黄芪甲苷Ⅳ诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化机制的研究

论文摘要

目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ体外对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向神经细胞分化的影响,考察其诱导过程对Wnt3a、β-catenin及Notch-1的影响。方法:在小鼠骨髓腔中提取出新鲜的BMSCs,MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测CD29、CD34、CD90表达。分别用黄芪甲苷Ⅳ、βME及黄芪甲苷Ⅳ+βME（联合组）作用于BMSCs,倒置显微镜及扫描电镜下观察细胞形态学变化;免疫荧光检测NSE、Nestin蛋白表达;Western blot检测Wnt3a、β-catenin、Notch-1蛋白表达;RT-qPCR检测Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin、Notch-1 mRNA的表达。结果:MTT法检测BMSCs培养至第3代活性最强;流式细胞仪检测CD29阳性率94.4%、CD34阳性率0.5%及CD90阳性率97%,符合BMSCs的特异性免疫表型的表达;扫描电镜观察证实βME及黄芪甲苷Ⅳ均可诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,βME组及联合组细胞膜部分损伤;与对照组比较,各诱导组NSE、Nestin、Wnt3a、β-catenin蛋白表达显著升高,Notch-1蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）;Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin mRNA表达显著升高,Notch-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）。黄芪甲苷Ⅳ组诱导率高于βME组及联合组。结论:黄芪甲苷Ⅳ通过上调Wnt3a、β-catenin表达及下调Notch-1表达,诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化。

论文目录

• 1 材料与仪器
•   1.1 实验动物
•   1.2 药物与试剂
•   1.3 主要仪器
• 2 方法
•   2.1 实验药物配制
•     2.1.1 黄芪甲苷Ⅳ配制:
•     2.1.2 β巯基乙醇（βME）配制:
•   2.2 BMSCs提取与培养
•   2.3 BMSCs的形态学观察
•     2.3.1 倒置显微镜观察BMSCs的显微结构:
•     2.3.2 扫描电镜观察BMSCs的超微结构:
•   2.4 BMSCs免疫表型的检测
•   2.5 MTT法检测BMSCs的活性并绘制生长曲线
•   2.6 免疫荧光术检测NSE、Nestin蛋白表达
•   2.7 Western blot检测Wnt3a、β-catenin、Notch-1蛋白的表达
•   2.8 RT-qPCR技术检测诱导后Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin、Notch-1mRNA的表达
•   2.9 统计学处理
• 3 结果
•   3.1 BMSCs的纯化形态学观察及特异性免疫表型鉴定
•     3.1.1 倒置显微镜观察:
•     3.1.2 流式细胞技术检测黄芪甲苷Ⅳ诱导小鼠骨髓间充质干细胞:
•   3.2 BMSCs的生长曲线绘制
•   3.3 黄芪甲苷Ⅳ对小鼠骨髓间充质干细胞超微形态学变化的影响
•   3.4 黄芪甲苷Ⅳ对小鼠骨髓间充质干细胞神经元特异性蛋白表达的影响
•   3.5 黄芪甲苷Ⅳ对小鼠骨髓间充质干细胞Wnt3a、β-catenin、Notch-1蛋白表达的影响
•   3.6 黄芪甲苷Ⅳ对小鼠骨髓间充质干细胞Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin、Notch-1mRNA表达的影响
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高志红,左亚奇,李鹏涛,张辉,李海峰,张晓丽

关键词: 黄芪甲苷,诱导,骨髓间充质干细胞,分化

来源: 中药材 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 河北北方学院

基金: 河北省高等学校科学技术研究项目(ZD2014067),河北北方学院校级科研项目(YB2018008)

分类号: R285.5

DOI: 10.13863/j.issn1001-4454.2019.07.037

页码: 1640-1645

总页数: 6

文件大小: 2535K

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