导读:本文包含了流加培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,丁酸,培养基,单克隆抗体,反应器,单细胞,电荷。
流加培养论文文献综述
孙笑寒,李开,欧德冲,岳希洁,陈代文[1]（2019）在《响应面法优化产朊假丝酵母CL15013流加培养工艺及其PFR连续培养的研究》一文中研究指出高核酸酵母是指一类核糖核酸、蛋白质含量相对较高的食用酵母,常用于生产高品质的酵母抽提物,应用于食品增鲜领域。为提高细胞收获量,以选育的产朊假丝酵母CL15013为研究对象,采用Box-Behnken试验对培养液pH值、流加时间及流加次数进行响应面优化,Design-Expert8.0软件处理细胞收获量数据,得到极大值点对应的培养液pH、流加次数及流加时间分别为:6.60、5.77、5.91,选择最优化条件为培养液pH值6.6、流加次数6次、流加时间5.9h次进行3次平行实验,CL15013细胞收获量平均达到19.07 g/L,较优化前提高了13.5%。在流加培养的基础上,搭建PFR连续培养装置初步研究其连续培养条件及特性,连续培养生长曲线发现,PFR连续培养只需一次适应期及对数期,从20～72h,细胞收获量保持在16%～17%之间,大大提高了CL15013的细胞收获效率,且PFR连续培养过程中核酸质量分数变化不大。产朊假丝酵母CL15013的流加培养及连续培养研究,为其工业化高效生产奠定了基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
牛慧洁[2]（2018）在《rCHO细胞流加培养中尿苷对抗体电荷异质性的影响》一文中研究指出近年来,基于CHO细胞流加培养生产抗体药物得到了越来越多生产企业的关注。电荷异质性作为抗体药物最为关键的质量属性之一,对药物的生物学活性和安全性等有着多方面的影响。因此,对细胞培养中所产生的抗体电荷变体进行有效的控制非常重要。本研究以表达单克隆抗体的重组rCHO细胞为研究对象,通过析因实验的方法考察了培养过程各参数对抗体电荷异质性的影响,确认了尿苷为影响抗体电荷异质性的关键参数,并初步阐述了其作用机制。首先,采用析因实验考察了尿苷、锰离子和半乳糖对细胞生长、抗体产量及电荷异质性的影响。尿苷的添加能有效地支持细胞的快速生长和高密度的维持,较未添加组整个培养过程的IVCD提高了 50%,抗体终产量提高了 64%。弱阳离子交换色谱检测结果表明,尿苷的添加使酸性变体从30.3%下降为20.1%,而碱性变体从11.8%升高到25.2%。其次,利用正相高效液相色谱、分子排阻色谱和硼酸盐亲和色谱等分析手段,从抗体的糖基化、聚体、糖化和赖氨酸变体等多种翻译后修饰的角度考察了尿苷引起抗体电荷变体变化的原因。结果表明,流加尿苷使抗体的聚体和糖化水平降低,是导致酸性变体减少的原因;而碱性变体含量的增加来自于非赖氨酸变体。接下来,进一步从酸碱平衡和氧化还原平衡的角度探究了尿苷影响电荷变体的作用机制。结果表明,尿苷的流加使培养后期胞内外pH显着上升;胞内ROS含量减少,胞外氧化还原电位下降,说明尿苷使胞内外还原力增强。胞内外环境中pH的升高可增强碱性羧肽酶和PAM酶的催化活性,进而引起碱性变体含量的升高;还原力的增强可抑制聚体的形成,进而引起酸性变体含量的下降。另外,通过无细胞冷模实验,发现了尿苷的流加使碱性变体的胞外降解速率显着减小,而活率的提高也显着抑制了胞外酸性变体的生成速率。最后,通过调整尿苷的流加浓度和流加时间以期优化抗体电荷变体比例。结果表明,当尿苷流加浓度为0.1×时,酸性和碱性变体含量分别减少/增加了约3个百分点,相对于1×的添加浓度来说对电荷变体的影响较小。于培养后期流加尿苷可以使酸性变体减少的同时,控制碱性变体的增加。采用1×的流加浓度以及后期流加尿苷的方式,最终将酸性和碱性变体含量调整到了 22.1%和17.6%,解决了现有工艺中出现的酸碱性变体含量“翘板式”过高的问题。通过本文的研究,找到了流加培养基中影响抗体电荷异质性的关键组分尿苷,并对其影响机制进行了探讨,为工业化生产低电荷变体含量的抗体提供了实际指导意义。(本文来源于《华东理工大学》期刊2018-05-08）
李晨奕[3]（2018）在《基于QBD理论的单克隆抗体流加培养工艺的开发及放大》一文中研究指出细胞大规模培养技术作为生产抗体药物的核心技术,由于表达水平和生产规模的限制严重的阻碍了蛋白类药物在我国的发展和应用。为此本文首先以表达单克隆抗体的中华仓鼠卵巢细胞为研究对象,对细胞的培养工艺进行开发,得到了产品表达高和产品质量好的细胞流加培养工艺,并建立了放大和缩小模型及策略,最终实现了稳定、可靠的单克隆抗体药物的生产。首先,对培养基进行筛选,结果表明Dynamis培养基细胞生长效果最好且最终产量为1.53 g/L。在此基础上,添加yeastolate水解物能够提高抗体表达量,最终抗体产量达到2.5 g/L。接着在2 L反应器上进行工艺的确认。结果显示2L反应器与摇瓶相比无显着的差异,表明该流加培养工艺能够稳定的放大至实验室规模的反应器中。其次,对2 L反应器和200 L反应器进行分析建立了规模放大和缩小的策略,将放大参数分为非体积相关的参数和体积相关的参数两大类。通过在2 L反应器和200 L反应器进行了放大和缩小的实施,结果表明细胞在生长、代谢、蛋白表达和蛋白质量方面基本一致。统计学的方法也证明了200 L反应器和2 L反应器是等效一致的。进一步,对培养过程中的六个关键工艺参数:温度、pH、溶氧、流加量、培养时间和接种密度进行响应面设计,考察培养参数对蛋白产量和质量的影响。通过计算和模拟的方法确定了工艺参数的操作范围。最终,通过在200L反应器上对设计空间进行了验证,结果表明在200L生产规模的反应器上能够持续可靠的生产出稳定的产品。本文基于质量源于设计(Quality by Design,以下简称QbD)理论建立和开发了产品表达量高、产品质量好的流加培养工艺,并得到了反应器设计空间。此外,本文对其他采用QbD理论进行哺乳动物细胞培养工艺开发和放大以及抗体工业化生产过程的开发,具有重要的借鉴意义。(本文来源于《上海交通大学》期刊2018-04-01）
邓志伟,王莹莹,张永杰,王松廷,杨生玉[4]（2018）在《pH控制策略及pH反馈流加培养法提高罗氏产碱杆菌的聚羟基丁酸产量》一文中研究指出通过控制不同的p H以及利用p H反馈来控制培养基的流加方式等方法提高罗氏产碱杆菌的生物量及聚羟基丁酸(PHB)的产量。根据罗氏产碱杆菌在分批培养及不同流加培养基的实验中,确定了p H反馈流加培养基的方法。利用该方法在发酵过程中补加400 g/L的葡萄糖和100 g/L的酵母浸粉,并且将该过程的p H控制在6.7~6.9。在此条件下罗氏产碱杆菌的干重达到22.52 g/L,PHB浓度可到13.61 g/L。罗氏产碱杆菌的生物量及PHB浓度分别提高了12.44%和5.07%,结果表明采用p H反馈控制培养基的流加方式可以提高PHB的产量。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年02期）
段莹莹,曹大鹏,任峰,张曰辉,赵伟[5]（2017）在《基于DO-stat流加培养控制的海藻糖合成酶发酵条件研究》一文中研究指出溶氧浓度对重组大肠杆菌的生长和外源蛋白的高效表达影响较大,为进一步增加菌体量和重组蛋白表达量,该研究采用DO-stat流加培养进行控制,分别研究了溶氧浓度20%、30%、35%和40%条件下大肠杆菌的生长情况以及海藻糖合成酶的表达情况。结果表明,当发酵罐中溶氧浓度控制在30%时,发酵40 h,菌体干质量可达53.9 g/L,是分批发酵时的6倍,海藻糖转化率达到80.9%,是分批发酵时的2.25倍。(本文来源于《中国酿造》期刊2017年01期）
刘金涛,王星懿,范里,邓献存,刘旭平[6]（2015）在《大型反应器内pH不均一性对CHO细胞流加培养过程的影响》一文中研究指出为了研究大型反应器中p H不均一性对CHO细胞流加培养过程的影响,并将培养过程顺利地放大到生产规模,根据大型反应器的混合特性,构建了搅拌式反应器与平推流反应器串联的规模缩小装置用于模拟大型反应器中的p H不均一性。结果表明停留时间为30 s时,整个培养过程和对照相比并无显着的差异,这表明此时补碱所导致的p H不均一性并未对流加培养工艺造成影响。而随着停留时间的延长,反应器内p H不均一的程度越大,细胞生长和产物表达受到抑制越明显;与此同时,乳酸和氨的累积显着增加,而关键质量属性唾液酸和生物学活性也随之降低。(本文来源于《生物技术通报》期刊2015年10期）
贾涵婧[7]（2015）在《用于流感疫苗生产的MDCK悬浮细胞流加培养工艺的开发》一文中研究指出流感大爆发常常给人类社会造成不可估量的经济损失甚至威胁生命安全,目前接种流感疫苗是预防流感最有效的措施。采用传统的鸡胚生产工艺生产流感疫苗,存在质量不稳定、致敏性、潜在污染、规模放大受限等问题；基于MDCK细胞微载体培养体系生产流感疫苗成本高、操作复杂；而采用现有的商业无血清培养基进行细胞悬浮培养生产流感疫苗时,存在细胞适应悬浮生长周期长,无法实现细胞高密度培养,最终影响病毒产量等问题。因此,迫切需要开发适于MDCK细胞悬浮培养的无血清培养基,建立基于MDCK细胞无血清悬浮培养的病毒生产工艺。本文以培养流感病毒的MDCK细胞为研究对象,首先通过Mixture design实验设计方法,分别对5种自制的无血清培养基和5种添加物进行混料筛选,以快速建立和优化用于MDCK细胞生长的无血清培养基。结果发现,与原有的无血清培养基SFM相比,新开发的无血清培养基XP能使MDCK细胞生长的最高活细胞密度提高82.4%；与商业无血清培养基相比,基于该无血清培养基,通过简便的驯化方法使MDCK贴壁细胞仅在3周内适应悬浮培养并稳定生长,大大缩短了驯化周期,且细胞形态饱满、大小均一、无结团现象。驯化后的细胞在批培养模式下最高活细胞密度达(14.05±0.07)×106 cells/mL,平均比生长速率达0.63 d-1。进一步考察了MOI (multiplicity of infection)和胰酶对细胞生长及病毒产量的影响,结果发现,当MOI=0.01、胰酶浓度为5.0μg/mL时,既能保证病毒具有较强的感染力,也可获得较高的病毒产量。为了解决批培养模式下存在的营养限制等问题,优化了基于无血清培养基XP和流加培养基FM两种流加培养基的流加策略。结果表明,当细胞接种密度为1.0×106 cells/mL、培养72 h时,流加100%体积的无血清培养基XP可以解决营养限制等问题,并在一定程度上降低了代谢副产物的累积,同时获得的最高血凝效价为213.00±0.00 HAU/50 μL,单细胞产毒量为(47224±35) virions/cell。与批培养过程相比,血凝效价提高了3个效价单位,单细胞产毒量提高了168%。通过本文的研究,在较短的时间内开发了基于MDCK细胞生产流感疫苗的无血清培养基和无血清流加培养工艺,为流感疫苗的高效大规模工业化生产奠定了基础。(本文来源于《华东理工大学》期刊2015-05-29）
于海明[8]（2015）在《重组凝血因子Ⅶ稳定细胞株构建及反应器流加培养工艺的优化》一文中研究指出凝血因子Ⅶ不仅适用于先天性和获得性FⅦ缺乏症的病人,而且还适用于治疗存在FⅦ和FⅨ抑制物的和抗体血友病病人,以及血小板减少症和血小板功能障碍病人的出血止血和出血预防等,凝血因子Ⅶ还可以作为广泛的止血剂用于普通病人的创伤性大出血的止血。但利用传统方法从血浆中提取凝血因子Ⅶ的产量非常有限,不仅产量上无法满足市场的需求,而且还存在一定的安全隐患。本文首先构建筛选获得了高表达凝血因子Ⅶ(rhFⅦa)蛋白的稳定重组CHO细胞株。在此基础上无血清悬浮驯化重组细胞株,实现了无血清悬浮培养。并通过培养基优化以及培养工艺的研究,建立了高效的rhFⅦa无血清反应器悬浮流加培养工艺,蛋白表达量达接近1mg/L。之后,对rhFⅦa的纯化工艺进行了初步研究,建立了利用阴离子交换柱层析纯化rhFⅦa的初步纯化工艺。(本文来源于《华东理工大学》期刊2015-05-15）
刘金涛,范里,邓献存,刘旭平,谭文松[9]（2015）在《基于产品质量分析的中国仓鼠卵巢细胞流加培养工艺的优化》一文中研究指出在前期建立的流加培养工艺的基础上,考察培养过程中的pH值对流加培养过程的影响,明确了过程控制参数pH值与产品关键质量属性(critical quality attributes,CQAs)间的联系,建立了产物质量属性和过程操作属性间的关系,并确认pH值为抗体融合蛋白生产工艺中的关键控制参数。结果表明,流加培养过程随着培养pH值的提高,抗体融合蛋白的生物学活性呈一定程度的下降趋势,但唾液酸含量却呈明显的上升趋势;此外,在pH值6.9和pH值7.0的条件下培养过程中的最大细胞密度、活力、蛋白表达量均优于其他条件,确定6.95±0.05为过程的控制pH值。将此培养工艺放到大200 L中试生产规模,结果与2 L反应器的结果基本一致。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2015年04期）
武发菊,刘萍,安芳兰,董文教,宋玉霞[10]（2014）在《BHK-21悬浮细胞流加培养的研究》一文中研究指出试验旨在研究流加培养基中不同营养成分、初始接种密度、流加起始时间对BHK-21悬浮细胞流加培养的影响。结果表明,流加浓缩包中的氨基酸对促进细胞生长有明显影响,而无血清培养基添加成分不仅促进细胞生长,且对细胞活力的维持起着较为重要的作用。初始接种密度为3×105~6×105/mL,培养至48h开始流加一定量的浓缩液,流加培养效果较好。另外,在已优化的条件下进行流加培养,未出现细胞大量凋亡现象。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年06期）
流加培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年来,基于CHO细胞流加培养生产抗体药物得到了越来越多生产企业的关注。电荷异质性作为抗体药物最为关键的质量属性之一,对药物的生物学活性和安全性等有着多方面的影响。因此,对细胞培养中所产生的抗体电荷变体进行有效的控制非常重要。本研究以表达单克隆抗体的重组rCHO细胞为研究对象,通过析因实验的方法考察了培养过程各参数对抗体电荷异质性的影响,确认了尿苷为影响抗体电荷异质性的关键参数,并初步阐述了其作用机制。首先,采用析因实验考察了尿苷、锰离子和半乳糖对细胞生长、抗体产量及电荷异质性的影响。尿苷的添加能有效地支持细胞的快速生长和高密度的维持,较未添加组整个培养过程的IVCD提高了 50%,抗体终产量提高了 64%。弱阳离子交换色谱检测结果表明,尿苷的添加使酸性变体从30.3%下降为20.1%,而碱性变体从11.8%升高到25.2%。其次,利用正相高效液相色谱、分子排阻色谱和硼酸盐亲和色谱等分析手段,从抗体的糖基化、聚体、糖化和赖氨酸变体等多种翻译后修饰的角度考察了尿苷引起抗体电荷变体变化的原因。结果表明,流加尿苷使抗体的聚体和糖化水平降低,是导致酸性变体减少的原因;而碱性变体含量的增加来自于非赖氨酸变体。接下来,进一步从酸碱平衡和氧化还原平衡的角度探究了尿苷影响电荷变体的作用机制。结果表明,尿苷的流加使培养后期胞内外pH显着上升;胞内ROS含量减少,胞外氧化还原电位下降,说明尿苷使胞内外还原力增强。胞内外环境中pH的升高可增强碱性羧肽酶和PAM酶的催化活性,进而引起碱性变体含量的升高;还原力的增强可抑制聚体的形成,进而引起酸性变体含量的下降。另外,通过无细胞冷模实验,发现了尿苷的流加使碱性变体的胞外降解速率显着减小,而活率的提高也显着抑制了胞外酸性变体的生成速率。最后,通过调整尿苷的流加浓度和流加时间以期优化抗体电荷变体比例。结果表明,当尿苷流加浓度为0.1×时,酸性和碱性变体含量分别减少/增加了约3个百分点,相对于1×的添加浓度来说对电荷变体的影响较小。于培养后期流加尿苷可以使酸性变体减少的同时,控制碱性变体的增加。采用1×的流加浓度以及后期流加尿苷的方式,最终将酸性和碱性变体含量调整到了 22.1%和17.6%,解决了现有工艺中出现的酸碱性变体含量“翘板式”过高的问题。通过本文的研究,找到了流加培养基中影响抗体电荷异质性的关键组分尿苷,并对其影响机制进行了探讨,为工业化生产低电荷变体含量的抗体提供了实际指导意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
流加培养论文参考文献
[1].孙笑寒,李开,欧德冲,岳希洁,陈代文.响应面法优化产朊假丝酵母CL15013流加培养工艺及其PFR连续培养的研究[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[2].牛慧洁.rCHO细胞流加培养中尿苷对抗体电荷异质性的影响[D].华东理工大学.2018
[3].李晨奕.基于QBD理论的单克隆抗体流加培养工艺的开发及放大[D].上海交通大学.2018
[4].邓志伟,王莹莹,张永杰,王松廷,杨生玉.pH控制策略及pH反馈流加培养法提高罗氏产碱杆菌的聚羟基丁酸产量[J].食品工业科技.2018
[5].段莹莹,曹大鹏,任峰,张曰辉,赵伟.基于DO-stat流加培养控制的海藻糖合成酶发酵条件研究[J].中国酿造.2017
[6].刘金涛,王星懿,范里,邓献存,刘旭平.大型反应器内pH不均一性对CHO细胞流加培养过程的影响[J].生物技术通报.2015
[7].贾涵婧.用于流感疫苗生产的MDCK悬浮细胞流加培养工艺的开发[D].华东理工大学.2015
[8].于海明.重组凝血因子Ⅶ稳定细胞株构建及反应器流加培养工艺的优化[D].华东理工大学.2015
[9].刘金涛,范里,邓献存,刘旭平,谭文松.基于产品质量分析的中国仓鼠卵巢细胞流加培养工艺的优化[J].江苏农业科学.2015
[10].武发菊,刘萍,安芳兰,董文教,宋玉霞.BHK-21悬浮细胞流加培养的研究[J].中国畜牧兽医.2014
论文知识图
