一、PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究（论文文献综述）
周囡囡[1]（2019）在《神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植促进PD大鼠神经功能修复及机制研究》文中研究表明帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种多发于老年人的神经退行性疾病,其常见的运动症状有静止性震颤、运动迟缓、肌僵直、姿势反射障碍等,非运动症状有焦虑、睡眠障碍、认知障碍等。近年来,干细胞研究所取得的成就为PD治疗带来了新的希望。PD的主要病理特征为中脑黑质（substantia nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元的选择性缺失。PD的发病机制目前尚不清楚,但大量研究表明神经炎症在DA能神经元变性丢失过程中起着重要作用。研究表明神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植在改善PD神经炎症微环境中具有重要的作用。嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）因其出色的神经营养功能经常被应用于细胞的联合移植中,被称为移植细胞的“营养泵”。近年来越来越多的证据表明OECs在改善移植细胞炎症微环境中起到重要作用。为研究NSCs与OECs联合移植对PD大鼠神经功能修复作用及其机制,本实验将E1112 d胎鼠中脑来源的NSCs进行体外培养、诱导分化和免疫荧光鉴定,将13d新生鼠嗅球来源的OECs体外培养并进行免疫荧光鉴定。移植前用GFP-HIV转染NSCs以标记NSCs,用Hoechst 33342标记OECs。在成年雄性Wistar大鼠右侧内侧前脑束和黑质两点注射6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）制备PD模型,造模4 w后选择造模成功的PD大鼠进行纹状体（striatum,Str）内细胞移植。移植手术7 d后通过荧光观察细胞移植情况;通过旷场试验（open field test,OFT）、平衡木实验和握力测试检测PD大鼠的自发运动能力、焦虑程度、运动协调能力和肌僵直程度;通过蛋白质免疫印迹（western blot,WB）检测PD大鼠Str及SN脑区中酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）蛋白的表达变化和PD大鼠右侧Str脑区中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factorα,TNF-α）、白介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）和白介素-4（interleukin 4,IL-4）蛋白的表达变化。结果如下:1.NSCs体外培养3代后可见形状规则的神经球,神经球经免疫荧光鉴定呈Nestin阳性,分化后的NSCs免疫荧光鉴定为TH阳性和GFAP阳性。体外培养的OECs呈现双极和多极的细胞形态,且大部分细胞免疫荧光鉴定呈P75NTR阳性。2.利用GFP-HIV转染NSCs标记NSCs,利用Hoechst 33342标记OECs,细胞绝大多数被成功标记。移植手术7 d后,对大鼠脑切片进行荧光观察,对照组和6-OHDA组均未观察到荧光,而各细胞移植组可见与细胞标记物相应的荧光,说明细胞移植成功。3.行为学实验结果显示,与对照组相比,6-OHDA组旷场运动距离较短（P<0.01,n=9-11）,说明6-OHDA组大鼠自发运动能力下降;相比6-OHDA组,联合移植组旷场运动距离较长（P<0.05,n=9-11）,但NSCs或OECs单独移植组旷场运动距离有所增加但无统计学差异,说明NSCs与OECs联合移植组大鼠自发运动能力短期内得到改善。相比对照组,6-OHDA组平衡木得分降低（P<0.001,n=9-11）,说明6-OHDA组大鼠运动协调能力下降;相比6-OHDA组,单独移植组或联合移植组的平衡木得分均略有上升,但差异无统计学意义（P>0.05）,说明单独移植组或联合移植组大鼠运动协调能力短期内无改善。相比对照组,6-OHDA组悬挂持续时间增加,说明6-OHDA组大鼠肌僵直程度增加（P<0.05,n=9-11）;相比6-OHDA组,单独移植组或联合移植组悬挂持续时间均略有下降,但差异无统计学意义（P>0.05）,说明单独移植组或联合移植组大鼠肌僵直症状短期内无明显缓解。4.OFT结果显示,与对照组相比,6-OHDA组的旷场外周与中央活动时间比值（Pt/Ct）变大,说明6-OHDA组大鼠焦虑程度较高（P<0.05,n=9-11）,与6-OHDA组相比,OECs移植组和联合移植组的Pt/Ct变小,说明OECs移植组和NSCs与OECs联合移植组的焦虑程度较低（P<0.05,n=9-11）。5.PD大鼠左侧Str和SN的TH蛋白表达均无变化（P>0.05）。右侧Str的TH蛋白表达变化明显,与对照组相比,6-OHDA组、NSCs移植组、OECs移植组和联合移植组的TH表达量均减少（P<0.001,n=5-7）,而与6-OHDA组相比,NSCs移植组和联合移植组的TH表达量略有增加,但无统计学意义（P>0.05）;右侧SN的TH表达变化明显,与对照组相比,其余四组TH表达量均减少（P<0.001,n=5-7）,与6-OHDA组相比,联合移植组的TH表达量略有增加,但无统计学意义（P>0.05）。6.PD大鼠右侧Str的炎性因子表达变化明显。与对照组相比,6-OHDA组的TNF-α、IL-1β和IL-4表达量均增加（P<0.05,n=5-7）。与6-OHDA组相比,联合移植组的TNF-α和IL-1β表达量减少（P<0.05,n=5-7）,IL-4的表达量略有增加,但无统计学差异（P>0.05）;单独移植组的IL-1β表达量减少（P<0.05,n=5-7）,且TNF-α与IL-4表达量减少,但均无统计学差异（P>0.05,n=5-7）。以上结果表明,NSCs和OECs联合移植7d后PD大鼠的自发运动能力增强,焦虑程度降低;促炎因子TNF-α和IL-1β的表达量减少,说明联合移植短期内能促进PD大鼠神经功能部分修复,其修复机制可能与促炎因子的表达量减少有关。本研究结果将为今后应用NSCs和OECs联合移植治疗PD供新的实验和理论依据。
李统帅[2]（2019）在《Notch信号通路在Lmx1α及NTN介导的hBMSCs向多巴胺能神经元样细胞定向分化中的机制研究（hBMSCs的诱导分化与帕金森样模型的构建）》文中认为目的:探讨h BMSCs（Human marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs）诱导分化为多巴能神经元样细胞并作为神经营养因子基因NTN（Neuturin,NTN）与转录因子基因Lmx1a（LIM homeobox transcription factor 1-alpha,Lmx1α）载体移植治疗鱼藤酮帕金森样小鼠的功能研究。方法:在本研究中,我们利用重组慢病毒载体向h BMSCs感染神经营养因子基因NTN和转录因子Lmx1α基因,采用化学因子、细胞因子以及转基因有机结合的方法,诱导h BMSCs向多巴胺能神经元样细胞分化。诱导细胞的体内活性检测在我们建立的小鼠鱼藤酮PD样模型体内进行。将诱导后的细胞采用立体定位注射的方法移植至小鼠鱼藤酮PD样模型中脑黑质区域。然后通过中脑多巴胺等神经特异性标志物的病理检测,综合评价多巴胺能神经元样细胞在小鼠鱼藤酮PD样模型中的发育、发展状况。结果:（1）成功构建携带NTN与Lmx1a基因的重组慢病毒。（2）h BMSCs成功诱导分化为多巴胺能神经元样细胞。（3）成功构建了鱼藤酮帕金森样小鼠模型。结论:重组慢病毒介导的神经营养因子基因NTN及转录因子基因Lmx1a感染导入h BMSCs内并结合化学水平与生物水平成功分化为成熟神经元样细胞并表达特异性蛋白。通过鱼藤酮与慢性应激加剧了小鼠中脑黑质区域多巴能神经元的变性死亡,神经递质稳态遭到破坏,最终加重了小鼠PD样的表现性;其发病机理更加类似于人类PD的发病机制。
匡巍[3]（2018）在《淫羊藿次苷Ⅱ诱导hAMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞的效应及初步机制的研究》文中指出目的:通过观察淫羊藿次苷Ⅱ（IcarisideⅡ,ICSⅡ）诱导人羊膜间充质干细胞（Human Amnion Mesenchymal Stem Cells,h AMSCs）分化后细胞的表达产物及PI3K信号通路抑制剂对诱导分化的影响,探讨ICSⅡ诱导h AMSCs分化的效应及作用机制。方法:（1）流式细胞仪鉴定P4代h AMSCs表型后,将其种入细胞培养板和培养瓶中作为受试细胞。（2）根据预实验结果,在高糖DMEM培养基基础上配备含ICSⅡ浓度为10μmol/L、3μmol/L、1μmol/L和0μmol/L,DMSO体积分数3‰的诱导培养基。将受试细胞随机分为A组、B组、C组、对照组和抑制剂组,前4组分别加入对应的诱导培养基1m L,抑制剂组用PI3K特异性抑制剂LY294002 20μmol/L预先处理h AMSCs1h,再加入B组体系进行诱导。各组均间隔48h换液。（3）诱导6h、7d和21d时,应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态及记录细胞长度。诱导21d时采用免疫荧光法检测各组Neu N、NSE、MAP-2、GFAP和TH的表达,并计算阳性细胞表达百分比;应用蛋白质印迹法检测各组NSE、MAP-2、GFAP和TH的相对表达量;ELISA法检测诱导培养基上清液中多巴胺的浓度。结果:（1）原代及传代hAMSCs在含血清的LG-DMEM/F12培养基中增殖迅速,细胞呈巢状或漩涡状排列。流式细胞仪检测,P4代细胞高表达CD44、CD73、CD105、CD90间充质干细胞相关表面抗原,不表达CD34、CD45、CD11b、CD19、HLA-DR。（2）倒置相差显微镜下观察显示:诱导培养6h时,各组细胞形态无明显变化,细胞长度差异无统计学意义（P>0.05）。诱导培养7d时,A组、B组、C组均出现双极神经元样细胞,抑制剂组细胞形态宽大呈梭形,细胞密度增大,对照组细胞数量增多,相互融合;与对照组比较,A组、B组、C组和抑制剂组细胞明显延长（P<0.05）,A和B组比较差异无统计学意义（P>0.05）,但两组均较C组和抑制剂组明显延长（P<0.05）。诱导培养21d,A组、B组和C组双极神经元样细胞数明显增多,抑制剂组细胞间相互融合,对照组细胞铺满培养孔;与对照组比较,A组、B组、C组和抑制剂组细胞明显延长（P<0.05）;与抑制剂组,A组、B组、C组细胞均延长（P<0.05）;B组较其他各组细胞均延长（P<0.05）。（3）诱导21d时免疫荧光显示:各组GFAP表达均不明显。Neu N、NSE、MAP-2和TH在各组均有表达,A组、B组和C组表达较强,抑制剂组和对照组表达微弱,B、A组和C组Neu N表达于细胞核,但A组和C组部分细胞质中也有表达,NSE、MAP-2和TH表达于细胞质。Neu N、NSE、MAP-2和TH阳性细胞率A组、B组和C组较抑制剂组和对照组增高（P<0.05）,抑制剂组与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）,A组与B组Neu N、MAP-2和TH阳性细胞率差异无统计学意义（P>0.05）,但均较C组高（P<0.05）;B组NSE阳性细胞率较A组、C组高（P<0.05）。（4）诱导21d时Western-blot结果示:GFAP在各组中均不表达。A组、B组和C组NSE、MAP-2、TH表达较抑制剂组、对照组明显增加（P<0.05）,A组、B组和C组NSE、TH表达差异无统计学意义（P>0.05）,但A组、B组MAP-2表达量较C组多（P<0.05）。（5）诱导21d时ELISA结果示:A组、B组、C组培养基上清液中多巴胺浓度均较抑制剂组和对照组增高（P<0.05）,A较B组、C组高（P<0.05）,B组较C组高（P<0.05）。结论:在本实验条件下,ICSⅡ可诱导h AMSCs向多巴胺能神经元样细胞分化,诱导浓度以3-10μmol/L最佳,PI3K信号通路参与了诱导分化过程。
张玲玲[4]（2018）在《何首乌活性成分二苯乙烯苷对神经干细胞分化为DA能神经元的作用及机制》文中进行了进一步梳理帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种常见的、与衰老密切相关的神经系统退行性疾病。PD主要的病理特征是中脑黑质（Substantia nigra,SN）致密部多巴胺（Dopamine,DA）能神经元进行性退变坏死,引起纹状体部位DA含量下降。目前临床治疗PD的方法主要包括药物治疗和手术治疗,但这些治疗手段只能缓解症状,仍不能有效改变由于神经元进行性退变死亡引起的系统功能障碍。因此寻求理想的治疗手段以补充缺失DA能神经元迫在眉睫。神经干细胞（neural stem cells,NSCs）是一类具有高度自我更新能力的细胞。NSCs在增殖和迁移的过程中具有多向分化潜能,可以分化为DA能神经元,被誉为是治疗PD最具有应用前景的种子细胞。然而,目前常规诱导NSCs向DA能神经元分化方案效率较低、步骤繁琐而且不稳定,故很大程度限制了其在PD治疗中的应用。二苯乙烯苷（tetrahydroxystilbene glucoside,TSG）是传统中药何首乌（Polygonum multiflorum thunb,PM）的主要活性成分,大量研究表明TSG具有促进神经营养因子分泌和神经保护作用,但TSG能否有效诱导NSCs向DA能神经元方向分化的作用尚不清楚。本课题以小鼠中脑腹侧NSCs为切入点,观察了TSG诱导中脑NSCs定向分化为DA能神经元的作用,采用细胞和分子生物学等技术,从形态特征和生化表型对分化产生的DA能神经元进行鉴定。目前诱导NSCs定向分化机制尚不清楚,本实验将探明TSG促进NSCs分化为DA能神经元的Wnt/β-catenin信号传导通路,为临床治疗PD等神经退变性疾病的中药联合细胞治疗及组织工程提供新的思路和实验依据。【目的】1.探讨中药何首乌活性成分TSG诱导NSCs定向分化为DA能神经元的作用,获得有生化表型和有细胞功能的成熟DA能神经元。2.阐明TSG诱导NSCs定向分化为功能性DA能神经元Wnt/β-catenin分子调控机制。【方法】1.中脑NSCs分离、培养和鉴定:取孕12d的Balb/c小鼠胚胎中脑腹侧组织,体外分离和DMEM/F12无血清（含有20ng/ml的EGF和FGF,1%N2）培养,细胞Nestin免疫荧光染色鉴定。2.EdU标记:EdU标记检测NSCs增殖情况。3.TSG处理:去除生长因子刺激,将不同浓度的TSG（0,0.5,1,5,10,20μM）添加到培养基里进行NSCs分化诱导。4.流式细胞检测:检测TSG对NSCs的作用。5.免疫荧光染色:在不同条件诱导后,进行Tuj-1、GFAP、CNPase、TH、DAT、和Nurr1等的染色并观察细胞染色情况以及细胞形态变化情况。6.Western Blot:定量分析Tuj-1、GFAP、CNPase、TH、DAT、Nurr1、Wnt1,Wnt3a,Wnt5a和β-catenin等蛋白的表达水平,比较不同诱导条件下这些分子表达变化。【结果】第一部分:中脑来源的神经干细胞体外分离、培养、增殖和细胞分化的研究1.细胞培养7d后可形成呈悬浮生长的“神经球”,随着培养时间延长神经球不断增多,体积也逐渐增大,经Nestin免疫荧光染色显示均呈阳性,证明培养的细胞为NSCs。2.EdU染色结果:随着培养时间延长,EdU阳性细胞数量在不断增加,5d EdU阳性细胞数量达到最高。3.免疫荧光染色结果显示:采用常规含2%胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）诱导方案对培养的NSCs进行诱导,12h后细胞形态由球形逐渐变成多角形,并且有突起延伸,7d后,视野里细胞呈现不同形态,有些胞体立体感强,有的折光性好,有的细胞呈扁平形。经Tuj-1、GFAP和CNPase免疫荧光染色发现,这些分化的细胞中,GFAP阳性细胞数量最多,Tuj-1次之,CNPase阳性细胞最少,表明所培养的NSCs具有多分化潜能。而无血清对照组细胞贴壁速度较慢,没有明显的Tuj-1、CNPase、GFAP阳性细胞出现,视野里大部分细胞呈现退化状态。4.采用2%FBS诱导中脑NSCs分化,我们可以观察到Tuj-1和GFAP阳性反应细胞,随着分化时间的延长,Tuj-1阳性细胞数目不断增加,诱导分化2w后达到最高值,但是GFAP阳性细胞数目一直升高。第二部分:二苯乙烯苷对中脑神经干细胞存活、凋亡和分化的作用,及其相关的Wnt/β-catenin信号分子机制1.流式细胞检测结果表明:在5个不同浓度TSG（0.5,1,5,10,20μM）诱导组中,TSG（1,5,10μM）组中脑NSCs存活数目较多,细胞凋亡较少,其中10μM TSG作用最佳,与对照组相比有显着性差异（P<0.01）。2.免疫荧光染色和Western blot检测结果显示:i 10μM TSG+2%FBS诱导NSCs分化2w,在分化细胞中,Tuj-1阳性细胞数目和蛋白表达相对于2%FBS对照组明显增加,而GFAP和CNPase阳性细胞数目和蛋白表达减少,经统计学分析有显着性差异（P<0.01）。10μM TSG组作用与10μM TSG+2%FBS组在促NSCs分化效果相似。而空白对照组（不加任何诱导剂）,没有明显的细胞分化,未检测到Tuj-1、GFAP和CNPase阳性细胞及蛋白表达。ii在对DA能神经元三个特异性标记蛋白检测中,研究发现10μM TSG+2%FBS诱导NSCs分化2w,分化的细胞中TH、DAT和Nurr1阳性细胞数目和蛋白表达水平增加,单独TSG作用与TSG+2%FBS组效果相似,这两组与2%FBS组相比都有显着性差异（P<0.01）,而空白对照组（没有任何诱导剂）没有明显的阳性细胞出现和蛋白表达。3.TSG诱导NSCs分化的机制:Western blot检测结果表明:同样地,在以上相同的处理组中,10μM TSG+2%FBS诱导可明显的提高分化的细胞中Wnt1、Wnt3a、Wnt5a和β-catenin蛋白表达水平,单独TSG作用与TSG+2%FBS组效果相似,这两组与2%FBS组相比都有显着性差异（P<0.01）。而空白对照组（不加任何诱导剂）,没有明显的细胞分化,未检测到Wnt1、Wnt3a、Wnt5a和β-catenin蛋白表达。而给予Wnt信号阻断剂IWR1处理,倒置相差显微镜下观察可以看到NSCs增殖速度明显升高,细胞迁移和分化能力明显降低。流式细胞检测显示:加入IWR1阻断剂明显抑制NSCs的存活,表现为细胞存活数目降低,凋亡数目增加,与未加入IWR1阻断剂的10μM TSG组相比有显着性差异（P<0.01）。此外,免疫荧光染色结果表明:IWR1阻断剂组分化的细胞中Tuj-1和TH双标阳性细胞数目明显少于未加入IWR1阻断剂10μM TSG组,统计学分析显示有显着性差异（P<0.01）。【结论】1.采用常规的含2%FBS培养基可以诱导NSCs可分化为三种细胞类型:神经元（Tuj-1+）、星形胶质细胞（GFAP+）和少突胶质细胞（CNPase+）。NSCs向神经元方向分化的最佳时间为2w。而无血清诱导条件的细胞不能正常分化,呈现退化状态。2.一定浓度的TSG可以促进中脑NSCs存活,减少细胞凋亡,10μM TSG作用效果最佳。另一方面,与2%FBS对照组相比,TSG可以促进NSCs分化为更多的DA能神经元,且能够表达DA能神经元TH、DAT和Nurr1等标志性markers,表明NSCs分化产生的细胞具有成熟DA能神经元的形态特征。3.TSG诱导中脑NSCs定向分化为DA能神经元作用机制可能是通过激活Wnt/β-catenin分子信号通路而实现。
陈立,杜娟,吕晓红[5]（2011）在《神经干细胞体外培养定向分化为多巴胺能神经元相关因子的研究》文中进行了进一步梳理神经干细胞（neural stem cell,NSCs）是一类具有分裂潜能和自我更新能力的母细胞,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力,存在于中枢神经系统多个部位。神经干细胞的最直接应用是利用神经干细胞的多方向分化潜能特性,进行神经干细胞的移植,以恢复宿主的中枢神经系统的正常结构和功能。由于细胞移植治疗需要相当
谭雪锋[6]（2011）在《Nurr1和Brn4基因转染促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究》文中研究表明第一部分Nurr1和Brn4基因转染对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响目的:观察体外Nurr1和Brn4基因转染对大鼠中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化和成熟的影响。方法:1.通过RT-PCR方法从大鼠脑组织中克隆Nurr1与Brn4基因的cDNA全长序列,酶切后分别连接到pEGFP-N1与pDsRed-N1质粒载体中,经转化、筛选和鉴定等步骤构建pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4真核表达载体。2.采用无血清培养技术从孕14天胎鼠的中脑组织中分离培养神经干细胞,用Nestin和BrdU标记及免疫荧光检测验证其胚胎源性和分裂增殖能力,分别用神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性标记物MAP-2、GFAP和CNP免疫荧光细胞化学检测验证其多分化潜能。3.将神经干细胞分成4组进行转染,对照组转染空质粒载体pEGFP-N1;Brn4组转染重组质粒载体pDsRed-N1-Brn4 ; Nurr1组转染重组质粒载体pEGFP-N1-Nurr1;Nurr1+Brn4组同时转染重组质粒载体pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4。将各组转染后的细胞在体外诱导分化,通过检测质粒载体中荧光蛋白报告基因的表达评价转染效率,应用Western blot和实时PCR等方法检测目的基因的表达效果。诱导分化3周后分别用MAP-2、DAT和TH免疫荧光双标记技术检测神经干细胞分化为多巴胺能神经元的情况,并测量TH阳性细胞的胞体面积和细胞周长,用高效液相色谱仪检测细胞分化培养液中多巴胺的释放水平。结果:1.从大鼠脑组织中克隆到Nurr1与Brn4基因的全长序列,经基因重组后获得pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4真核表达载体。2.胎鼠中脑细胞悬液培养1周后可形成由数百个细胞组成的呈悬浮生长的神经球,经BrdU和Nestin免疫荧光检测均呈阳性。神经球中的细胞诱导分化后出现MAP-2、GFAP和CNP阳性的神经系统三种类型细胞,其中分化的星形胶质细胞数量最多,神经元次之,少突胶质细胞最少。3.荧光显微镜下观察发现,pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4质粒转染神经干细胞6-8小时后即可见荧光蛋白表达,转染后48小时表达最明显,随后荧光逐渐减弱减少,至3周左右基本消失。荧光照片经图像分析得出基因转染效率为35%左右,两种质粒共转染没有竞争性抑制作用。4. Western blot和实时定量PCR结果分析显示,重组质粒转染后目的基因的表达量明显升高,pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4两种质粒共转染后Nurr1和Brn4的表达没有叠加效果。5.免疫荧光检测结果显示,对照组和Brn4组中TH阳性神经元很少,分化率约为3%,细胞形态不成熟,表现为TH多集中在胞体内表达,细胞胞体较小,突起少而短。TH阳性神经元极少共表达DAT;Nurr1组TH阳性神经元明显增多,分化率为16.5%,但细胞形态也欠成熟,细胞突起很少。TH阳性神经元也很少共表达DAT;Nurr1+Brn4组TH阳性神经元最多,分化率为17%,而且细胞形态较成熟,TH在胞体和突起中均有表达,细胞胞体较大,突起细长丰富,局部交织成网状。TH阳性神经元大多数能共表达DAT。6.高效液相色谱分析显示,对照组和Brn4组的培养液中多巴胺含量很低,Nurr1组多巴胺含量略有升高,Nurr1+Brn4组多巴胺含量最高,达到3.40μg/ml。结论:1.从鼠胚中脑组织中分离得到的细胞具有不断增殖和自我更新能力,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多分化潜能,是中枢神经系统的干细胞。2. Nurr1基因过表达能促进神经干细胞向TH免疫阳性的多巴胺能神经元分化,但产生的细胞欠成熟;Brn4基因不能诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化,但Nurr1联合Brn4基因共转染能促进神经干细胞向形态、表型、功能成熟的多巴胺能神经元分化。第二部分转基因神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究目的:观察转基因的神经干细胞移植入帕金森病（PD）大鼠模型损毁侧纹状体后存活、分化和发挥生理功能的情况。方法:1.应用脑立体定位技术单点注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）至大鼠右侧前脑内侧束制备单侧PD大鼠模型。然后应用阿朴吗啡（APO）诱发旋转试验验证模型是否成功,并行脑组织切片Nissl染色和TH免疫组织化学染色验证模型的可靠性。2.将成功PD大鼠模型随机分为4组进行移植,假手术组不移植神经干细胞;NSCs组移植未转染的神经干细胞;Nurr1组移植转染pEGFP-N1-Nurr1的神经干细胞;Nurr1+Brn4组移植联合转染pEGFP-N1-Nurr1和pDsRed-N1-Brn4的神经干细胞。各组神经干细胞用DIL标记后在脑立体定位下进行移植。用APO腹腔注射诱发旋转试验观察移植后大鼠行为的改善情况。移植后12周脑组织切片行TH免疫荧光检测移植细胞分化为多巴胺能神经元的情况,用高效液相色谱仪检测移植侧纹状体中多巴胺的含量。结果:1. PD模型大鼠出现典型的旋转行为,旋转速度超过210圈/30分钟的占全部实验动物的61%,连续观察20周旋转速度并不随时间推移而下降;Nissl染色见损毁侧黑质致密部神经元数量锐减;TH免疫组化染色见损毁侧黑质致密部TH阳性细胞大部分消失,损毁侧纹状体内TH免疫反应性降低,TH免疫阳性纤维明显减少。2.移植后假手术组和NSCs组PD大鼠的旋转行为没有明显改善,旋转圈数随时间先逐渐增加,至10周左右达到一稳定水平;Nurr1组移植后PD大鼠的旋转圈数不再进一步增加,而且从6周开始略有下降;Nurr1+Brn4组移植后PD大鼠的旋转行为明显改善,旋转圈数随时间推移逐步下降,但至12周末仍没有达到正常水平。3.免疫荧光结果显示,NSCs组可见DIL阳性细胞,但只有极少数呈TH阳性;Nurr1组可见较多DIL/TH双标神经元,但TH阳性神经元的突起少而短;Nurr1+Brn4组DIL/TH双标神经元最多,且TH阳性神经元形态较成熟,细胞突起较多较长。4.假手术组和NSCs组纹状体中DA含量较低,Nurr1组和Nurr1+Brn4组DA含量显着升高,其中Nurr1+Brn4组含量最高,达到7.33μg/ml,但仍然明显低于正常大鼠纹状体内的DA含量。结论:Nurr1基因过表达能诱导神经干细胞在体内分化为TH阳性的多巴胺能神经元,并在一定程度上提高移植区多巴胺的含量、改善大鼠的行为功能;Brn4能提高移植区多巴胺能神经元的存活率。联合转染Nurr1和Brn4基因的神经干细胞移植后能产生更多的TH阳性的多巴胺能神经元,显着提高移植区多巴胺含量,有效地改善大鼠的行为症状。
秦晓凌,韩旺,罗蔚锋,王小侠,刘春风[7]（2010）在《6-羟基多巴帕金森病大鼠双侧纹状体提取液对骨髓基质细胞的诱导作用》文中提出目的评价6-羟基多巴（6-OHDA）帕金森病（PD）大鼠纹状体提取液在体外对骨髓基质细胞（BMSCs）的诱导分化作用。方法建立单侧（右侧）PD大鼠模型,分别配制成毁损侧纹状体诱导液（L-SC）和未毁损侧纹状体诱导液（I-SC）。三代BMSCs培养至第3天进行试验。诱导组分别取L-SC和I-SC培养BMSCs,相差显微镜下观察细胞生长状态和细胞形态变化;48 h后收集细胞,免疫细胞化学染色检测细胞表面神经标记物巢蛋白（nestin）、神经特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和酪氨酸羟化酶（TH）,计数阳性率。另取部分BMSCs分别在含血清培养液（Ser-C）和无血清培养液（F-SerC）中培养,设为对照组。结果镜下观察,L-SC组和I-SC组BMSCs部分脱落,仍然贴壁的细胞失去原有外观,有的细胞具有突起样结构。Ser-C组BMSCs生长良好,F-SerC组中的BMSCs则不能继续贴壁生长。免疫细胞化学染色显示,Ser-C组仅GFAP有阳性表达。诱导后,L-SC诱导组nestin和GFAP阳性率明显升高,I-SC诱导组NSE和GFAP阳性率明显升高,其中GFAP阳性率与Ser-C组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,L-SC诱导组与I-SC诱导组之间GFAP阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。各组均无TH表达。结论 PD大鼠纹状体提取液可以引起BMSCs形态学改变。与Ser-C相比,诱导后GFAP阳性细胞显着增多,同时出现nestin和NSE阳性细胞。
秦晓凌[8]（2007）在《帕金森大鼠纹状体提取液对骨髓基质细胞诱导作用的实验研究》文中认为帕金森病（Parkinson’s Disease, PD）的主要病理改变是中脑黑质致密部多巴胺能神经元进行性减少,引起黑质纹状体系统多巴胺水平降低。服用左旋多巴制剂的多巴胺替代治疗至今仍是最为有效的治疗方法,但其远期疗效欠佳,症状波动,异动症以及精神症状长期困扰着患者和医疗人员。细胞移植是目前帕金森病治疗的新方法之一,如何在体外获得足量的多巴胺能神经元一直是神经科学界面临的一个难题。胎脑移植有比较好的效果,但是由于伦理束缚和来源限制,不能够得到广泛应用。骨髓基质细胞（Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs）是骨髓内的一种多潜能干细胞,在一定条件下,可分化为神经细胞。它可以直接从个体骨髓中获得,来源充足,取材方便,创伤小,且避免了移植技术难以逾越的移植排斥问题和伦理学的束缚,因此BMSCs定向诱导分化成为神经元甚至是多巴胺能神经元成为帕金森病研究领域的热点。骨髓基质细胞向神经样细胞分化的机制还不确定。研究者认为内在基因机制和种系限制以及细胞的命运是可塑的,环境可以引起细胞多潜能作用的发挥。神经组织或细胞微环境可以增强BMSCs向神经细胞方向分化的能力。纹状体是黑质多巴胺能神经元主要投射部位,是黑质多巴胺能神经元发挥生理作用的关键环节。动物实验已证实将BMSCs移植到纹状体,能够改善帕金森病大鼠或小鼠的行为。其可能作用机制是:BMSCs具有分泌神经营养因子的功能;BMSCs注入纹状体后,在局部微环境的作用下分化为神经细胞,如胶质细胞、多巴胺能神经元等。又有体外实验表明纹状体提取液对多巴胺能神经元有促进存活的作用,对细胞的分化有促进作用,还可以促进细胞突触生成。在进化的过程中,哺乳动物继承了多方面的机制以保护自己应对外来侵犯。帕金森病患者脑内DA能神经元70-80%丢失仍能保持正常运动,提示着一种自我保护机制。我们设想,帕金森大鼠纹状体提取液可以促进BMSCs向神经细胞方向分化,甚至分化为多巴胺能神经元。我们进一步设想正常纹状体（正常侧）提取液和PD纹状体（损伤侧）提取液两者间具有诱导作用上的差异。因此,我们进行了帕金森大鼠纹状体提取液诱导BMSCs的尝试,以期利用纹状体的生理作用以及纹状体提取液对细胞的促分化作用和对多巴胺能神经元的保护作用,诱导BMSCs分化成为神经细胞甚至是多巴胺能神经元。同时比较正常纹状体提取液与PD纹状体提取液作用上的可能差异性。本实验研究的目的:利用细胞培养技术,为BMSCs纹状体移植治疗帕金森病的机制提供直接依据。具体实验步骤:1,幼年大鼠骨髓基质细胞体外培养扩增与生物性状观察;2,帕金森大鼠纹状体提取液对骨髓基质细胞的诱导作用。第一部分幼年大鼠骨髓基质细胞体外培养与观察目的:体外分离培养大鼠骨髓基质细胞,通过超微结构观察和免疫组织化学检测探讨细胞生物学特性。方法:收集幼年大鼠骨髓细胞,利用贴壁培养法纯化扩增。培养细胞至第三代,相差显微镜及HE染色,扫描电镜和透射电镜观察细胞生长状态和细胞形态;免疫细胞化学染色检测细胞表面神经标记物巢蛋白（Nestin）,神经特异性烯醇化酶（neuron special enolase,NSE）,胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）。结果:电镜下细胞表面见大量微绒毛结构,一些细胞有单个或多个突起样结构。多数细胞膜完整,胞浆内存在丰富的细胞器;胞核大而明显,染色质分布正常;细胞间连接较少,可见缝隙连接。免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）阳性细胞15.05±3.92%。结论:贴壁培养法是体外培养大鼠BMSCs的稳定可靠的方法体系。第三代大鼠BMSCs具有生长旺盛,增值能力强,分化程度低的特点;部分细胞可表达GFAP。第二部分帕金森大鼠纹状体提取液对骨髓基质细胞的诱导作用目的:探讨帕金森大鼠纹状体提取液在体外诱导骨髓基质细胞分化为神经细胞的可能。方法:建立单侧（右侧）帕金森病大鼠模型,取出双侧纹状体分别制成正常纹状体（正常侧）提取液与PD纹状体（损伤侧）提取液,制成不同浓度含纹状体液的无血清培养基（诱导液）。收集幼年大鼠骨髓细胞,利用贴壁培养法纯化扩增获取三代细胞进行实验。MTT法分别检测不同浓度纹状体诱导液对BMSCs生长状态的影响。取10%,60%,90%诱导液（共六组）培养BMSC,相差显微镜下观察细胞生长状态和细胞形态变化。于48小时后收集诱导后的细胞,免疫细胞化学染色检测细胞表面神经标记物巢蛋白（Nestin）,神经特异性烯醇化酶（neuron special enolase,NSE）,胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）,酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）,计数阳性率。结果:相差显微镜下,部分细胞脱落,不再贴壁生长,悬浮于培养液中。仍然贴壁的细胞失去原有圆形或梭形外观,为不规则的多边形或长棒状。有的细胞团簇样存在,向四周伸出辐射状或长或短的较粗的刺状突起,还有的细胞单个存在,胞体不规则,向周围伸出单个或多个细长的突起样结构。免疫细胞化学染色显示,诱导后正常纹状体诱导液10%浓度组NSE阳性率为3.25±2.37%,GFAP阳性率为48.44±29.47%;60%浓度组NSE阳性率为20±8.62%,GFAP阳性率为54.60±33.14%;两组间无统计学差异。PD纹状体诱导液10%浓度组Nestin阳性率为12.23±5.57%,GFAP阳性率为55.56±30.23%;60%浓度组Nestin阳性率为11.92±4.01%,GFAP阳性率为55.56±30.23%;两组间亦没有统计学差异。各诱导组TH表达均为阴性。结论:帕金森大鼠纹状体提取液可以引起BMSCs形态学改变。与第三代BMSCs相比,诱导后GFAP阳性细胞显着增多,同时出现NSE,Nestin阳性细胞。总论1.贴壁培养法是体外培养大鼠BMSCs的稳定可靠的方法体系。第三代幼年大鼠BMSCs具有生长旺盛,增值能力强,分化程度低的特点;部分细胞表达GFAP。2.帕金森大鼠纹状体提取液可以引起第三代BMSCs发生形态学改变,部分细胞具有长短不一的突起样结构。与第三代BMSCs相比,诱导后GFAP阳性细胞显着增多,同时出现NSE,Nestin阳性细胞,但是没有TH阳性细胞。
姚谦明[9]（2006）在《鼠骨髓源神经干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化》文中研究表明一、概述。 帕金森病（Parkinson Disease，PD）是一种中老年人常见的以黑质纹状体区多巴胺能神经元进行性缺失为特征的中枢神经系统变性疾病，其特征是震颤、肌强直、运动减少。病理改变以黑质致密层多巴胺神经元部分缺失、神经元中有路易小体（Lewy body，LB）形成等为特点。其发病率在整体人群为0.1％，在65岁以上人群高达1％。随着社会老龄化，帕金森病的发病率和致残率有增多趋势。近来的研究发现孤儿核受体超家族的成员之一的Nurr1（Nuclear related receptor 1，Nurr1）基因对于中脑多巴胺神经元的发育和存活非常重要，由此展开了Nurr1与多巴胺神经元发育以及帕金森病发病关系的研究。 Nurr1是神经祖细胞外源性TH的转录活化因子和多巴胺转运体的转录活化因子，Nurr1是诱导各个发育阶段和区域的中枢神经系统祖细胞分化为多巴胺能神经元的关键因子。Nurr1的缺失决定性地改变了中脑多巴胺能神经元的正常发育，导致多巴胺特异性标志丧失及多巴胺递质缺乏，多巴胺前体细胞发育停滞，不能分化成正常的多巴胺细胞或在发育过程中逐渐凋亡。Nurr1基因多态性可能是典型帕金森病的一个重要的危险基因因素。 近年来神经干细胞（Neural Stem Cells，NSCs）在PD的实验治疗研究中越来越受到重视。NSCs应用于PD的研究基于它的生物学特性。①、发育、分化和成熟的过程中不表达主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类或Ⅱ类抗原，因此具有极低或无免疫原性，使其在异体移植后免受宿主的排斥，有助于其长期存活，
彭超华[10]（2005）在《IL-1β、AA诱导鼠胚中脑与皮质神经干细胞向TH阳性神经元分化的实验研究》文中进行了进一步梳理目的 在己成功分离培养皮质神经干细胞的基础上探索小鼠胚胎中脑区神经干细胞体外培养的方法,并观察比较二者在生长和分化性状方面的差异,以及它们在IL-1β、AA作用下向TH阳性神经元的诱导分化,为神经干细胞的基础理论和帕金森病细胞移植治疗的应用研究提供一定的实验资料。 方法 1.无菌条件下分离E12-E13天小鼠胚脑腹侧中脑曲,胰酶消化和机械吹打制成单细胞悬液,在bFGF和B27存在的无血清培养基中培养扩增,机械分离法传代,免疫细胞化学染色方法鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向。 2.无菌条件下同时分离培养胚鼠大脑皮质与腹侧中脑神经干细胞,倒置显微镜观察比较二者生长状况;含10%血清的DMEM/F12培养基接种分化,观察比较它们分化子代细胞中TH阳性神经元的情况。 3.体外培养中脑神经干细胞和皮质神经干细胞,分别传代各分为四组,在有血清条件下分别予以AA、IL-1β及AA+IL-1β诱导分化,并设空白对照,DAPI细胞核标记,抗酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学鉴定分化结果并细胞计数阳性细胞比例。 结果 1.从E12-E13鼠胚脑腹侧中脑曲分离的小部分细胞在B27和bFGF存在的无血清培养基中可以在体外培养和传代,这些细胞表达神经干细胞特异性抗原nestin,在撤除B27和bFGF的有血清培养基中能够分化为神经元和神经胶质细胞。 2.小鼠胎脑大脑皮质部位所含神经干细胞明显多于中脑,体外相同条件下皮质神经干细胞也更宜成球;有血清条件下分化,中脑神经干细胞可少量分化出TH阳性神经元;皮质神经干细胞则未见分化出TH阳性神经元。 3.在诱导分化实验中,AA、IL-1β及AA+IL-1β作用下中脑神经干细胞分化出TH阳性神经元比例分别约为10%、9%和11%,明显高于对照组（约1%,P<0.01）;三实验组间相对比较无统计学差异（P>0.05）;加AA诱导组中分化出的TH阳性神经元细胞形态更成熟。皮质神经干细胞各实验组均未见分化出TH阳性神经元。
二、PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究（论文提纲范文）
（1）神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植促进PD大鼠神经功能修复及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1 动物准备 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 实验试剂及实验仪器 |
| 1.3 大鼠PD模型制备 |
| 2 细胞培养及鉴定 |
| 2.1 细胞实验试剂及实验仪器 |
| 2.2 NSCs的培养、鉴定与分化 |
| 2.3 OECs的培养与鉴定 |
| 3 细胞移植 |
| 3.1 实验试剂来源 |
| 3.2 细胞准备 |
| 3.3 移植手术 |
| 4 大鼠行为学及焦虑程度测试 |
| 4.1 实验仪器 |
| 4.2 旷场试验 |
| 4.3 平衡木测试 |
| 4.4 握力测试 |
| 5 移植后NSCs和 OECs的检测 |
| 5.1 实验试剂及实验仪器 |
| 5.2 组织样品预处理及荧光观察 |
| 6 大鼠Str和 SN中 TH和 Str中炎性因子TNF-α,IL-1β及 IL-4 的表达变化 |
| 6.1 实验试剂及实验仪器 |
| 6.2 组织蛋白提取与Western blot |
| 7 技术路线图 |
| 8 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 细胞体外培养及鉴定 |
| 1.1 NSCs体外培养及分化 |
| 1.2 OECs体外培养 |
| 1.3 NSCs鉴定与分化 |
| 1.4 OECs的鉴定 |
| 2 移植前细胞标记及移植后检测 |
| 2.1 移植前细胞标记 |
| 2.2 移植后检测 |
| 3 大鼠运动行为学实验结果 |
| 3.1 旷场试验结果 |
| 3.2 平衡木测试结果 |
| 3.3 握力测试结果 |
| 4 大鼠焦虑程度 |
| 5 大鼠Str及 SN中 TH的表达变化 |
| 6 大鼠Str中炎性因子TNF-α,IL-1β及 IL-4 的表达变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（2）Notch信号通路在Lmx1α及NTN介导的hBMSCs向多巴胺能神经元样细胞定向分化中的机制研究（hBMSCs的诱导分化与帕金森样模型的构建）（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| Preface |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 帕金森病的研究概况 |
| 1.2 帕金森病的临床研究 |
| 1.3 BMSCs移植在帕金森治疗中的研究进展 |
| 1.4 基因治疗在帕金森治疗中的研究进展 |
| 1.5 本课题的科研思路及研究意义 |
| 第二章 实验方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 PLV-DUAL-LMX1a-NTN载体构建 |
| 2.3.1 制备感受态DH5α |
| 2.3.2 质粒的转化 |
| 2.3.3 质粒的提取 |
| 2.3.4 PCR获取目的片段 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶产物电泳及回收 |
| 2.3.6 质粒PLV-Dual和目的片段Lmx1a及 NTN连接 |
| 2.3.7 重组载体酶切鉴定及测序 |
| 2.4 慢病毒包装 |
| 2.4.1 重组慢病毒包装 |
| 2.4.2 慢病毒原液浓缩 |
| 2.4.3 慢病毒滴度测定 |
| 2.4.4 重组慢病毒感染细胞及鉴定 |
| 2.5 hBMSCs的诱导分化 |
| 2.5.1 诱导hBMSCs向多巴胺能神经元方向的分化 |
| 2.5.2 多巴胺能神经元样细胞特异性表型抗原的免疫荧光检测 |
| 2.6 帕金森样动物模型的构建 |
| 2.6.1 实验动物饲养及分组 |
| 2.6.2 脑立体定位注射 |
| 2.6.3 动物慢性应激方法 |
| 2.7 行为学检测 |
| 2.7.1 转棒实验(Rotarod activity) |
| 2.7.2 爬杆实验(Pole descent activity) |
| 2.8 小鼠脑神经递质指标检测 |
| 2.8.1 液相相关试剂配制 |
| 2.8.2 小鼠脑及血液的处理 |
| 2.8.3 氮纯仪纯化 |
| 2.8.4 液相上机操作SOP |
| 2.9 小鼠脑组织分离、切片及病理检测 |
| 2.9.1 灌流固定 |
| 2.9.2 组织脱水、包埋与切片 |
| 2.9.3 免疫组化检测中脑的病理变化 |
| 2.9.4 脑组织切片HE染色检测 |
| 2.10 Western Bloting鉴定 |
| 2.10.1 相关试剂配制 |
| 2.10.2 蛋白样品制备 |
| 2.10.3 蛋白浓度测定 |
| 2.10.4 蛋白定量检测 |
| 2.10.5 SDS-PAGE电泳 |
| 第三章 结果分析 |
| 3.1 载体质粒构建与测序鉴定 |
| 3.1.1 载体信息 |
| 3.1.2 载体酶切结果 |
| 3.1.3 目的基因PCR结果 |
| 3.1.4 目的基因、载体酶切结果 |
| 3.1.5 重组载体质粒的构建与酶切验证 |
| 3.1.6 测序鉴定 |
| 3.2 慢病毒包装与验证表达 |
| 3.2.1 慢病毒包装 |
| 3.2.2 重组慢病毒感染hBMSCs的效果 |
| 3.3 hBMSCs诱导分化 |
| 3.3.1 hBMSCs的诱导分化过程 |
| 3.3.2 诱导分化7 天后免疫荧光检测结果 |
| 3.3.3 诱导分化21 天后免疫荧光检测结果 |
| 3.4 鱼藤酮帕金森样模型构建 |
| 3.4.1 鱼藤酮脑立体定位手术 |
| 3.4.2 慢性应激实验 |
| 3.4.3 行为学检测 |
| 3.4.4 神经递质检测 |
| 3.4.5 中脑神经元损伤检测 |
| 3.4.6 中脑胶质细胞活化检测 |
| 3.4.7 中脑自噬蛋白P62 检测 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 相关课题研究进展 |
| 4.2 构建携带NTN与 Lmx1a基因的重组慢病毒 |
| 4.3 hBMSCs诱导分化为多巴胺能神经元样细胞 |
| 4.4 慢性应激加重鱼藤酮帕金森样更加模型表现性 |
| 4.5 慢性应激鱼藤酮帕金森样模型神经递质稳态遭到破坏 |
| 4.6 慢性应激加剧鱼藤酮帕金森样模型DA神经元损伤 |
| 4.7 慢性应激加剧了鱼藤酮帕金森样模型DA神经元死亡 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 |
（3）淫羊藿次苷Ⅱ诱导hAMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞的效应及初步机制的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要实验材料与仪器 |
| 1.2 主要试剂的配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 hAMSCs的形态特征 |
| 2.2 hAMSCs的表面抗原鉴定 |
| 2.3 诱导过程中hAMSCs的形态变化 |
| 2.4 诱导21d细胞神经相关抗原表达免疫荧光结果 |
| 2.5 诱导21d细胞神经相关抗原Western-blot结果 |
| 2.6 诱导21d培养基上清液多巴胺浓度结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）何首乌活性成分二苯乙烯苷对神经干细胞分化为DA能神经元的作用及机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 中脑来源的神经干细胞体外分离、培养、增殖和细胞分化的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 二苯乙烯苷对中脑神经干细胞存活、凋亡和分化的作用,及其相关的Wnt/β-catenin信号分子机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（6）Nurr1和Brn4基因转染促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 Nurr1 和 Brn4 基因转染对神经干细胞 向多巴胺能神经元分化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第二部分 转基因神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 博士生期间完成的论文 |
| 博士生期间承担科研项目情况 |
| 致谢 |
（8）帕金森大鼠纹状体提取液对骨髓基质细胞诱导作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 幼年大鼠骨髓基质细胞体外培养与观察 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 图示 |
| 第二部分 PD 大鼠纹状体上清液对骨髓基质细胞的诱导作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 图示 |
| 结论 |
| 综述 骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的研究进展 |
| 攻读硕士期间公开发表的论文 |
| 中英文对照缩略词汇表 |
| 致谢 |
（9）鼠骨髓源神经干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 研究背景 |
| 第一章 大鼠骨髓源神经干细胞的分离、培养与鉴定 |
| 第一节 目的和意义 |
| 第二节 材料与方法 |
| 骨髓采集及BMSCs的分离 |
| 骨髓源神经干细胞的诱导 |
| BMSCs-D-NSCs的检测指标 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 重组AAV-pcDNA3.1-Nurrl载体的构建与鉴定 |
| 第一节 目的和意义 |
| 第二节 材料与方法 |
| 重组AAV-pcDNA3.1-Nurrl载体的构建 |
| 第三节 重组AAV-pcDNA3.1-Nurrl载体的鉴定结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 pcDNA3.1-Nurrl在大鼠体外转染和移植的实验 |
| 第一节 研究背景 |
| 第二节 pcDNA3.1-Nurrl体外转染骨髓源神经干细胞 |
| 目的和意义 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第三节 Nurrl-BMSCs-D-NSCs向DA能神经元定向诱导分化 |
| 目的和意义 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四节 Nurrl来源的BMSCs-D-NSCs治疗PD模型的实验研究 |
| 目的和意义 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附论文图片 |
| 附录 |
| 综述 |
| 中英文名词缩写与对照 |
| 成果 |
| 致谢 |
| 学位论文原创性声明和学位论文版权使用授权书 |
（10）IL-1β、AA诱导鼠胚中脑与皮质神经干细胞向TH阳性神经元分化的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
四、PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究（论文参考文献）
- [1]神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植促进PD大鼠神经功能修复及机制研究[D]. 周囡囡. 青岛大学, 2019(03)
- [2]Notch信号通路在Lmx1α及NTN介导的hBMSCs向多巴胺能神经元样细胞定向分化中的机制研究（hBMSCs的诱导分化与帕金森样模型的构建）[D]. 李统帅. 昆明理工大学, 2019(04)
- [3]淫羊藿次苷Ⅱ诱导hAMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞的效应及初步机制的研究[D]. 匡巍. 遵义医学院, 2018(07)
- [4]何首乌活性成分二苯乙烯苷对神经干细胞分化为DA能神经元的作用及机制[D]. 张玲玲. 中国人民解放军空军军医大学, 2018(05)
- [5]神经干细胞体外培养定向分化为多巴胺能神经元相关因子的研究[J]. 陈立,杜娟,吕晓红. 中风与神经疾病杂志, 2011(09)
- [6]Nurr1和Brn4基因转染促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究[D]. 谭雪锋. 苏州大学, 2011(06)
- [7]6-羟基多巴帕金森病大鼠双侧纹状体提取液对骨髓基质细胞的诱导作用[J]. 秦晓凌,韩旺,罗蔚锋,王小侠,刘春风. 中华神经医学杂志, 2010(09)
- [8]帕金森大鼠纹状体提取液对骨髓基质细胞诱导作用的实验研究[D]. 秦晓凌. 苏州大学, 2007(04)
- [9]鼠骨髓源神经干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化[D]. 姚谦明. 第一军医大学, 2006(01)
- [10]IL-1β、AA诱导鼠胚中脑与皮质神经干细胞向TH阳性神经元分化的实验研究[D]. 彭超华. 武汉大学, 2005(05)