果糖-1,6-二磷酸酶1（FBP1）过表达对骨肉瘤细胞恶性逆转并向成骨分化的影响

论文摘要

该研究探讨FBP1对人骨肉瘤MG63细胞恶性生物学行为即增殖、凋亡、迁移及成骨分化的调控作用。采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至人骨肉瘤MG63细胞中,并通过qRT-PCR和Western blot法检测FBP1的m RNA和蛋白表达水平,以验证FBP1基因过表达效果。通过CCK-8、结晶紫染色、活细胞计数法检测细胞增殖; AnnexinV-FITC双染法和DAPI染色法检测细胞凋亡,并通过Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达;应用细胞划痕实验、Transwell检测细胞的迁移能力;通过流式细胞术检测细胞周期; ALP染色和茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化作用。结果表明,过表达FBP1后增殖细胞数明显降低（P<0.01）、凋亡率明显增高（P<0.01）、划痕实验愈合率明显降低（P<0.01）、Transwell实验细胞穿膜数也明显减少（P<0.01）;成骨诱导MG63细胞后ALP染色、茜素红染色阳性,钙盐结节明显增多;但3个组的细胞周期并无明显差异。综上所述,过表达FBP1可抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖,抑制迁移,促进其凋亡,并同时促进MG63细胞的早期和晚期成骨分化,且其增殖并非通过细胞周期调节。

论文目录

• 1 材料及方法
•   1.1 材料
•   1.2 细胞培养
•   1.3 细菌扩增
•   1.4 质粒转染及实验分组
•   1.5 实时荧光定量PCR法检测FBP1 mRNA的表达
•   1.6 蛋白质印迹法检测FBP1以及凋亡相关蛋白的表达
•   1.7 结晶紫染色法、CCK-8法检测细胞的增殖能力
•     1.7.1结晶紫染色法
•     1.7.2 CCK-8法
•   1.8 DAPI染色法、Hoechst染色法及流式细胞凋亡术检测细胞的凋亡
•     1.8.1 DAPI染色法
•     1.8.2 FCM法
•   1.9 划痕法、Transwell检测细胞迁移能力
•     1.9.1 划痕法
•     1.9.2 Transwell实验
•   1.1 0 流式细胞术检测细胞周期
•   1.1 1 碱性磷酸酶、茜素红S染色法检测细胞成骨分化能力
•     1.1 1.1 ALP染色法
•     1.1 1. 2 茜素红S染色法
•   1.1 2 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 FBP1过表达上调MG63细胞中FBP1的表达
•   2.2 FBP1过表达可抑制骨肉瘤MG63细胞增殖
•   2.3 FBP1过表达可促进骨肉瘤MG63细胞凋亡
•   2.4 FBP1过表达可抑制骨肉瘤MG63细胞迁移能力
•   2.5 FBP1过表达对骨肉瘤MG63细胞周期的影响
•   2.6 FBP1过表达可诱导骨肉瘤MG63细胞成骨分化能力
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢圣男,康权,张遥,陈洁,罗庆

关键词: 骨肉瘤,增殖,凋亡,成骨分化

来源: 中国细胞生物学学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 外科学,肿瘤学

单位: 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所,重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科

基金: 国家自然科学基金(批准号:81172545)资助的课题~~

分类号: R738.1

页码: 2273-2281

总页数: 9

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