树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养

论文摘要

目的建立适用于树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养方法。方法分别采用组织块贴壁培养法和胰酶消化法,分离培养新生树鼩肺成纤维细胞,通过倒置显微镜观察细胞生长情况,用波形蛋白（Vimentin）对分离的成纤维细胞进行免疫荧光鉴定;传代培养并开展冻存复苏实验,采用MTS法绘制细胞生长曲线,以人胚肺二倍体成纤维细胞（KMB-17）作对照。结果通过组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可获取树鼩肺成纤维细胞,细胞主要呈现梭形,波形蛋白免疫荧光鉴定普遍呈阳性,与KMB-17一致。树鼩肺成纤维细胞可连续传代4～5次,经冻存复苏后细胞仍能保持活力,以5×104细胞/mL的密度传代,细胞可在3 d左右进入对数生长期。结论组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可有效获取树鼩的肺成纤维细胞,可为肺部相关疾病的体外研究提供实验材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验动物和细胞
•   1.2 主要仪器及试剂
•   1.3 方法
•     1.3.1 树鼩肺组织取材
•     1.3.2 组织块贴壁法培养树鼩肺成纤维细胞
•     1.3.3 酶消化法培养树鼩肺成纤维细胞
•     1.3.4 树鼩肺成纤维细胞的传代培养
•     1.3.5 树鼩肺成纤维细胞的免疫荧光鉴定
•     1.3.6 树鼩肺成纤维细胞的冻存和复苏
•     1.3.7 细胞生长曲线
• 2 结果
•   2.1 树鼩肺细胞的原代培养
•   2.2 树鼩肺细胞传代培养
•   2.3 树鼩肺成纤维细胞的鉴定
•   2.4 树鼩肺成纤维细胞的冻存与复苏
•   2.5 细胞生长曲线
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王文广,匡德宣,陆彩霞,罕园园,李娜,仝品芬,孙晓梅,代解杰

关键词: 树鼩,肺成纤维细胞,鉴定,传代培养

来源: 实验动物与比较医学 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省眼科疾病防治研究重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

基金: 云南省应用基础研究面上项目(编号:2018FB045),云南省科技人才和平台计划项目(编号:2017HC019),重点实验室运行补助专项(编号:2017DG008),云南省重大科技专项(编号:2017ZF007)

分类号: Q95-33

页码: 105-110

总页数: 6

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