组氨酸激酶HK853酸碱调控机制的NMR研究

论文摘要

双组分信号转导系统是细菌应对外界刺激和调控自身生理活动的重要系统。组氨酸激酶是双组分信号转导系统的重要组成部分,大多数组氨酸激酶具有多功能性,不仅能自身磷酸化并能把磷酸基团传递给应激调节蛋白(Response regulator,RR)使之磷酸化,还能催化RR的去磷酸化。研究发现组氨酸激酶HK853的功能受pH值调控,该文利用选择性同位素标记方法,通过NMR技术研究了参与HK853与RR468相互作用的关键氨基酸位点。发现DHp结构域His260侧链的pKa值与HK853的磷酸酶活性有很好的对应关系,HK853与底物形成复合物后其pKa值降低,使His260侧链更易于去质子化,有助于HK853磷酸酶活性的提高。阐明了HK853行使磷酸酶功能时的酸碱调控机制。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 表达与纯化
•     1.1.1 HK853cp、HK853DHp及RR468的表达
•     1.1.2 HK853cp、HK853DHp及RR468的纯化
•   1.2 去磷酸化功能实验
•     1.2.1 RR468磷酸化样品的制备
•     1.2.2 不同pH值下HK853的去磷酸化速率比较
•   1.3 核磁共振实验
•     1.3.1 1H-13C HSQC实验
•     1.3.2 1H-13C HSQC谱图的信号归属
• 2 结果与讨论
•   2.1 选择性同位素标记与信号归属
•   2.2 pH滴定谱图
•   2.3 形成复合物对HK853 His260侧链pKa值的影响
•   2.4 pH值对HK853磷酸酶活性的影响
• 3 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吉仕夏,刘乙祥,姜红鹰,李从刚,姜凌,刘买利

关键词: 核磁共振,选择性同位素标记,双组分信号转导系统,磷酸化,组氨酸激酶

来源: 分析测试学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学

单位: 中国科学院生物磁共振重点实验室波谱与原子分子物理国家重点实验室武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所),中国科学院大学

基金: 国家自然科学基金资助项目(21735007,21573280,21603268)

分类号: O657.2;O629.8

页码: 503-509

总页数: 7

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