芥菜型油菜BjuA09DFR基因及其启动子的克隆与转化和表达

论文摘要

该研究利用实时荧光定量（qRT-PCR）检测了BjuA09 DFR基因的时空表达特异性,并通过克隆BjuA09 DFR基因启动子片段,构建该基因的启动子GUS融合表达载体,利用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,最后对拟南芥转基因材料不同发育时期的不同组织部位进行GUS组织化学染色,分析BjuA09 DFR基因启动子的表达模式,为BjuA09 DFR基因启动子功能的进一步研究提供理论依据。结果表明:（1）BjuA09 DFR基因在芥菜型油菜的多个组织部位都有表达,尤其是在叶、花、角果和授粉后15d种子中表达量较高。（2）成功构建了BjuA09 DFR基因启动子和GUS基因融合表达载体（pBjuA09 DFR∷GUS）,采用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,经卡那霉素筛选和PCR检测抗性苗,获得转基因拟南芥阳性苗。（3）GUS组织化学分析结果显示,转基因拟南芥材料的GUS活性具有明显的时空特异性,在叶、花、角果和种子中的染色较深,具有很强的GUS活性。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 芥菜型油菜BjuA09DFR基因在不同组织的qRT-PCR分析
•     1.2.2 芥菜型油菜BjuA09DFR基因启动子片段 （pBjuA09DFR） 的克隆
•     1.2.3 芥菜型油菜BjuA09DFR基因启动子驱动的GUS融合表达载体的构建
•     1.2.4 拟南芥的遗传转化
•     1.2.5 转基因植株的筛选
•     1.2.6转基因拟南芥的GUS组织化学染色
• 2 结果与分析
•   2.1 芥菜型油菜BjuA09DFR基因的时空表达特异性分析
•   2.2 芥菜型油菜BjuA09DFR基因启动子片段的扩增和分析
•   2.3 芥菜型油菜BjuA09DFR基因启动子驱动的GUS融合表达载体构建和转化
•   2.4 转基因拟南芥的抗性筛选及叶片直接PCR检测
•   2.5 转基因拟南芥的GUS组织化学染色分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 袁玉辉,朱守晶,邹杰,曾贤军,肖强,徐新仁,刘显军

关键词: 芥菜型油菜,二氢黄酮醇还原酶基因,启动子,拟南芥转化,组织化学染色

来源: 西北植物学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 宜春学院生命科学与资源环境学院江西省作物生长发育调控重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31560404),江西省教育厅科技项目(GJJ161009),江西省青年科学基金(20151BAB214016),宜春学院地方发展中心项目(DF2018015)

分类号: Q943.2;S565.4

页码: 24-31

总页数: 8

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