一、人的毛囊可在裸鼠体内移植（论文文献综述）
李哲昊[1]（2020）在《毛囊干细胞与毛乳头细胞体外培养重建类毛囊器官》文中认为本文主要阐述毛囊的器官结构,同时给出提取毛乳头细胞（DS）以及毛囊干细胞（HFSC）的方法和鉴定标记物和鉴定方法,目的是在体外培养毛囊干细胞与毛乳头细胞,同时在体外培养两种细胞的类毛囊器官,为临床治疗脱发开辟新的治疗手段。当今社会,脱发朝年轻化、普遍化下发展,脱发问题除了对病人外观产生不利影响,还极大危及病人的生活质量与心理状态。毛发移植则为长效解决脱发问题唯一途径。毛发移植的根本就是将自体的资源进行人为的再次分配,然而,当前的毛发移植术所面临的最大问题就是无法找到可以提供大量毛发的供区。FUE是指自体供区直接提取单个毛囊单位移植物的技术,也就是说通过环钻切取供应毛囊的部分,与真皮中层,将毛囊单位和附近组织的连接切断,借助取出整个毛囊单位。此技术存在诸多优势,包括无需缝合、低创伤性、术后快速愈合等,对头皮张力较大或瘢痕体质病人尤其适用,然而此项技术也存在下述不足:①提取毛囊单位所需时间过长,只能应用在植发不大的患者中;②进行此项操作时,易导致毛囊受损,使得移植毛发存活率下降。毛发移植的根本就是将自体的资源进行人为的再次分配,但是所面临的最大问题就是无法找到可以提供大量毛发的供区。经研究发现,HFSC具备慢周期性,此细胞于体内通常呈静止态,进行体内培养时或受到内环境刺激,其可显示出超强的增殖活性。毛囊干细胞是一种能向多个组织分化的潜在组织,其能分化的组织包括表皮、毛囊、各种腺体等,并且在机体遭遇到创伤后的愈合机理中再次生成的毛囊可对直接抑制瘢痕增生。毛乳头细胞在体外也可分化为毛乳头型的细胞群,使毛囊干细胞的繁殖生长提供适合的条件,毛囊干细胞的多种分化潜能促使两种细胞具备生出毛发的功能,应用来自同一个种属的毛囊干细胞和毛乳头细胞解决抗性问题并为未来的毛发移植提供一种新的选择。所以,体外培育毛囊干细胞也是一种增加毛囊细胞的方式,能够获得足够的自体毛囊单位,这样的培养方法在理论上来说能够彻底解决毛囊供区不足的问题。同时,在高速发展的组织工程以及克隆技术推动下,有希望可成功筛选与克隆毛发干细胞,为此类细胞的培养分化与扩增技术奠定了基础。本文通过研究和总结国内外各种试验培育筛选毛囊干细胞以及毛乳头细胞的方法,找寻出最合适的提取和筛选毛囊干细胞和毛乳头细胞的方法,并进行体外培育扩增,通过两者混合制造出细胞悬液并进行动物实验,通过将混合物悬液注射入裸鼠背部,并观察生长出的毛发,之后对毛发进行染色切片以观察重建的类毛囊器官结构,并观察重建后的类毛囊器官的功能。
周玲聪[2]（2020）在《富血小板血浆促进大鼠触须毛囊上段组织再生的研究》文中研究说明目的:探讨富血小板血浆（PRP）在体内和体外条件下对大鼠触须毛囊上段组织中毛球部再生的影响。方法:（1）取SD雄性大鼠10只,麻醉满意后用改良显微分离技术钝性分离生长期的大鼠触须毛囊,用镊子挤压毛囊中段暴露红色的毛球部,紧贴其上方横向切割获得毛囊上段组织150个。（2）采用2次离心法提取大鼠的PRP,将其激活后获得PRP上清液,以不同浓度的PRP上清液加入培养基中,制备成0、5%、10%PRP三组培养液,将毛囊上段组织90个分别置于三种不同的培养液中,在37℃和5%CO2的培养箱中进行体外培养16天,每隔48h换液。（3）取毛囊上段组织60个在三组不同培养液中体外培养1天,然后分别移植到裸鼠背部皮下,4周后处死裸鼠取材。（4）光学显微镜下观察体外培养的毛囊上段组织的生长情况,组织学检测三组不同浓度下体外培养的毛囊上段组织的碱性磷酸酶活性（ALP）,HE染色观察体内外毛囊上段组织的毛球部再生的变化情况,免疫组化观察体内外毛囊上段新生组织中α-SMA的表达情况,统计体内外条件下毛囊再生个数。结果:（1）在体内外条件下PRP可明显促进毛囊上段组织的毛球部再生,体外可见类似毛球部结构形成,裸鼠体内移植可见完整成熟的毛球部再生。（2）5%PRP组可明显提高体外毛囊上段组织中ALP活性,增加毛囊上段组织的再生率。（3）α-SMA在体内外新生组织中可见阳性表达。结论:PRP可以促进毛囊上段组织再生,在体外实验中5%PRP较10%PRP更优。
苏义群[3]（2020）在《头皮真皮祖细胞与表皮干细胞体外预聚集激活WNT通路促进体内毛囊的形成》文中指出研究背景毛发具有十分重要的生理学和社会学的价值,而脱发一直是医学界的一大难题。为此全球各大医药公司每年投入大量的人力物力以寻求治疗脱发的有效疗法。尽管如此,可供选择的治疗手段依然十分有限,而毛囊相关的研究主要受限于缺乏安全高效的药物筛选系统。类器官作为一种由干细胞为原料,经体外培养自我组装成的三维结构,具有与实际器官相似的特征及功能,为研究器官发育、组织再生及疾病发病机理提供了新的可能。近年来,已成功培育多种上皮类器官,例如乳腺,唾液腺以及结肠和肝管,但是在体外培育毛囊类器官仍是一大难题,本研究通过体外悬浮共培养头皮真皮祖细胞及表皮干细胞形成具有毛囊早期发育特征的真皮-表皮细胞聚集体,探究了 WNT信号通路在毛囊类器官形成过程中的作用,并通过体内实验证实其促生发能力,为实现高效培育毛囊类器官提供了新的途径。实验目的1.通过构建真皮祖细胞和表皮干细胞的三维聚集体探索体外培育毛囊类器官的实验方法。2.对成功构建的毛囊类器官进行组织学及遗传学评估。3.探究WNT信号通路在毛囊类器官形成早期发挥的作用。4.探究培育的毛囊类器官在移植后是否可以有效促进毛发生成。实验方法1.依照本课题组创立的“一步消化法”,从新生儿包皮组织中分离原代表皮细胞,并通过克隆形成实验及流式细胞术检测干细胞标志物α6-integrin的表达对表皮干细胞进行鉴定。通过免疫荧光检测相应的特异性标志物对成人及胎儿头皮组织来源的真皮祖细胞多向分化能力进行鉴定。2.将分离的头皮真皮祖细胞和表皮干细胞重悬于配制好的DMEM/F12（3:1）完全培养基中,然后将其接种到低粘附力Costar（?）6-孔板中进行悬浮共培养以形成细胞聚集体。通过倒置显微镜观察细胞聚集体的形态及生长状态。3.将培养成功的真皮-表皮聚集体制成冰冻标本,通过HE染色探究聚集体的构成结构并通过免疫荧光染色检测聚集体中毛囊发育相关基因的表达,对共培养过程中形成的不同真皮-表皮细胞聚集体进行分类及鉴定。4.利用qRT-PCR检测真皮-表皮细胞聚集体中毛囊发育相关基因的表达。5.在悬浮共培养基中加入WNT3a重组蛋白和WNT抑制剂IWP2,观察聚集体的形成并通过qRT-PCR探究WNT通路相关信号分子在毛囊类器官形成过程中的表达。6.通过裸鼠移植检测真皮祖细胞与表皮干细胞体外预聚集构成的毛囊类器官在移植后对毛发再生的作用。实验结果1.从新生儿包皮组织中成功分离出表皮干细胞,传代培养后子代细胞可以形成符合干细胞评价标准的全克隆,并表达表皮干细胞标志物α6-integrin。免疫荧光结果显示,成人及胎儿头皮组织来源的真皮祖细胞在分化诱导后表达成骨、成脂、成肌、成神经的相关标志蛋白,具有多向分化潜力。2.体外悬浮共培养的头皮真皮祖细胞与表皮干细胞自组装为两种类型的聚集体,免疫荧光结果显示其中Ⅰ型聚集体表达毛囊发育早期标志基因,符合毛囊类器官的鉴定标准。3.RT-PCR结果显示,真皮-表皮聚集体中毛囊早期发育相关信号分子差异性表达,其中WNT信号通路在聚集体形成早期被显着激活。4.WNT通路激活剂WNT3a重组蛋白及WNT通路抑制剂IWP-2,可分别促进和抑制毛囊类器官的形成,表明WNT通路的激活是体外成功培养毛囊类器官形成的必要条件。5.胎儿头皮组织来源真皮祖细胞与表皮干细胞经悬浮共培养聚集后在体内移植中的毛发再生效率明显高于未经预聚集培养的头皮真皮祖细胞与表皮干细胞混合液。6.在与表皮干细胞悬浮共培养的过程中,胎儿头皮来源的真皮祖细胞形成Ⅰ型聚集体（毛囊类器官）的效率明显高于成人头皮来源的真皮祖细胞,表明Ⅰ型聚集体的形成能够反映细胞在移植后毛发再生的能力。结论在本实验中,我们建立了可以在体外高效形成大量毛囊类器官（Ⅰ型聚集体）的实验系统,该系统为检测毛发干细胞的生发潜能,评估诱导多能干细胞及促毛囊再生药物的大规模筛选提供了新的平台。此外,我们还证实了WNT信号通路的早期激活是符合毛囊类器官特征的Ⅰ型聚集体形成的必要条件。本研究还清楚地表明,使用胎儿头皮组织来源的真皮祖细胞培育的毛囊类器官在移植后具有良好的毛发再生能力,而使用成年头皮组织来源的真皮祖细胞在体外有效地再生毛囊类器官仍然是一个巨大的挑战。出于伦理学考虑,在科研及临床应用中不宜广泛使用胎儿组织来源的细胞。因此,未来将致力于从诱导性多能干细胞（iPSC）转化为毛囊干细胞,并探索将成年细胞重编程为胎儿样细胞,以取代本实验中的胎儿来源的细胞。
罗凤林[4]（2020）在《一种长期观察人黑素细胞体内功能的新模型》文中研究指明目的黑素细胞是人体重要的功能细胞,可以抵御外界紫外线对皮肤的损伤。对黑素细胞特性的深入研究有助于理解色素障碍性疾病的发生机制以及开发新的治疗策略。与细胞实验相比,动物模型更有利于观察黑素细胞在体内的功能状态。然而现有的用于黑素细胞移植的动物模型存在一定的局限性,如移植后的黑素细胞定位异常,黑素细胞移植后观察时间较短等问题。因此,迫切需要一种稳定的移植模型来评估人黑素细胞在体内的生物学特征及长期功能维持。方法在本研究中,我们首先利用硅胶小室将新生小鼠的表真皮细胞移植至免疫缺陷小鼠的背部皮肤,建立了改良的毛囊重构模型。然后在移植后的不同时间点观察移植小鼠重构的皮肤中生长期、退行期和休止期毛囊的数量和比例,并与正常小鼠进行比较。最后,将人表皮黑素细胞和新生小鼠的表真皮细胞混合后进行共同移植,并注射抗Asialo GM1抑制免疫排斥反应,通过Masson-Fontana染色、多巴染色和免疫荧光染色观察人表皮黑素细胞在免疫缺陷小鼠体内的整合部位、功能和存活时间。结果1.通过改良的小室模型,将C57BL/6新生小鼠的5×106个表皮细胞和5×106个真皮细胞移植到裸鼠背部皮肤内,可以成功重建毛囊。移植2周时,裸鼠背部伤口已结痂,基本愈合;移植3周时,裸鼠背部移植部位已长出毛发,且随着时间的延长,毛发逐渐浓密增多。通过移植后第2周至第8周的观察发现,移植裸鼠背部皮肤重构的毛发密度与正常C57BL/6小鼠背部毛发密度接近,无显着统计学差异。2.生长期、退行期、休止期的毛囊比例同样无明显差异,毛发周期基本同步。将人表皮黑素细胞共移植后3周,在重构的毛囊和毛干中均存在Masson-Fontana阳性和多巴阳性细胞,提示这些细胞能够整合到生理性分布区域且发挥功能。利用免疫荧光染色发现毛囊中存在同时表达人特异性细胞核hNuclei及黑素细胞标记物TYRP1阳性的细胞,提示这些细胞是人源性的黑素细胞。3.移植后11周,毛囊内仍可见多巴染色和Masson-Fontana染色阳性的细胞,提示这些黑素细胞能够在免疫缺陷小鼠体内长期存活并且具有功能。结论因此,本研究建立了一个可用于长期观察人黑素细胞体内功能状态的小鼠模型,这有助于进一步研究人黑素细胞在体内的定位和迁移、复制与分化等特性,并为色素脱失性疾病的黑素细胞移植治疗提供更多参考。
谢贝[5]（2019）在《成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的机制研究及在毛囊再生中的应用》文中研究表明目前药物治疗和自体毛囊移植这两种治疗脱发的方法不能促进新的毛囊的形成。真皮毛乳头细胞（Dermal papilla cells,DPCs）在毛囊形态发生和调节毛发循环中起着至关重要的作用,但是体外传代培养会快速丢失其诱导毛发生成的能力。所以,如何在体外获得大量具有诱导毛发再生能力的DPCs已经成为目前毛囊再生研究的热点和难点。本研究的主要目的是探究海藻酸钠的三维培养环境是否能够诱导真皮成纤维细胞向毛乳头样细胞的转化及可能的作用机制。为促进成纤维细胞的聚集,我们利用静电喷雾的方法制备包裹真皮成纤维细胞的海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸（Alginate-poly-L-lysine-alginate,APA）微球,分别通过CCK-8和RT-PCR的方法检测人真皮成纤维细胞的增殖和人毛乳头特异性基因的表达;碱性磷酸酶染色和定量及流式细胞技术的方法检测人毛乳头标记基因的蛋白表达水平。发现在一定的培养时间内APA微球具有良好的生物相容性,并且人真皮成纤维细胞的DPC标记基因在转录和蛋白水平都随着APA微球培养时间的增加而增强。为探究人毛乳头样细胞是否具有诱导毛发再生的能力,诱导产生的毛乳头样细胞和新生鼠表皮细胞共同通过皮下注射的方法注射到裸鼠背部来观察新生毛发的再生情况。H&E染色、免疫荧光染色及免疫组织化学染色的方法确定新生毛囊的来源和功能,发现4周后裸鼠背部能够产生类似于阳性对照的黑色团状结构和毛囊样结构,并且人线粒体标记进一步确定新生毛囊结构至少部分来自于人毛乳头样细胞,同时毛乳头标记性基因的染色也进一步说明产生的毛囊样结构具有毛发的功能。随后对人毛乳头细胞、人真皮成纤维细胞及人毛乳头样细胞进行了转录组水平的测序分析,结果表明人真皮成纤维细胞向人毛乳头样细胞转化过程中Wnt信号通路激活,并且APA三维培养环境下分别加入Wnt信号的抑制剂或激活剂后DPC特异性基因也随之分别发生下调或上调,揭示了Wnt信号通路在人真皮成纤维细胞向人毛乳头样细胞转化过程中起着重要作用。此外,我们发现APA微球处理的鼠真皮成纤维细胞同样能够转化为鼠毛乳头样细胞。并且与鼠新生鼠表皮细胞构建的毛囊再生模型后具有诱导毛囊样结构的形成和毛发色素沉着的能力,证明了APA微球诱导DF-DPC转化的普适性。综上,本研究证明了APA微球处理能够分别诱导人/鼠成纤维细胞转化为人/鼠毛乳头样细胞,并且人/鼠毛乳头样细胞聚集和毛乳头功能活性的获得能够诱导毛囊再生,在此过程中Wnt信号通路起着重要的调控作用。通过APA微球处理得到的毛乳头样细胞能够为毛囊再生提供一种新颖、充分而且更安全的毛乳头细胞的来源。
陈伟[6]（2019）在《生物打印修复动物多组织器官缺损的研究》文中研究说明目的:本研究尝试运用生物打印技术在体外构建一种新的细胞-材料复合物修复裸鼠颅骨缺损,并进一步采用原位打印形式修复裸鼠背部皮肤缺损,此外基于连续组织切片重建皮肤三维数字模型,为将来多细胞多层次的在体生物打印奠定基础。方法:1.构建裸鼠双侧颅骨缺损（4×4mm）,一侧利用生物打印技术构建人骨髓间充质干细胞（BMSCs）-海藻酸钙/氧化纳米细菌纤维素水凝胶（CA/BC）复合物后植入颅骨缺损内;另一侧仅植入CA/BC作为自身对照。8周后通过大体观察、组织学检查、Anti-HLA Class I抗体免疫组化染色和micro-CT等评估颅骨修复的效果。2.构建裸鼠背部全层皮肤缺损（直径7mm）并覆盖CA/BC,以新生C57小鼠表皮/真皮来源原代细胞为种子细胞,每个创面移植5×105个细胞:实验组在CA/BC内原位打印10个高浓度细胞墨点;对照组以1ml注射器手工注射。术后4周观察创面恢复及毛发生长情况,通过HE染色、免疫荧光等检查新生毛囊结构。3.对人正常头皮（面部除皱手术患者）行连续石蜡切片（层厚4μm）及HE染色、20倍显微镜下拍照,获得100张连续图像,在Photoshop CS6中进行配准后导入ImageJ软件行三维重建。结果:1.颅骨缺损实验组、对照组骨愈合率分别为0.880±0.023,0.025±0.010,（P<0.05）,实验组骨缺损愈合良好,对照组仅边缘略有骨质生长;组织学检查证实新生组织为骨样结构;Anti-HLA Class I抗体免疫组化染色证实新生骨来源为打印的BMSCs。2.皮肤缺损实验组创面恢复良好,毛发生长旺盛、均匀,而对照组毛发稀疏、不均匀甚至没有毛发生长。组织学证实实验组新生皮肤含完整毛囊结构,而对照组几乎没有毛囊形成。3.完成皮肤结构的三维重建,可在ImageJ软件内动态显示并可重建各个角度截面的二维结构。结论:本研究证明了生物打印体外构建BMSCs-CA/BC复合物修复裸鼠颅骨缺损以及原位打印修复皮肤缺损的可行性;此外,以连续切片进行三维重建的方式也为将来多细胞、多层次的生物打印提供了数字化三维数字模型。
樊智猛[7]（2018）在《真皮干细胞培养研究》文中进行了进一步梳理真皮干细胞（Skin-derived precursors,SKPs）是一种能够自我更新,具有多向分化潜能的成体干细胞,其在脱发和伤口愈合中具有关键的治疗潜力。然而,基于SKPs治疗的先决条件是:能够从尽可能小的样本中,分离、培养生产出足够临床需求数目和干性的SKPs。搅拌悬浮生物反应器（Stirred suspension bioreactors,SSB）是一种动态的3D细胞培养系统,有望实现SKPs的迅速增殖。在本研究中,我们利用SSB和传统的静态培养方式连续培养SKPs至第5代,对比分析两种培养体系下的细胞增殖速率、形态、干性和毛囊再生能力。结果表明:与传统培养方式相比,SSB显着促进了 SKPs的增殖。同时,SSB维持了 SKPs的干性特征和生物效能,通过体外干性指标和体内毛囊重组实验证明了 SSB培养的SKPs的体内毛囊再生效率与静态培养的相近。此外,我们使用人包皮和头皮源的样本来模拟SSB培养SKPs的临床应用,并通过毛囊重组试验检测人源SKPs的毛囊再生能力。结果表明SSB可以实现SKPs的大量增殖,同时保持其固有的毛囊再生能力。这对SKPs用于临床治疗有着重要的促进作用。在体外培养时,SKPs的干性会随着传代而逐步降低。为了模拟毛发再生时SKPs所处的细胞微环境,我们在SKPs的培养基中添加了 β-Catenin过表达的表皮细胞条件培养基。结果发现:β-Catenin过表达的表皮细胞条件培养基能显着促进SKPs 的增殖,SKPs 特征基因 Akp2,Clstn2,Trpsl,Nestin1,Versican,PDGFα,SOX2的表达水平显着上调,并能提高SKPs毛囊诱导能力标志性蛋白-碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）的活性。同时,毛囊重组试验表明该条件培养基能够显着促进SKPs在体内的毛囊再生能力。本研究中筛选出条件培养基中的重要组分,内皮素-1（Endothlin-1,ET-1）对于SKPs的增殖和干性维持有重要作用。使用ET-1处理的SKPs在干细胞治疗过程中,能提供增殖更快、毛囊再生能力更强的种子细胞。
肖顺娥[8]（2018）在《富含血小板血浆对毛乳头细胞生物学的影响及用于毛囊重建的研究》文中进行了进一步梳理背景和目的构建组织工程毛囊实现毛囊再生是治疗秃发较有前景的方案。构建组织工程毛囊三大经典要素分别为:种子细胞、细胞支架和信号分子。毛乳头细胞（dermal papilla cells,DPCs）是毛囊重建重要的种子细胞。但是,在常规二维培养过程中,DPCs随着传代次数的增加而逐渐丧失其毛发诱导能力。短时间内大量获取具有诱导能力的DPCs仍比较困难。因此,改善DPCs体外培养条件,扩增细胞数量的同时维持甚至增强其诱导能力至关重要。此外,寻找一种合适的毛囊组织工程支架材料也很有必要。富含血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）经激活后可释放出大量的生长因子,可促进细胞增殖、分化,临床研究表明PRP可用于秃发的治疗,促进毛发生长。PRP凝胶结构呈渔网状,细胞在胶内可存活并增殖,是一种合适的组织工程支架材料。因此,我们在本实验中通过在培养基中添加激活的PRP改善DPCs体外培养条件,并对PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建及用于DPCs三维培养的可行性进行了探讨。该研究结果,不仅为快速获取大量的具有诱导能力的DPCs提供新的方法,也为秃发的治疗提供新策略。方法1.PRP对小鼠及人来源DPCs生物学影响的研究两步离心法提取PRP,经激活后将不同浓度的激活的PRP上清液添加至培养基中培养小鼠及人DPCs,通过CCK8增殖试验筛选出最佳促DPCs增殖的PRP上清液浓度,并对最佳浓度培养条件下的DPCs进行免疫荧光、Western-blot、PCR检测PRP对DPCs生物学活性和特性的影响。通过动物体内毛囊重建模型检测DPCs诱导能力。2.PRP对人DPCs生物学影响的机制研究通过免疫荧光及Western-blot对人DPCs细胞表面磷酸化受体表达情况进行了检测,并通过人磷酸化蛋白芯片对受体所介导的信号通路进行了检测。3.PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建的研究将DPCs、上皮细胞与适量的PRP混合后经凝血酶激活形成包含生发细胞的PRP凝胶,将此凝胶移植至裸鼠背部创面,观察毛囊重建的情况。4.PRP凝胶作为人DPCs三维培养支架的可行性研究将不同数量级及不同代数的人DPCs接种至PRP凝胶上进行培养,观察细胞生长状况及聚集成球情况。结果1.PRP对小鼠及人来源DPCs生物学的影响低浓度激活的PRP可促进人和鼠DPCs增殖,其中5%浓度具有最强的促DPCs增殖作用。对添加5%激活的PRP培养条件下的DPCs的生物学功能指标进行了蛋白水平及基因水平检测,发现与其诱导能力相关的标记物ALP、β-catenin及Versican较对照组均表达上调。动物实验证实添加5%激活的PRP培养的小鼠DPCs较普通培养基培养的DPCs具有更强的毛囊诱导能力。而人DPCs与新生鼠上皮细胞通过微型小室法移植并不能重建出毛囊。2.PRP对人DPCs生物学影响的机制研究添加5%激活的PRP培养条件下的DPCs细胞表面磷酸化受体FGFR1,PDGFRα及PDGFRβ蛋白表达水平明显上调。蛋白芯片结果显示人DPCs磷酸化ERK,JUK,p38及Akt信号蛋白表达水平均出现明显上调,GSK-3信号蛋白表达水平下调。3.PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建的研究包含小鼠DPCs及新生鼠上皮细胞的PRP凝胶移植到裸鼠背部创面后可重建出新的毛囊,且毛发拔除后能够再生新的毛发。而包含人DPCs及人包皮上皮细胞的PRP凝胶移植到裸鼠背部创面后不能重建出新的毛囊。4.PRP凝胶作为人DPCs三维培养支架的研究人DPCs以0.5×104、1×104、2×104每孔的数量级接种至96孔板PRP凝胶上培养,细胞既不贴壁生长也不聚集成球;增大密度至5×104时,每孔仅可见数个细胞聚集体形成,且形状不规则,细胞间连接不紧密,其他绝大部分细胞均呈接种时的圆形状态;低代与高代DPCs生长方式相似。结论1.培养基中添加5%激活的PRP上清液可明显促进小鼠及人DPCs的增殖,并增强其毛囊诱导能力。2.PRP促进人DPCs增殖并增强其诱导能力是通过上调磷酸化受体FGFR1,PDGFRα及PDGFRβ的表达,从而激活MAPK、Akt及Wnt信号通路。3.PRP凝胶可作为细胞支架用于组织工程毛囊再生。4.PRP凝胶不适用于人DPCs的三维培养。
赵倩[9]（2017）在《人成纤维细胞转化为DP样细胞并参与毛囊重建》文中提出由于现代社会工作压力增大,饮食睡眠不规律,外加环境污染等原因,脱发已经成为一个社会性的普遍问题。最新临床研究表明,在最常见的雄激素脱发患者中,头皮毛囊干细胞并未受到损害,而是由于真皮乳头（dermal papilla,DP）的信号传导受到干扰,从而无法长期维持头发的生长。因此DP在脱发中是关键的药物治疗靶点。目前治疗脱发的另一种重要手段是毛发移植,但用于移植的毛囊不能进行扩增,因而在数量上受到限制。近年来,随着表皮干细胞与毛囊干细胞研究的不断深入,以干细胞为基础的毛囊重建为治疗脱发带来了新的希望。然而,毛囊重建不仅需要具有能够分化成毛囊上皮结构的表皮谱系干细胞,还需要具有毛囊诱导能力的DP真皮细胞。但DP细胞无法在体外大量扩增并维持其诱导能力。因此大多数研究致力于在体外扩增DP细胞并维持其毛囊诱导能力的特性的研究,但效果远达不到临床需求。因此,如何在体外获得大量具有毛囊诱导能力的真皮细胞进行移植并重建毛囊是目前该领域急需解决的问题。DP是一群特化的真皮成纤维细胞,在毛囊形态发生以及毛囊周期调控中发挥重要作用。研究表明成纤维细胞与具有毛囊诱导能力的DP细胞具有共同起源,即两者均来源于小鼠胚胎发育12.5天的成纤维前体细胞,且两者基因表达的相似性高达96%。依据DP与成纤维细胞发育起源的微妙关系,我们尝试建立了因子诱导体系以及共培养诱导体系,将大量易获得的人真皮成纤维细胞转化为具有毛囊诱导能力的DP细胞,实现毛囊再生,为毛囊重建治疗脱发提供潜在细胞来源。在本研究中,首先通过检测人DP细胞中高表达的特征性基因,建立了检测诱导转化体系的初步评判标准;其次,建立了将人胎儿与成年包皮来源的成纤维细胞转化为毛囊诱导能力细胞的多因子诱导体系即通过加入特定浓度生长因子（PDGF+FGF2）与小分子化合物BIO,诱导培养六天,随后加因子三维悬浮培养24小时。研究结果表明诱导之后胎儿和成人成纤维细胞高表达大部分DP的特征性基因,我们称之为DP样细胞。将胎儿与成人DP样细胞与新生小鼠表皮细胞相混合移植到免疫缺陷小鼠的背部,可观察到毛囊结构的形成,并且发现DP样细胞参与形成毛囊的DP以及真皮鞘结构的组建。值得关注的是,成人包皮来源的成纤维细胞经因子诱导体系的转化也能促进毛囊重建过程中毛囊的形成,这一实验结果对临床毛囊重建具有重要的参考价值。此外,我们还探究了毛囊重建过程中,大鼠毛囊干细胞以及成年包皮来源的角质细胞在毛囊重建过程中的作用。本研究建立了将易大量获得的人成纤维细胞转化为具有毛囊诱导能力的DP样细胞的转化模型,该模型将在组织工程——毛囊重建与临床脱发治疗领域具有重要应用价值。同时,还将为揭示皮肤发育过程中的上皮-间充质的相互作用机制提供重要线索。
宋峰[10]（2017）在《构建有毛发生长能力的组织工程皮肤的研究》文中研究指明研究背景皮肤是人体面积最大的器官,覆盖全身,发挥着保护、感觉、调节体温、分泌与排泄、吸收、代谢、免疫等作用。作为人体的第一道屏障,皮肤直接与外界接触,各种物理、化学、生物等因素都能引起皮肤的损伤,不及时有效治疗会给患者带来极大痛苦,甚至威胁生命。对于皮肤缺损,传统的治疗方法是进行皮肤移植或皮瓣移植术,但存在供体不足和免疫排斥等问题。组织工程皮肤（Tissue Engineering Skin,TES）是将种子细胞与细胞外基质替代物混合制成的人工皮肤,可用于创面修复,重建皮肤功能,具有良好的发展前景。现在已能制备比较成熟的表皮-真皮组织工程皮肤,基本能够快速覆盖创面,但是缺乏毛囊等皮肤附属器。毛囊含有丰富的毛囊干细胞,在皮肤创伤的修复、重建中有重要作用。毛囊所生长出的毛发除了调节体温、分泌与排泄等基本功能之外,对于人类还有影响美观,进而进一步影响心理及社交的作用。构建有毛发生长能力的组织工程皮肤不但能促进皮肤损伤修复,还可以重建皮肤功能,而且对于脱发等疾病有一定治疗作用。研究目的1.观察毛囊胚胎发育及毛囊干细胞动态衍变过程,探讨毛囊的发生、发展过程,为寻找有诱导毛发形成能力的种子细胞提供依据。2.掌握体外构建表皮-真皮组织工程皮肤的技术及明确移植后的体内转归,探讨表皮-真皮组织工程皮肤的皮肤缺损修复以及毛发生长能力。3.寻找具有诱导毛发形成能力的种子细胞,明确其能维持诱导能力的培养方式及构建方式,为构建有毛发生长能力的组织工程皮肤奠定基础。4.构建有毛发生长能力的组织工程皮肤并修复皮肤缺损。研究方法1.以C57BL/6不同胎龄胎鼠的皮肤为模型,通过HE染色观察毛囊胚胎发育过程,免疫荧光染色标记相关毛囊干细胞并观察毛囊干细胞动态衍变过程。2.分离、培养儿童包皮表皮细胞及真皮成纤维细胞,以自制SD大鼠鼠尾胶原为基质,应用气-液面培养,构建表皮-真皮组织工程皮肤。制备大鼠背部急性全层皮肤损伤模型,将构建的表皮-真皮组织工程皮肤覆盖伤口,观察其体内转归。将原代培养的成人毛乳头细胞与成人毛囊干细胞以上述方式制备组织工程皮肤,并进行体内移植观察其转归。3.将新鲜分离的C57BL/6新生鼠（24小时以内）真皮细胞、贴壁培养的原代真皮细胞、悬浮培养的原代真皮细胞以及悬浮培养后吹打成单细胞悬液,和表皮细胞与鼠尾胶原蛋白混合,植入裸鼠背部制备的皮肤全层缺损处,三周后观察毛发生长情况并组织学染色观察毛囊结构。将C57BL/6成鼠胡须毛乳头细胞P1代与新鲜分离的新生鼠表皮细胞制备成类似毛囊样3D结构,经3D培养后,植入C57BL/6小鼠肾外膜下,三周后进行观察。4.将成人头皮来源毛乳头细胞、儿童包皮成纤维细胞、人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞分别复合儿童包皮表皮细胞为种子细胞,进行2D或3D的构建及培养方式,将其移植裸鼠体内,验证不同种子细胞毛发形成能力的异同,寻找能稳定诱导毛发形成的种子细胞。5.以儿童包皮来源的表皮细胞和成纤维细胞为种子细胞,使用3D打印的方法在表皮-真皮组织工程皮肤的真皮层中打印毛囊样3D结构,构建有毛发生长能力的组织工程皮肤;此外,还以人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞混合儿童包皮来源的表皮细胞为种子细胞直接构建有毛发生长能力的组织工程皮肤;将构建的组织工程皮肤移植裸鼠体内修复皮肤缺损并观察有无毛发生长能力。研究结果1.毛囊胚胎发育及相关毛囊干细胞动态衍变过程（1）HE染色显示:C57BL/6小鼠从胚胎发育E14.5天开始出现表皮局部增厚,形成基板,真皮细胞在下方聚集;E15.5天增厚的表皮细胞逐渐形成毛芽,基板下方聚集的真皮细胞开始被形成的毛芽包裹;E16.5-E17.5天毛芽进一步发育,真皮细胞逐渐被毛芽包裹,形成毛囊的毛乳头结构;E18.5天至出生后,继续完成毛囊的胚胎发育,出生时毛囊的结构基本形成。（2）毛囊干细胞免疫荧光标记显示:随着毛囊发育和延长,标记的毛囊干细胞呈时空动态表达。2.体外构建的表皮-真皮组织工程皮肤（1）体外构建的表皮-真皮组织工程皮肤气-液面培养5天后,HE染色可观察到表皮和真皮两层结构,且表皮呈现复层化。表皮细胞及成纤维细胞状态良好,分布均匀。胶原蛋白交织成网将成纤维细胞固定在基质中。移植3周后,皮肤创口处完全愈合,与周围组织紧密连接,未见毛发;组织学显示缺损处皮肤形成表皮、真皮双层结构,且表皮复层化,未见毛囊结构。（2）将原代培养的成人毛乳头细胞与成人毛囊干细胞以上述方式制备的组织工程皮肤植入裸鼠体内三周后也未见毛发生长,组织学染色观察未见毛囊结构。3.寻找具有诱导毛囊形成能力的种子细胞（1）新鲜分离的C57BL/6新生鼠真皮细胞和表皮细胞与鼠尾胶原蛋白混合,植入裸鼠背部制备的皮肤全层缺损处三周后可见黑色毛发生长。（2）贴壁培养的原代真皮细胞组,三周后未见毛发生长,组织学染色未见毛囊结构;而在悬浮培养的原代真皮细胞组,三周后可见黑色毛发生长;悬浮培养的原代真皮细胞吹打成单细胞悬液组,三周后无毛发生长。提示3D悬浮培养可保留新生鼠原代真皮细胞的诱导毛发形成能力。（3）C57BL/6成鼠胡须毛乳头细胞P1代与新鲜分离的新生鼠表皮细胞制备成类似毛囊样3D结构,经3D培养后,植入C57BL/6小鼠肾外膜下三周后可见黑色毛发生长,组织学染色观察见毛囊结构。（4）成人毛乳头细胞P1与新鲜分离的儿童包皮表皮细胞制备成类似毛囊样3D结构,经3D培养后,移植至裸小鼠背部皮肤皮下观察3周,见白色毛纤维生长。（5）儿童包皮成纤维细胞P1与新鲜分离的儿童包皮表皮细胞制备成类似毛囊样3D结构,经3D培养后,移植至裸小鼠背部皮下观察3周,见白色毛纤维生长。植入皮内,导丝引导,三周后有白色毛纤维长出,经线粒体DNA检测毛发含有人类源性的DNA。（6）人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞、新鲜分离的新生鼠表皮细胞与鼠尾胶原蛋白混合,植入裸鼠背部皮下能长出黑色毛发。人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞、新鲜分离的儿童包皮来源表皮细胞与鼠尾胶原蛋白混合,植入裸鼠背部皮下能长出黑色毛发。4.构建带有毛囊的表皮-真皮组织工程皮肤（1）使用3D打印方法在表皮-真皮组织工程皮肤的真皮层中打印含儿童包皮来源表皮细胞和成纤维细胞的毛囊样3D结构,将构建的组织工程皮肤移植到裸鼠背部全层皮肤缺损处,三周后可见白色毛发。（2）人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞与新鲜分离的儿童包皮表皮细胞混合制备组织工程皮肤,皮下移植及移植到裸鼠背部全层皮肤缺损处,三周后可见黑色毛发。研究结论1.毛囊胚胎发育及相关毛囊干细胞动态衍变过程毛囊胚胎发育进一步确认了毛囊的胚胎发育是表皮细胞与真皮细胞相互作用的结果,E14.5-E17.5是C57BL/6毛囊形态学发育的关键时间。2.构建表皮-真皮组织工程皮肤（1）体外构建的表皮-真皮组织工程皮肤经气-液面培养5天后呈现表皮、真皮双层结构,表皮呈现复层化。体外移植至裸鼠全层皮肤创伤模型能使皮肤创口的愈合良好。（2）培养的人毛乳头细胞以单细胞的方式接种于真皮层中表皮-真皮组织工程皮肤体内移植后不具备形成毛发的能力。3.寻找能够诱导毛发形成的种子细胞（1）能够诱导毛发形成的细胞制备成类似毛囊样3D结构,并经3D培养后,可较好的维持其诱导毛囊形成的能力。（2）儿童包皮的成纤维细胞与表皮细胞制备成类似毛囊样的3D结构具有诱导毛发形成的能力,但是所生长出的毛发不含黑色素。（3）人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞具有良好的诱导毛发形成的能力,并且长出的毛发是含黑色素的。4.构建带有毛囊的表皮-真皮组织工程皮肤（1）使用3D打印机将能诱导毛发形成的种子细胞在表皮-真皮组织工程皮肤的真皮层上接种成含种子细胞的3D结构,体内移植3周后可构建带有白色毛发的表皮-真皮组织工程皮肤。（2）人神经嵴细胞诱导的毛乳头细胞与新鲜分离的儿童包皮细胞制备成表皮-真皮组织工程皮肤皮下移植及移植到裸鼠体内,可构建带有黑色毛发的表皮-真皮组织工程皮肤。
二、人的毛囊可在裸鼠体内移植（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人的毛囊可在裸鼠体内移植（论文提纲范文）
（1）毛囊干细胞与毛乳头细胞体外培养重建类毛囊器官（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 毛囊干细胞和毛乳头细胞提取,体外增殖以及鉴定 |
| 1.1 毛囊干细胞提取,体外增殖及鉴定 |
| 1.2 毛乳头细胞提取及体外增殖 |
| 第二章 增殖细胞悬液动物实验 |
| 2.1 毛乳头细胞及毛囊干细胞体外增殖细胞悬液注射法及小室法植入裸鼠背部 |
| 第三章 表皮干细胞对体外类毛囊器官重建之影响 |
| 3.1 含附件皮肤组织工程构建相关研究 |
| 第四章 总结及展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间成果 |
| 致谢 |
（2）富血小板血浆促进大鼠触须毛囊上段组织再生的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略语索引 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂配制 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.4 标本制备石蜡切片 |
| 2.2.5 HE染色 |
| 2.2.6 酶标免疫组化 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 PRP的制备 |
| 3.2 正常大鼠触须毛囊形态观察 |
| 3.2.1 大体形态结构观察 |
| 3.2.2 HE染色观察 |
| 3.2.3 α-SMA的表达模式 |
| 3.3 大鼠触须毛囊上段形态观察 |
| 3.3.1 大体形态结构观察 |
| 3.3.2 HE染色观察 |
| 3.4 大鼠触须毛囊上段体外培养再生情况 |
| 3.4.1 倒置显微镜下形态结构观察 |
| 3.4.2 Alp活性测定 |
| 3.4.3 HE染色观察 |
| 3.4.4 α-SMA的表达模式 |
| 3.4.5 再生情况统计 |
| 3.5 大鼠触须毛囊上段体内移植再生情况 |
| 3.5.1 大体形态结构观察 |
| 3.5.2 HE染色观察 |
| 3.5.3 α-SMA的表达模式 |
| 3.5.4 再生情况统计 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 |
| 致谢 |
（3）头皮真皮祖细胞与表皮干细胞体外预聚集激活WNT通路促进体内毛囊的形成（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 种子细胞的分离培养及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 体外毛囊类器官的构建及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 毛囊类器官的体内移植及生发潜力的评估 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）一种长期观察人黑素细胞体内功能的新模型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 本文英文缩写对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 技术路线 |
| 2 利用小室法重建毛囊 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 伦理声明 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要仪器、耗材 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要溶液配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 获取新生小鼠皮肤 |
| 2.2.2 分离小鼠表皮细胞 |
| 2.2.3 分离小鼠真皮细胞 |
| 2.2.4 小室法重建毛囊 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 成功分离新生鼠皮肤及小鼠表真皮细胞 |
| 2.3.2 小室法可以成功重建毛囊 |
| 2.4 讨论 |
| 3 比较移植小鼠与野生鼠的毛发数量及毛发周期 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器、耗材 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 通过组织学染色计数移植鼠与野生鼠的毛发数量 |
| 3.2.2 通过组织学染色计数移植鼠与野生鼠的毛发周期 |
| 3.2.3 统计学方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 移植小鼠与野生鼠毛发数量无明显差异 |
| 3.3.2 移植小鼠与野生鼠毛发周期无明显差异 |
| 3.4 讨论 |
| 4 小室法将人黑素细胞在小鼠体内移植 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要仪器、耗材 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要溶液配置 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 人黑素细胞的分离与培养 |
| 4.2.2 通过小室模型移植人黑素细胞 |
| 4.2.3 通过形态学染色比较黑素数量及黑素分布情况多巴染色 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 通过小室法移植,人黑素细胞能够成功整合进入重建的毛囊 |
| 4.3.2 人黑素细胞在小鼠体内至少可存活11周 |
| 4.4 讨论 |
| 5 结语与展望 |
| 5.1 结语 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 6 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（5）成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的机制研究及在毛囊再生中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 本文中所用英文缩写词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 毛囊再生 |
| 1.1.1 毛囊的解剖学和生物学特性 |
| 1.1.2 毛囊的发育、生长和再生 |
| 1.1.3 毛囊的形态发生三个主要阶段:诱导,器官形成和细胞分化 |
| 1.1.4 体内诱导毛囊再生模型 |
| 1.2 不同来源成纤维细胞的分类及功能 |
| 1.3 成纤维细胞聚集和迁移的平衡 |
| 1.3.1 不同类型的细胞聚集行为 |
| 1.3.2 成纤维细胞聚集的分子机制 |
| 1.4 海藻酸钠微球在生物医学中应用 |
| 1.5 本文研究背景及内容 |
| 第二章 人真皮成纤维细胞在体外3D微环境中重编程为DPC样细胞 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 细胞、实验试剂及耗材 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 APA微球的制备 |
| 2.3.3 APA微球中细胞增殖的测定 |
| 2.3.4 APA微球中细胞总RNA的提取及RT-PCR检测 |
| 2.3.5 BCA法蛋白浓度的测定 |
| 2.3.6 APA微球的蛋白水平分析 |
| 2.3.7 APA微球中细胞碱性磷酸酶显色 |
| 2.3.8 APA微球中AKP含量的测定 |
| 2.3.9 流式细胞仪计数 |
| 2.3.10 统计分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 海藻酸钠微球形态学观察 |
| 2.4.2 APA微球和人真皮成纤维细胞具有良好的生物相容性 |
| 2.4.3 APA微球诱导人真皮成纤维细胞中DP特异性标记基因上调 |
| 2.4.4 APA微球中DP特异性基因的蛋白表达情况 |
| 2.4.5 APA微球培养过程中相关信号通路的改变 |
| 2.5 讨论分析 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 APA微球诱导的人DPC样细胞具有诱导毛发再生的能力 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞、实验试剂及耗材 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞培养 |
| 3.3.2 APA微球的制备 |
| 3.3.3 新生鼠表皮细胞和真皮细胞的提取 |
| 3.3.4 CM-Dil活细胞染色剂标记细胞 |
| 3.3.5 毛囊重建模型的构建 |
| 3.3.6 冰冻切片 |
| 3.3.7 冰冻切片H&E染色 |
| 3.3.8 冰冻切片免疫荧光染色 |
| 3.3.9 冰冻切片免疫组化 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 C57 新生鼠表皮细胞和真皮细胞的分离 |
| 3.4.2 皮下毛发再生模型的构建 |
| 3.4.3 APA微球诱导的人毛乳头样细胞诱导毛发再生 |
| 3.4.4 APA微球毛发诱导能力依赖于人真皮成纤维细胞的代数 |
| 3.4.5 新生毛囊样结构来源于APA微球诱导的人毛乳头样细胞 |
| 3.4.6 DPC样细胞诱导毛发生成具有DP功能 |
| 3.5 讨论分析 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 人毛乳头样细胞的产生依赖于Wnt信号通路 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞、实验试剂及耗材 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞培养 |
| 4.3.2 海藻酸钠微球的制备 |
| 4.3.3 转录组测序 |
| 4.3.4 抑制剂和激活剂的添加 |
| 4.3.5 总RNA的提取及RT-PCR |
| 4.3.6 统计分析 |
| 4.4 结果分析 |
| 4.4.1 转录组质量的整体评估 |
| 4.4.2 差异聚类分析 |
| 4.4.3 人毛乳头样细胞与人真皮成纤维细胞的差异分析 |
| 4.4.4 人毛乳头样细胞和人真皮成纤维细胞的转录差异基因的GO富集分析 |
| 4.4.5 人毛乳头样细胞和人真皮成纤维细胞的转录本差异基因的KEGG富集分析 |
| 4.4.6 APA微球诱导人毛乳头样细胞Wnt信号上调 |
| 4.4.7 抑制WNT信号DP相关基因表达下调 |
| 4.4.8 Wnt下游信号在人DPC样细胞获得中起重要作用 |
| 4.4.9 激活WNT信号DP相关基因表达上调 |
| 4.5 讨论分析 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 APA微球诱导鼠真皮成纤维细胞到鼠毛乳头样细胞 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞、实验试剂及耗材 |
| 5.2.2 主要实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 C57 新生鼠表皮细胞和真皮细胞的获得 |
| 5.3.2 C57 新生鼠真皮成纤维细胞的获得 |
| 5.3.3 细胞培养 |
| 5.3.4 APA微球的制备 |
| 5.3.5 APA微球中AKP活性测定 |
| 5.3.6 APA微球中细胞碱性磷酸酶显色 |
| 5.3.7 APA球中细胞总RNA的提取,c DNA的合成,RT-PCR测定 |
| 5.3.8 流式细胞计数 |
| 5.3.9 毛囊重建模型的构建 |
| 5.3.10 统计分析 |
| 5.4 结果分析 |
| 5.4.1 C57 新生鼠成纤维细胞的形态 |
| 5.4.2 APA微球诱导鼠DP特异性基因的表达 |
| 5.4.3 鼠真皮成纤维细胞在APA微球中ALP的表达分析 |
| 5.4.4 C57 新生鼠真皮细胞CD133 阳性细胞含量 |
| 5.4.5 毛囊重建模型的建立 |
| 5.4.6 相关信号通路的改变情况 |
| 5.5 讨论分析 |
| 5.6 小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读学位期间发表的论文目录 |
| 致谢 |
（6）生物打印修复动物多组织器官缺损的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 绪论 |
| 第一章 生物打印裸鼠颅骨缺损修复研究 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 实验材料和方法 |
| 1.2.0 实验动物 |
| 1.2.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2.2 EGFP-BMSCs的复苏与培养 |
| 1.2.3 EGFP-BMSCs-生物材料复合物的构建 |
| 1.2.4 裸鼠颅骨缺损模型的构建与分组 |
| 1.2.5 X光平片、Micro-CT扫描及Mimics三维重建与评价 |
| 1.2.6 骨缺损部位取材与HE染色 |
| 1.2.7 Anti-HLA Class I抗体免疫组化染色 |
| 1.2.8 冰冻切片及EGFP荧光检查 |
| 1.2.9 统计学方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 EGFP-BMSCs的复苏与培养 |
| 1.3.2 EGFP-BMSCs-生物材料复合物的构建 |
| 1.3.3 裸鼠颅骨缺损模型的构建 |
| 1.3.4 大体观察及X光平片检查 |
| 1.3.5 Micro-CT扫描及三维重建骨愈合率 |
| 1.3.6 HE染色结果 |
| 1.3.7 免疫组化染色结果 |
| 1.3.8 EGFP荧光检查结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 全层皮肤损伤的原位打印修复与毛囊重建研究 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 实验材料和实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.2.3 新生小鼠皮肤原代细胞的获取 |
| 2.2.4 裸鼠背部全层皮肤缺损模型的构建与分组 |
| 2.2.5 大体观察与毛发计数 |
| 2.2.6 HE染色检查 |
| 2.2.7 双重染色免疫荧光检查 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 大体观察 |
| 2.3.2 毛发数量 |
| 2.3.3 HE染色检查 |
| 2.3.4 双重免疫荧光染色检查 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 人皮肤三维数字模型构建方法初探 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 实验材料和实验方法 |
| 3.2.1 主要试剂和仪器 |
| 3.2.2 标本获取与切片制作 |
| 3.2.3 二维图像采集与处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
（7）真皮干细胞培养研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词对照表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 烧伤 |
| 1.1.1 烧伤引发的问题 |
| 1.1.2 当前的治疗方法及其局限性 |
| 1.2 脱发 |
| 1.2.1 脱发引发的问题 |
| 1.2.2 当前治疗方法及其局限性 |
| 1.3 真皮干细胞 |
| 1.4 基于皮肤干细胞的皮肤损伤修复和毛囊再生 |
| 1.5 论文研究方法 |
| 1.6 论文结构 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 HE染色 |
| 2.2.2 提取RNA |
| 2.2.3 反转录PCR |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR |
| 2.2.5 碱性磷酸酶活性检测 |
| 2.2.6 碱性磷酸酶染色 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.8 蛋白质免疫印迹 |
| 2.2.9 毛囊重组实验 |
| 2.2.10 免疫荧光染色 |
| 2.2.11 表皮干细胞的分离和培养 |
| 2.2.12 真皮干细胞的分离和培养 |
| 第3章 利用生物反应器培养真皮干细胞 |
| 3.1 生物反应器 |
| 3.1.1 生物反应器的类型 |
| 3.1.2 搅拌悬浮生物反应器的优点 |
| 3.1.3 搅动的影响 |
| 3.2 SSB培养对真皮干细胞增值的影响 |
| 3.3 SSB培养对真皮干细胞形态的影响 |
| 3.4 SSB培养对真皮干细胞特征性基因表达的影响 |
| 3.5 SSB培养对真皮干细胞毛囊诱导再生能力的影响 |
| 3.6 生物反应器培养人源真皮干细胞体系的建立 |
| 3.7 小结 |
| 第4章 B-catenin过表达的表皮细胞条件培养基对真皮干细胞的影响 |
| 4.1 CNNB1基因在表皮细胞的过表达 |
| 4.2 条件培养基对真皮干细胞形态学的影响 |
| 4.3 条件培养基促进真皮干细胞的增值 |
| 4.4 条件培养基对真皮干细胞基因表达的影响 |
| 4.5 条件培养基对真皮干细胞碱性磷酸酶活性的影响 |
| 4.6 条件培养基对真皮干细胞毛囊诱导能力的影响 |
| 4.7 小结 |
| 第5章 内皮素-1对真皮干细胞的影响 |
| 5.1 内皮素1对真皮的作用 |
| 5.2 不同浓度内皮素对SKPS增值的影响 |
| 5.3 内皮素对真皮干细胞毛囊诱导能力的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
（8）富含血小板血浆对毛乳头细胞生物学的影响及用于毛囊重建的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 PRP对小鼠及人DPCs生物学的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 PRP对小鼠及人DPC生物学影响的机制研究 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 PRP凝胶作为细胞支架用于毛囊重建的研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 PRP凝胶作为人DPCs三维培养支架的研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间的成果 |
| 致谢 |
（9）人成纤维细胞转化为DP样细胞并参与毛囊重建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 毛囊及毛囊周期 |
| 1.2 雄激素脱发及治疗方法 |
| 1.3 毛囊重建 |
| 1.4 DP |
| 1.5 成纤维细胞转化为DP细胞的可行性分析 |
| 1.6 本研究的研究目的和意义 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂及配制 |
| 2.4 实验方法 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 人DP特征性基因的表达模式 |
| 3.2 多因子诱导人胎儿成纤维细胞转化体系的建立 |
| 3.3 人成纤维细胞与表皮细胞共培养体系的建立 |
| 3.4 多因子诱导体系转化成人成纤维细胞为DP样细胞 |
| 3.5 DP样细胞参与毛囊重建 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 p63在小鼠表皮命运决定过程中时空表达模式的研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 展望 |
| 7 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）构建有毛发生长能力的组织工程皮肤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 观察毛囊胚胎发育过程及相关毛囊干细胞动态衍变过程 |
| 一、实验动物与器材 |
| 二、实验摊 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二章 体外构建表皮-真皮组织工程皮肤 |
| 一、实验试剂与器材 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第三章 寻找能够诱导毛发形成的种子细胞 |
| ―、实验动物、试剂与器材 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第四章 构建有毛发生长能力的组织工程皮肤 |
| 一、实验动物、试剂与器材 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 组织工程皮肤及组织工程毛囊的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 致谢 |
四、人的毛囊可在裸鼠体内移植（论文参考文献）
- [1]毛囊干细胞与毛乳头细胞体外培养重建类毛囊器官[D]. 李哲昊. 南方医科大学, 2020(01)
- [2]富血小板血浆促进大鼠触须毛囊上段组织再生的研究[D]. 周玲聪. 南华大学, 2020(01)
- [3]头皮真皮祖细胞与表皮干细胞体外预聚集激活WNT通路促进体内毛囊的形成[D]. 苏义群. 山东大学, 2020(02)
- [4]一种长期观察人黑素细胞体内功能的新模型[D]. 罗凤林. 江苏大学, 2020(02)
- [5]成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的机制研究及在毛囊再生中的应用[D]. 谢贝. 湖南大学, 2019(01)
- [6]生物打印修复动物多组织器官缺损的研究[D]. 陈伟. 上海交通大学, 2019(06)
- [7]真皮干细胞培养研究[D]. 樊智猛. 清华大学, 2018(04)
- [8]富含血小板血浆对毛乳头细胞生物学的影响及用于毛囊重建的研究[D]. 肖顺娥. 南方医科大学, 2018(01)
- [9]人成纤维细胞转化为DP样细胞并参与毛囊重建[D]. 赵倩. 中国农业大学, 2017(05)
- [10]构建有毛发生长能力的组织工程皮肤的研究[D]. 宋峰. 北京协和医学院, 2017(11)