丙酮酸羧化酶对酿酒酵母积累琥珀酸的作用探究

论文摘要

为探究丙酮酸羧化酶及微量元素Ca2+和生物素对酿酒酵母积累琥珀酸的作用,敲除了琥珀酸脱氢酶编码基因（SDH2）并过量表达来自米根霉的丙酮酸羧化酶基因（Ro PYC）。琥珀酸产量由（0. 011±0. 002） g/L提高至（0. 841±0. 020） g/L,较表达前提高了75. 45%。随后,外源添加不同浓度Ca2+和生物素考察其对琥珀酸发酵的影响,结果发现,Ca2+的添加促进了菌体的生长但不利于琥珀酸的积累,而外源添加浓度为16、32、64、96μg/L生物素时,琥珀酸产量分别提高75. 04%、84. 26%、69. 28%、66. 79%。其中生物素质量浓度为32μg/L时,琥珀酸产量达到最大为（0. 964±0. 02） g/L,且丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase,PC）酶活提高14. 42%,说明PC酶活的提高促进了酿酒酵母中琥珀酸的积累。该研究为解决酿酒酵母琥珀酸合成过程中前体碳代谢流不足问题提供了新的解决思路。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、质粒、及引物
•     1.1.2 酶和试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 SDH2基因敲除
•     1.3.2 丙酮酸羧化酶异源表达
•     1.3.3 培养方法
•     1.3.4 酶活测定
•     1.3.5 发酵产物的分析方法
• 2 结果与分析
•   2.1 SDH2缺失株的构建及SDH2基因缺失对琥珀酸积累的影响
•   2.2 异源表达丙酮酸羧化酶对琥珀酸积累的影响
•   2.3 Ca2+及生物素对丙酮酸羧化酶的作用探究
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈园园,程慧,李宁娜,苏珂,李佳雨,夏华龙,徐国强,张梁

关键词: 丙酮酸羧化酶,代谢工程,琥珀酸,酿酒酵母

来源: 食品与发酵工业 2019年13期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),工业生物技术教育部重点实验室(江南大学),江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金重大项目(21390204),国家自然科学基金青年基金(31300027),中国博士后基金一等资助(2014M550266),工业生物技术教育部重点实验室开放课题(KLIB-KF201606)

分类号: TS261.11

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018736

页码: 38-44

总页数: 7

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