆贞红.新型CRISPRRNA引导的FokI核酸酶靶向破坏bcr-abl基因清除慢性髓细胞白血病致病根源[D].重庆医科大学.2019
[4].邹朋林,陈惠莉,郑林丰,张焱锋,史秋生.超声靶向微泡破坏与载药/载基因纳米粒联合应用的生物物理学机制及应用研究进展[J].现代生物医学进展.2019
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[7].常学锋,关欣,朱艳彬,初贵富.超声介导微泡破坏结合慢病毒载体介导人connexin43基因的骨髓间充质干细胞归巢治疗心肌梗死[J].中国地方病防治杂志.2018
[8].综合中国农业转基因管理微信公众号、基因农业网.转基因育种会破坏生态环境吗专家为你答疑解惑[J].农民文摘.2018
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[10].邹敏.shRNA沉默Caveolin-1基因对HIV-1TAT诱导的血脑屏障破坏和Aβ的转运蛋白的作用机制[D].广西医科大学.2018
论文知识图
