两株猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及gB、gC和gE基因的分子特征分析

论文摘要

为探明近年来河南省猪伪狂犬病病毒（PRV）的遗传变异情况,本研究于2017年采集河南漯河和中牟地区疑似伪狂犬病发病养殖场送检的脑组织病料,通过细胞盲传、噬斑纯化、间接免疫荧光试验、Western blotting和透射电镜技术进行病毒分离鉴定。TCID50法测定分离毒株的病毒滴度、生长曲线,通过小鼠感染试验测定分离毒株对小鼠的致死性。对gB、gC和gE基因进行PCR扩增、测序,并与参考毒株序列进行比对分析。结果显示,对PCR鉴定阳性的病料在PK-15细胞盲传后,两份病料在6代内均出现细胞病变,通过间接免疫荧光试验、噬斑纯化和透射电镜技术,成功分离鉴定了两株PRV,分别命名为HeN-LH株及HeN-YM株。分离毒株在PK-15细胞上的生长曲线显示,HeN-LH和HeN-YM株在感染后36 h病毒滴度分别可达108.35和106.63TCID50/mL。用不同浓度的病毒接种小鼠,结果显示,HeN-LH和HeN-YM株LD50分别为102.13及103.25TCID50。对gB、gC和gE基因全长扩增测序后构建遗传进化树,结果显示,两株PRV毒株与Bartha、Fa和Ea等经典株的亲缘关系相对较远,而与2011年以来国内不同省份分离的PRV变异株亲缘关系较近。氨基酸序列比对分析显示,与其他变异株相似,gB、gC和gE基因均发生了多个氨基酸的变异,且在特定的位点存在特征性的氨基酸插入和缺失。本研究成功分离鉴定了两株PRV变异株,分离株对小鼠均表现出一定的致病性,本试验结果可为河南省伪狂犬病的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 病料采集与处理
•     1.1.2 主要试剂及试验动物
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物设计与合成
•     1.2.2 病毒分离鉴定
•     1.2.3 病毒的噬斑纯化
•     1.2.4 病毒形态观察
•     1.2.5 间接免疫荧光及Western blotting鉴定
•     1.2.6 病毒的滴度测定及生长曲线绘制
•     1.2.7 小鼠感染试验
•     1.2.8 gB、gC和gE基因的克隆及分析
• 2 结 果
•   2.1 病毒的分离鉴定
•   2.2 病毒的噬斑纯化
•   2.3 病毒形态观察结果
•   2.4 间接免疫荧光及Western blotting鉴定结果
•   2.5 病毒滴度及生长曲线测定
•   2.6 致病性分析
•   2.7 gB、gC和gE基因进化树
•   2.8 主要毒力基因序列同源性及氨基酸变异分析
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李翔,郭振华,阮海宇,乔松林,张以芳,张改平

关键词: 伪狂犬病病毒,分离鉴定,噬斑纯化,感染试验,序列分析

来源: 中国畜牧兽医 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 云南农业大学动物医学院,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南农业大学牧医工程学院

基金: 国家重点研发计划专项“畜禽重要疫病病原学与流行病学研究(2017YFD0500105)”,云南省院士工作站(2014IC034),河南省农业科学院科研发展专项资金项目(2019CY01)

分类号: S852.65

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.03.029

页码: 881-890

总页数: 10

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