矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（C3G）通过靶向TOPK抑制结直肠癌细胞的增殖

论文摘要

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（C3G）对结直肠癌增殖的影响及机制。方法采用体外结合及体外激酶实验检测C3G与T细胞淋巴因子活化杀伤细胞来源的蛋白激酶（TOPK）的结合能力及对其活性的影响;采用软琼脂试验检测C3G对结肠癌细胞克隆形成能力的影响;采用MTS法测定C3G的细胞毒性;采用大肠杆菌BL21表达GST-组蛋白H3融合蛋白;采用慢病毒感染的方法,检测C3G对沉默TOPK的结肠癌细胞克隆形成能力的影响; Western blot法检测HCT116细胞中C3G对TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化的水平;建立结肠癌患者癌组织异种移植小鼠模型,免疫组织化学染色法检测组蛋白H3的磷酸化水平。结果 C3G在体外直接与TOPK结合并抑制TOPK活性; C3G以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞的增殖及克隆形成;沉默TOPK降低结肠癌细胞对C3G的敏感性; C3G以时间和浓度依赖的方式抑制TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化水平;另外, C3G抑制患者来源的结肠癌组织异种移植瘤小鼠体内肿瘤的生长。结论 C3G通过靶向TOPK抑制结直肠癌的生长。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 结肠癌细胞培养及分组处理
•     1.2.2 软琼脂试验检测结肠癌细胞克隆形成能力
•     1.2.3 MTS实验检测结肠癌细胞增殖能力
•     1.2.4 体外结合实验检测TOPK和C3G的结合情况
•     1.2.5 GST-组蛋白H3融合蛋白的表达与纯化
•     1.2.6 体外激酶试验检测C3G对TOPK活性的影响
•     1.2.7 Western blot法检测TOPK、 histone H3及p-histone H3的表达
•     1.2.8 质粒及小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）制备
•     1.2.9 患者来源的结肠癌组织异种移植小鼠模型的建立
•     1.2.10 免疫组织化学染色法检测移植的结肠癌组织中histone H3的表达
•     1.2.11 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 C3G结合并抑制TOPK活性
•   2.2 C3G抑制结直肠癌细胞的集落形成
•   2.3 敲除TOPK降低HCT116细胞对C3G的敏感性
•   2.4 C3G抑制TOPK下游信号通路
•   2.5 在结肠癌组织移植的小鼠模型中, C3G抑制肿瘤的生长
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王丽,刘锋瑞,刘亚娟,高红艳,董明清

关键词: 矢车菊素葡萄糖苷,结直肠癌

来源: 细胞与分子免疫学杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 西安医学院第一附属医院急诊科,西安北车医院内科,空军军医大学基础医学院

基金: 陕西省卫计委科技计划(2016D065)

分类号: R285

DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.008874

页码: 1101-1108

总页数: 8

文件大小: 1523K

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