半乳糖凝集素-1对LTA诱导巨噬细胞NLRP3炎症小体的抑制及机制探讨

论文摘要

目的研究半乳糖凝集素-1（Gal-1）对金黄色葡萄球菌脂磷壁酸（LTA）诱导Raw264.7细胞NLRP3炎症小体活化的影响及初步机制。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法检测不同浓度重组小鼠源半乳糖凝集素-1（rmGal-1）对细胞活力的影响;建立LTA诱导的小鼠巨噬细胞系Raw264.7炎症模型,分别用rmGal-1和NF-κB抑制剂JSH-23预处理Raw264.7细胞。激光共聚焦显微镜观察细胞内P-p65及NLRP3的表达;Western blot法进一步检测细胞中p65、P-p65、NLRP3、ASC、Caspase-1和Pro-Caspase-1的蛋白表达水平。结果 rmGal-1浓度0.04μg/ml～0.4μg/ml时对Raw264.7细胞活力无明显影响;在LTA刺激的Raw264.7巨噬细胞中,内源性Gal-1和NLRP3的蛋白表达水平呈时间性依赖增加,并在3 h到达高峰;rmGal-1预处理后显著抑制P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1表达。同样地,作为阳性对照,JSH-23预处理后,P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1的表达水平显著下调。结论 Gal-1可能通过NF-κB-NLRP3信号通路抑制LTA诱导的巨噬细胞炎症。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞系
•     1.1.2 主要试剂及仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养Raw264.7
•     1.2.2 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色[3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测rm Gal-1作用下Raw 264.7细胞活力
•     1.2.3 建立LTA刺激巨噬细胞的炎症反应模型
•     1.2.4 rmGal-1干预LTA刺激下的巨噬细胞
•     1.2.5 JSH-23干预LTA刺激下的巨噬细胞
•     1.2.6 激光共聚焦观察P-p65及NLRP3炎症小体的表达水平
•     1.2.7 蛋白提取和Western blot法检测相关蛋白表达
•   1.3 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 rmGal-1对Raw264.7 细胞活力的影响
•   2.2 LTA诱导Raw246.7巨噬细胞中NF-κB-NLRP3通路活化并促进内源性Gal-1高表达
•   2.3 rmGal-1和JSH-23预处理后对Raw264.7 巨噬细胞中NF-κB及NLRP3炎症小体表达的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈方方,王木子,吕允相,刘荣玉

关键词: 炎症小体,巨噬细胞

来源: 安徽医科大学学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科

基金: 安徽省重点实验室计划项目(编号:1206c0805028),国家临床重点专科建设项目(编号:卫办医政函[2012]649号)

分类号: R392

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.12.007

页码: 1870-1875

总页数: 6

文件大小: 3962K

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