利用CRISPR-Cas9系统敲除一个水稻镁离子螯合酶基因

论文摘要

结合重测序、图位克隆技术和转录组测序得到了一个水稻黄叶突变的候选基因,预测该基因是一个编码镁离子螯合酶Ⅰ亚基的未知功能基因,植物叶绿体镁离子螯合酶是四吡咯化合物生物合成途径中合成叶绿素分支（镁分支）的第一个酶。本研究利用CRISPR-Cas9技术,采用一步法构建该基因的pC1300-Cas9-12976重组载体。将该重组载体进行农杆菌介导的水稻遗传转化,得到T0代转基因植株的阳性,完成转基因植株中目的基因的序列分析。结果表明,T0-Cas9-12976转基因编辑率为71.4%。为进一步验证该基因的生物学功能提供了良好的依据。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 靶序列选择及引物设计
•   1.2 SK-gRNA重组载体构建及阳性鉴定
•   1.3 pC1300-Cas12976重组载体构建及阳性鉴定
•   1.4 pC1300-Cas9-12976重组载体农杆菌电击转化及阳性鉴定
•   1.5 基因编辑载体的遗传转化
•   1.6 T0转基因植株的阳性鉴定
•   1.7 转基因植株中目的基因的检测
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 试验材料
•   3.2 基因的生物信息学分析
•   3.4 基因编辑目的序列的选择
•   3.5 SK-gRNA重组载体构建
•   3.6 p C1300-Cas9重组载体构建
•   3.7 pC1300-Cas9-12976重组载体电击转化农杆菌及阳性鉴定
•   3.8 根癌农杆菌EHA105介导的pC1300-Cas9-12976重组载体的水稻遗传转化
•   3.9 转基因T0代植株的阳性鉴定
•   3.1 0 转基因阳性植株中黄叶突变候选基因编辑检测
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何福收,邵敏敏,葛晟昕,陈阁,陈同,王春台,徐鑫,谭艳平

关键词: 水稻,镁离子螯合酶,遗传转化

来源: 分子植物育种 2019年17期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 中南民族大学生命科学学院武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室生物技术国家民委重点实验室

基金: 湖北省自然科学基金一般项目(No.2018CFB481)资助

分类号: S511;Q943.2

DOI: 10.13271/j.mpb.017.005674

页码: 5674-5680

总页数: 7

文件大小: 2054K

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