日本结缕草衰老叶片全长cDNA文库构建及酵母单杂交筛选验证

论文摘要

脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶（Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH）是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草（Zoysia japonica）PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿期延缓衰老提供理论依据。本研究利用Clontech的SMRT cDNA合成技术构建一个日本结缕草衰老叶片的高质量全长cDNA文库,其滴度为2.0×106cfu·mL-1,插入片段平均长度大于1 kb,cDNA片段插入重组率为100%。该文库的完整性较高,可涵盖绝大多数基因信息,为酵母单杂交筛选奠定了基础。利用酵母单杂交技术,筛选到可与ZjPPH1基因启动子片段结合的候选菌落42个,并对20个候选基因进行测序和生物信息学分析,初步筛选到6个参与细胞生长和衰老过程的重要候选基因,为进一步探索ZjPPH1基因在日本结缕草衰老和叶绿素降解中的上游调控机制提供了理论支撑。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 总RNA的提取及全长cDNA的合成
•     1.2.2 cDNA短片段去除
•     1.2.3 初级文库质粒的获得
•     1.2.4 初级cDNA文库百万级扩增及质粒提取
•     1.2.5 酵母单杂交筛选cDNA文库
•     1.2.6 候选基因的生物信息学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 RNA提取及质量检测
•   2.2 全长cDNA合成
•   2.3 短片段去除
•   2.4 载体连接及初级文库滴度检测
•   2.5 初级cDNA文库百万级扩增及质粒提取
•   2.6 pHIS2-ZjPPH1pro质粒最低3-AT浓度筛选
•   2.7 酵母单杂交筛选候选基因
•   2.8 候选基因的生物信息学分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 滕珂,檀鹏辉,范希峰,岳跃森,姜红岩,武菊英

关键词: 日本结缕草,全长文库,酵母单杂交

来源: 草地学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 园艺

单位: 北京市农林科学院北京草业与环境研究发展中心,北京林业大学草业与草原学院

基金: 国家自然科学青年基金(31901397),北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20180101,20180706),北京市科技计划项目(No.171100007217001)资助

分类号: S688.4

页码: 1486-1493

总页数: 8

文件大小: 1887K

下载量: 285