谷氨酰胺转氨酶在Yarrowia lipolytica中的活性表达

论文摘要

谷氨酰胺转氨酶（EC2. 3. 2. 13,Transglutaminase,TGase）是一种重要的食品酶。基于N-端酶原区对折叠的重要影响,TGase通常以无活性的酶原（pro-TGase）形式在异源宿主中表达。以茂源链霉菌（Streptomyces mobaraensis） pro-TGase为基因来源,重组解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica po1h）为研究对象,通过在pro-TGase插入宿主Kex2蛋白酶识别位点（策略1）和共表达pro-TGase与谷氨酰胺转氨酶激活金属蛋白酶（TAMEP,策略2）,使proTGase在Y. lipolytica中表达后被切除酶原区,而直接转化为活性TGase。摇瓶发酵结果显示,策略1和策略2构建得到的重组菌的TGase活力分别为5. 26 U/m L和6. 77 U/m L。酶学性质研究表明,策略1和策略2得到的重组菌的TGase比酶活、Km及kcat/Km均明显优于S. mobaraensis TGase。基于Y. lipolytica食品安全性,研究结果为TGase的工业化生产提供了新型高产菌种。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 酶、试剂、引物和DNA序列测定
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 S.mobaraensis基因组的提取
•     1.2.2 质粒pINA1297/pro-TGase的构建
•     1.2.3 插入Kex2蛋白酶识别位点重组质粒p INA1297/pro-KR-TGase的构建
•     1.2.4 活化蛋白酶重组质粒pINA1297/TAMEP的构建
•     1.2.5 Y.lipolytica的转化与重组子的筛选
•     1.2.6 重组Y.lipolytica的发酵
•     1.2.7 TGase的酶活测定
•     1.2.8 菌体量的测定
•     1.2.9 纯化方法
•     1.2.1 0 浓度的测定
•     1.2.1 1 动力学常数的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 重组Y.lipolytica po1h/pro-KR-TGase的构建及摇瓶发酵
•   2.2 重组菌Y.lipolytica po1h/HM+HT的构建和摇瓶发酵
•   2.3 酶反应动力学分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 任蕊蕊,刘松,李江华,堵国成,陈坚

关键词: 谷氨酰胺转氨酶,活性表达,蛋白酶识别位点,活化蛋白酶

来源: 生物学杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院,江南大学工业生物技术教育部重点实验室

基金: 国家自然基金面上项目(31771913),江苏省重点研发计划社会发展项目(BE2016629)

分类号: Q78;Q55

页码: 11-15

总页数: 5

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