雨生红球藻和小球藻间的原生质体融合与糖异养融合子筛选

论文摘要

为了增强雨生红球藻的异养生长能力,提高规模化培养效率,本研究基于PEG介导的原生质体融合技术,在雨生红球藻SCCAP K-0084和小球藻SAG211.11a间开展了细胞融合以及糖异养融合子筛选研究,筛选中通过限制性糖异养条件和添加潮霉素分别抑制野生型的雨生红球藻和小球藻的生长,提高筛选效率。结果表明,小球藻SAG211.11a具有极强的异养生长能力,能够利用葡萄糖、果糖、乙酸钠、甘油、苹果酸以及琥珀酸进行异养生长,而雨生红球藻则仅能够利用乙酸盐进行异养生长,此外雨生红球藻SCCAP K-0084还具有极强的潮霉素耐受能力,可以被应用于融合子筛选中。研究中,雨生红球藻和小球藻的原生质体制备效率分别达到72.11%±3.94%和42.07%±3.73%,满足细胞融合需要,融合过程中观察到雨生红球藻和小球藻间的典型融合现象,并且在限制性糖异养筛选下获得了雨生红球藻形态的融合子克隆,融合子的生长速率相比于野生型雨生红球藻有明显的增强,三个融合子在10 d培养后细胞密度分别达到6.7×104、8.7×104、6.5×104个/mL,明显高于野生型的2.45×104个/mL,但是相比于小球藻10 d后1.4×106个/mL的细胞密度而言,异养生长能力仍然有限,而且在连续传代过程中融合子经常会出现表型分化的现象。这一研究证明,通过细胞融合杂交的方式能够使雨生红球藻获得糖异养的生长能力,但是异源基因组间重组效率有待进一步提高。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 可利用糖底物的筛选与潮霉素抗性鉴定
•     1.2.2 雨生红球藻的原生质体制备
•     1.2.3 小球藻的原生质体制备
•     1.2.4 原生质体制备率的计算
•     1.2.5 雨生红球藻与小球藻原生质体融合
•     1.2.6 融合细胞的筛选
•     1.2.7 融合子在含葡萄糖培养基中生长速率的测定
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 雨生红球藻与小球藻的异养生长
•   2.2 雨生红球藻的原生质体制备
•   2.3 小球藻原生质体的制备
•   2.4 雨生红球藻与小球藻原生质体融合
•   2.5 糖异养细胞的筛选
•   2.6 融合子的培养与鉴定
•   2.7 融合子的糖异养生长
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐晓莹,史文凯,袁冠华,张文蕾,张维,崔玉琳,刘天中

关键词: 雨生红球藻,小球藻,原生质体融合,融合子,糖异养

来源: 食品工业科技 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所山东省能源生物遗传资源重点实验室,中国科学院大学,烟台市水产研究所,中国科学院海岸带研究所海岸带生物学与生物资源利用所重点实验室

基金: 国家自然科学基金中泰合作研究基金(51561145015),山东省能源生物遗传资源重点实验室开放基金课题(SDKLEG201805)

分类号: Q943.2

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.09.027

页码: 153-159+177

总页数: 8

文件大小: 1195K

下载量: 232