PlnF抗菌肽在乳酸乳球菌中的分泌表达及抑菌活性鉴定

论文摘要

采用乳酸乳球菌表达载体对PlnF抗菌肽基因进行克隆表达,旨在使重组乳酸菌可以直接应用于食品的发酵和防腐之中。在乳酸乳球菌pNZ8149/NZ3900表达载体中,构建含有胞外表达信号肽的PlnF抗菌肽重组质粒,进一步在电阻200Ω、电容25μF条件下电转入NZ3900感受态内。经溴甲酚紫培养基筛选、菌落聚合酶链式反应验证、测序等鉴定正确的重组菌株,以1 ng/mL Nisin诱导6 h后离心获得的上清液对金黄色葡萄球菌具有（14.03±0.23）mm的抑菌圈,经Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到在5.8～7.8 kDa间出现一条与预期大小相近的条带,进一步通过纳升液相色谱-电喷雾-串联质谱验证表明PlnF蛋白在pNZ8149/NZ3900乳酸乳球菌表达载体中正确地进行了胞外表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 菌株信息与活化
•     1.3.2 抗菌肽基因PCR扩增
•     1.3.3 感受态制备
•     1.3.4 重组质粒的构建与验证
•     1.3.5 PlnF蛋白的诱导表达与抑菌活力的测定
•   1.4 数据处理和图像处理
• 2 结果与分析
•   2.1 plnF基因的扩增
•   2.2 乳酸乳球菌阳性转化子的验证
•   2.3 重组乳酸乳球菌工程菌抑菌活力的鉴定
•   2.4 重组质粒的Tricine-SDS-PAGE和nano LC-ESI-MS/MS分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 任大勇,朱剑威,刘宏妍,于寒松,沈明浩

关键词: 乳酸乳球菌,抗菌肽基因,金黄色葡萄球菌,分泌表达

来源: 食品科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 吉林农业大学食品科学与工程学院,吉林农业大学中药材学院

基金: 吉林省教育厅十二五科研项目(吉教科合字(2015)第196号)

分类号: TS201.3

页码: 146-151

总页数: 6

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