CRISPRi干扰中心代谢基因转录对苏氨酸合成的影响

论文摘要

苏氨酸是重要的饲料氨基酸,需求量持续增加,提高苏氨酸发酵产率和糖酸转化率,降低生产成本已成为一个重要课题。该实验以苏氨酸工程菌Escherichia coli THRD为出发菌,利用CRISPRi(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference)技术研究中心代谢9个基因转录水平的改变对苏氨酸合成的影响。发酵结果显示,干扰zwf、pfk A和glt A基因的转录水平提高了苏氨酸的合成效率,对应菌株苏氨酸产量分别为60. 3、64. 6和65. 8 g/L,与出发菌(50. 9 g/L)相比,分别提高了18. 5%、26. 9%和29. 3%。糖酸转化率分别为40%、38%和39%,与出发菌(34%)相比,分别提高了17. 7%、11. 8%和14. 7%。结果表明,通过CRISPRi干扰中心代谢基因的转录水平,可以调节合成代谢网络,使更多碳源流向苏氨酸,提高苏氨酸的合成效率。同时,该研究也为其他生物制品工程菌的构建提供了参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与质粒
•   1.2 培养条件与培养基
•   1.3 CRISPR/Cas9基因编辑方法
•     1.3.1 构建gRNA质粒和DNA片段的获得
•     1.3.2 菌株构建
•   1.4 干扰质粒及菌株构建
•   1.5 苏氨酸发酵
•   1.6 发酵过程中检测与分析
•   1.7 总RNA的提取和实时荧光定量PCR
•   1.8 发酵数据统计学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 阿拉伯糖诱导代谢干扰系统的构建
•   2.2 阿拉伯糖诱导条件下的代谢干扰体系测试
•   2.3 干扰中心代谢基因对苏氨酸生产的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘旭峰,王宁,郝亚男,李英滋,范晓光,谢希贤

关键词: 大肠杆菌,苏氨酸,代谢干扰,糖酸转化率

来源: 食品与发酵工业 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室(天津科技大学),天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心

基金: 国家自然科学基金青年基金(31700037),工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目(17PTGCCX00190)

分类号: TQ923

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019489

页码: 1-7

总页数: 7

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