疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因在毕赤酵母工程菌中的遗传稳定性

论文摘要

【背景】重组工程菌的传代稳定性是保证外源蛋白高效稳定表达的前提,是决定工业化生产能力的关键因素之一。【目的】对异源的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因在毕赤酵母重组工程菌中的遗传稳定性进行研究。【方法】将工程菌连续传代15次,取第1、5、10、15代作为受检代次,结合重组菌的菌落及菌体形态、水解酶活、目的基因片段、外源基因拷贝数等指标综合评价其遗传稳定性。【结果】传代过程中重组菌的菌落和菌体形态、目的蛋白分子量、目的基因序列均保持一致。目的基因的整合拷贝数经5次传代后发生一定损失,但随后稳定为7左右,而脂肪酶的相对酶活则提高至90%以上。【结论】适量的整合拷贝数更有利于该脂肪酶基因在毕赤酵母重组菌中的表达,经综合评价此工程菌的遗传稳定性良好,应用于工业化大规模生产是可行的。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株
•   1.2 主要试剂和仪器
•   1.3 培养基配制
•   1.4 方法
•     1.4.1 载体构建和酵母转化
•     1.4.2 菌株传代方法
•     1.4.3 菌落和菌体形态观察
•     1.4.4 重组菌功能鉴定
•     1.4.5 重组工程菌的诱导表达
•     1.4.6 酶活测定及蛋白检测
•     1.4.7 引物设计
•     1.4.8 外源目的片段PCR检测
•     1.4.9 构建标准质粒
•     1.4.1 0 RT-PCR法测定工程菌中的拷贝数
•   1.5 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 菌落和菌体形态观察
•   2.2 重组菌功能鉴定和初筛
•   2.3 粗酶液水解酶活及蛋白含量
•   2.4 目的基因PCR和测序鉴定
•   2.5 目的基因拷贝数测定
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钱忠英,李杨,蔡海莺,冯凤琴

关键词: 遗传稳定性,毕赤酵母,脂肪酶,重组菌,工业化生产

来源: 微生物学通报 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,一般化学工业

单位: 浙江大学生物系统工程与食品科学学院,浙江科技学院生物与化学工程学院

基金: 浙江省重大科技专项(2012C12005-2)~~

分类号: Q78;TQ925.6

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190004

页码: 2821-2829

总页数: 9

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