对虾白斑综合征病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立

论文摘要

根据对虾白斑综合征病毒（WSSV）基因保守序列,利用PrimerExplorer V4设计合成4套环介导等温扩增（Loop mediated isothermal amplification,LAMP）特异性引物,每套引物包含两条内引物（FIP和BIP）、两条外引物（F3和B3）和一条环引物（LF或LB）。利用钙黄绿素作为检测指示剂,建立了可视化WSSV的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。以构建的pMD18-WSSV重组质粒为标准模板进行10倍梯度稀释,测定LAMP对WSSV核酸的最低检测限,4套引物组分别建立LAMP方法均在63℃恒温条件反应60 min,结果显示WSSV-2、WSSV-3和WSSV-4的最低检测限分别为2.25～0.225、2.25～0.225和225～22.5 copies/μL。本研究建立的LAMP方法在1 h内即可完成检测,操作简单,无需复杂仪器,肉眼可直接观察检测结果,适用水产养殖的现场检测,为WSSV早期感染的快速检测提供了方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料和试剂
•   1.2 对虾DNA提取及PCR检测
•   1.3 白斑综合征病毒阳性质粒的构建
•   1.4 白斑综合征病毒LAMP引物及序列
•   1.5 白斑综合征病毒LAMP引物初步筛选
•   1.6 白斑综合征病毒LAMP引物的假阳性验证
•   1.7 白斑综合征病毒引物特异性实验
•   1.8 白斑综合征病毒引物灵敏度检测
• 2 结果
•   2.1 白斑综合征病毒LAMP引物初步筛选
•   2.2 白斑综合征病毒LAMP引物的假阳性验证
•   2.3 白斑综合征病毒引物特异性实验
•   2.4 白斑综合征病毒引物灵敏度检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴丽云

关键词: 对虾,白斑综合征,环介导等温扩增,快速检测

来源: 渔业研究 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 水产和渔业

单位: 福建省水产研究所,福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室

基金: 福建省种业创新与产业化工程海洋与渔业项目(2017FJSCZY02),厦门市科技计划项目2017产学研协同创新及科技合作项目(2016S0870),2018年福建省海洋经济发展补助资金项目(FJHJF-L-2018-3),2019年福建省海洋与渔业结构调整专项(2019HYJG02),福建省省属公益类科研院所基本科研专项(2019R1013-2)

分类号: S945.4

DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2019.06.003

页码: 478-486

总页数: 9

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