牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证

论文摘要

为筛选与验证牛副流感病毒3型（BPIV3）感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞与病毒
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养与病毒接种MDBK细胞病变观察
•     1.2.2 Western blot检测
•     1.2.3 BPIV3感染MDBK细胞一步增长曲线的测定
•     1.2.4 转录组细胞总RNA的提取与转录组测序1MOI
•     1.2.5 转录组数据分析
•     1.2.6 RT-qPCR验证转录组筛选的天然免疫相关显著差异基因
• 2 结果
•   2.1 BPIV3在MDBK细胞上的复制情况
•   2.2 转录组测序数据质量检测
•   2.3 转录组差异基因筛选及GO与KEGG数据库注释、显著性富集分析
•   2.4 BPIV3感染MDBK细胞后MDA5与IRFs的mRNA表达变化
•   2.5 BPIV3感染MDBK细胞后IFN-β1和ISGF3mRNA表达变化
•   2.6 BPIV3感染MDBK细胞后ISGs mRNA表达
•   2.7 BPIV3感染MDBK细胞后TRIM家族和USP家族相关成员mRNA表达变化
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵贵民,吕丽霞,王洪梅,乔军,夏咸柱,何洪彬

关键词: 牛副流感病毒型,牛肾上皮细胞,转录组学,天然免疫,筛选

来源: 动物医学进展 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 石河子大学动物科技学院,山东师范大学反刍动物疾病研究中心,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

基金: 泰山学者攀登计划专家(何洪彬)项目,国家自然科学基金项目(31872490,31672556),山东省重点研发计划(2018GNC113011),国家重点研发计划项目(2018YFD0501600)

分类号: S852.653

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.02.002

页码: 9-16

总页数: 8

文件大小: 415K

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