基于PEDV ORF3基因的强弱毒株鉴别方法的建立及初步应用

论文摘要

为了建立一种快速鉴别PEDV强毒株和弱毒株的RT-PCR方法,针对PEDV ORF3基因设计一对引物,优化其反应体系和退火温度,并测试其特异性和敏感性。结果显示,在退火温度55.2℃,上、下游引物各0.5μL时PCR扩增效果最理想。特异性试验结果显示本方法对9种常见猪病病原的核酸模板均不产生扩增条带;敏感性试验显示该方法的检测下限为T-ORF3IS272拷贝/μL和T-ORF3VC14.4拷贝/μL。将本试验建立的RT-PCR法与已建立的双重RT-PCR方法进行比较,结果显示两种方法符合率为99.2%,且本法的实际检出率更高。对120份临床样本检测结果显示,PEDV强弱毒株的阳性率分别为87.18%和84.21%,其中9份样本中同时检出2种PEDV毒株,但并未对检测方法的准确性造成影响。建立了一种基于ORF3基因的RT-PCR检测法,该方法特异性强、灵敏度高,可准确区分PEDV野毒株和弱毒株。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要试剂和毒株
•     1.1.2 引物设计
•   1.2 方法
•     1.2.1 样本处理
•     1.2.2 样本总RNA提取及反转录
•     1.2.3 RT-PCR反应条件优化
•     1.2.4 阳性质粒模板的制备
•     1.2.5 RT-PCR的特异性测试
•     1.2.6 RT-PCR的灵敏性试验
•     1.2.7 与现有检测PEDV方法的比较
• 2 结果
•   2.1 RT-PCR反应条件的优化
•   2.2 ORF3基因序列比对分析
•   2.3 特异性试验
•   2.4 敏感性试验
•   2.5 不同方法的符合率比较
•   2.6 临床样本检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 阚蕊慈,张斌,任玉鹏,岳华

关键词: 猪流行性腹泻病毒,基因,反转录聚合酶链反应,鉴别诊断

来源: 动物医学进展 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0500705),西南民族大学研究生创新科研项目(CX2018SZ46)

分类号: S852.65

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.05.001

页码: 1-6

总页数: 6

文件大小: 864K

下载量: 103