肖胜冉小军（荆州市第一人民医院放射科湖北荆州434000）
【摘要】目的分析弥漫大B细胞淋巴瘤与淋巴结反应性增生患者淋巴结组织中T-cadherin、MRP1阳性表达水平，以及与临床预后相关指标之间的关系。方法通过免疫组化法检测42例DLBCL(弥漫大B细胞淋巴瘤)和24例淋巴结反应性增生组织中T-cadherin、MRP1的表达水平，以及与临床预后相关指标(年龄、性别、WBC、PLT、HB、临床分期、结外累及部位和近期疗效)间的关系。分析T-cadherin、MRP1的表达水平与DLBCL发病及侵袭进展的相关性。结果T-cadherin在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达水平显著低于淋巴结反应性增生，T-cadherin表达水平与弥漫大B细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB无相关（均P>0.05），与患者临床分期、结外累及部位和近期疗效有关（均P＜0.05）。MRP1表达水平与弥漫大B细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB、无相关（均P>0.05），与患者临床分期、结外累及部位和近期疗效有关（均P＜0.05）。MRP1在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达水平显著高于于淋巴结反应性增生。结论弥漫大B细胞淋巴瘤患者中T-cadherin的缺乏影响发病及预后，T-cadherin的缺乏可能与多药耐药相关。
【关键词】T-cadherin、MRP1、弥漫大B细胞淋巴瘤【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2015）08-0012-02
钙粘蛋白是属于同亲型结合、Ca++依赖的细胞表面粘附糖蛋白，对胚胎的生长、成熟及分化发育的细胞识别、迁移以及活体组织器官形成具有重要的功能。机体细胞和它分化、发育不同的时期，钙粘蛋白在细胞表面表现的种类与数量因此不一样。在不同的位置表现出不同的钙粘蛋白家族成员[1-3]，即不同的组织细胞表面有不同的钙粘蛋白如上皮组织则是E-钙粘蛋白；在神经元表面则是N-钙粘蛋白；在胎盘组织细胞表面是P-钙粘蛋白。缺乏胞浆结构域的T-钙粘蛋白必须链到细胞胞质膜上。据相关报道T-cadherin基因被转入到缺失T-cadherin分子表达的新西兰大白兔小胶质母细胞瘤C6细胞中,后来观察到具有增殖及侵袭能力C6细胞受到严重影响即抑制,其抑制可能主要为T-cadherin分子通过诱导p21-CIP1/WAF1表达致使肿瘤细胞受阻滞于细胞周期的G2期,进一步证实DNA启动子由于甲基化从而引起肿瘤抑制基因的失活[4-6]。由于肿瘤细胞的多药耐药或许是引起肿瘤耐药和化疗失败的主要根源。多药耐药相关蛋白（MRP)基因的在肿瘤生长的不同阶段进行扩增以及不断地过表达从而引起肿瘤的发生、发展，本研究主要研究Tcadherin、MRP1在淋巴瘤组织中的表达情况，具体报道如下：材料与方法1.1材料选取2009年1月～2014年12月遵义医学院附属医院、肿瘤科住院患者经骨髓穿刺或病理取材经病理组织学证实DLBCL42例，诊断标准按照世界卫生组织关于淋巴造血组织肿瘤分类(2010版)。临床分期按AnnArbor-Colswolds分期标准:I期4例，Ⅱ期8例，Ⅲ期12例,Ⅳ期18例,发病部位结外19例，结内23例；依据出现相关症状进行分为A组18例(无发热、盗汗、消瘦等症状者),B组(伴发热、盗汗、消瘦等症状者)24例，入选的全部患者未接受任何形式的治疗即化疗和放疗。20例淋巴结反应性增生作为对照组，其中包括13例男性,7例女性，年龄在16～72岁,中位年龄为51岁。
1.2试剂人T-cadherin、MRP1多克隆抗体均购自武汉博士德生物科技有限公司，浓度均为1∶100;试剂盒、DAB显色剂等均购自武汉博士德生物科技有限公司。
1.3方法采用免疫组织化学染色法。将3～4μm的石蜡包埋的病理切片进行常规脱蜡至水，加3%双氧水进行氧化处理,于磷酸氢二钠缓冲液(pH6.0)中进行修复，在放进4℃冰箱冷藏过夜前滴加一抗处理，然后过夜处理后再通过生物素化二抗滴加处理，然后通过DAB方式进行显色。复染采用苏木精，最后脱水、透明、封片。选择博士德有限公司提供的T-cadherin阳性、MRP1阳性的切片作为阳性对照，使用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4结果判断T-cadherin、MRP1的阳性信号均为淡黄色或棕黄色，主要定位于细胞质。随机选择5个高倍视野，合并计算所分析的不同视野的染色强度及染色细胞百分数，据显色深浅计分及阳性细胞百分率计:①显色深浅:不显色或显色不清为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分;深褐色为3分。②阳性细胞的百分率:阳性细胞率0%～5%计0分;5%＞～10%计1分;10%＞～50%计2分;50%＞～75%计3分;＞75%计4分。显色深浅评分与阳性细胞百分率相乘，0～3分为阴性(－),3～6分为弱阳性(+)，6～9分为中等阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。
1.5统计学分析采用SPSS18.0软件进行统计学分析。计数资料采用X2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。
2结果2.1T-cadherin在肿瘤细胞及反应性增生淋巴结组织中的表达T-cadherin在DLBCL组织中的阳性表达率为76.19%(32/42)；T-cadherin在淋巴结反应性增生组织中（对照组）的阳性表达率为16.67%(4/24);两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)(见表1)。
2.2MRP1在肿瘤细胞及反应性增生淋巴结组织中的表达MRP1在DLBCL组织中的阳性表达率为66.67%(28/42)；MRP1在淋巴结反应性增生组织中的阳性表达率为4%(1/24)；两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)(见表1)。
2.3T-cadherin、MRP1在DLBCL中的表达与临床指标之间的关系T-cadherin、MRP1在DLBCLⅢ期、Ⅳ期的表达量高于Ⅰ期、Ⅱ期(P＜0.05);伴有发热、盗汗、消瘦等B症状的B组患者其MRP1的表达高于不伴以上症状的A组患者(P＜0.05)，MRP1的表达与是否伴有B症状无关(P＞0.05);T-cadherin、MRP1的表达均与DLBCL年龄、性别、WBC、PLT、HB、是否累及结外组织无差异性(P＞0．05)(见表2)。
表1T-cadherin、MRP1在DLBCL肿瘤细胞及反应行增生淋巴结组织中的表达
讨论弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是十分常见的一种非霍奇金淋巴瘤(NHL)，当前研究发现欧洲等一些发达国家,DLBCL发病率约占NHL的30%，尽管如此，然而其发病率依据统计数据在亚洲国家更高，大概约为B细胞淋巴瘤的50%[7-9]。DLBCL主要特点为恶性程度高、侵袭性强、治愈率低，对人类生产、生活具有极其破坏的恶劣影响。T-cadherin家族成员与肿瘤的相互密切关系相当长时间内倍受关注。研究发现，很多钙粘蛋白家族成员T-adherin与肿瘤的发生及侵袭转移相互联。T-cadherin是目前研究较多的一类粘钙蛋白，它与肿瘤发生、发展、侵袭和转移关系最为密切。对人体多种肿瘤进行研究，结果表明在不同实体瘤中T-cadherin有不同程度的增高，并与肿瘤进展及预后相关。T-cadherin与淋巴瘤之间关系的研究主要集中在NHL，认为T-cadherin、在NHL中高表达，并与AnnArbor临床分期相关，与恶性淋巴瘤的高侵袭性密切相关，而对于非霍奇金淋巴瘤中发病率较高的DLBCL而言，研究尚少。Christofori等［10-12］的研究表明T-cadherin与NHL生存期呈负相关，是其预后差的指标。本研究结果表明，DLBCL中T-cadherin的表达高于正常淋巴组织，且与DLBCL的临床分期有关，进一步证实T-cadherin与DLBCL的发病、侵袭进展乃至预后都可能有着较为密切的关系。我们本次研究发现T-cadherin在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达水平显著低于淋巴结反应性增生，但是T-cadherin表达水平与弥漫大B细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB无相关，与患者HB、LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效有关。MRP1表达水平与弥漫大B细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB无相关（与患者HB、LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效有关。MRP1在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达水平显著高于于淋巴结反应性增生。希望这样的报道层出不穷，有利于为今后临床的治疗提供全新的治疗策略和方式奠定基础。
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