米曲霉(Aspergillus oryzae)黄酒小曲4转化体系的构建及脂肪酶的异源表达

论文摘要

以米曲霉（Aspergillus oryzae）H4为研究对象,初步探究了其对潮霉素的敏感度及原生质体的制备时间。在0.1 mmol·L-1氯丙嗪和150μg·mL-1潮霉素B共同存在的条件下,H4的生长被完全抑制;在酶解时间为3.5 h时,H4的原生质体有最佳的再生率33%。成功构建了重组表达载体pUC18-hygB-LIP并转化至米曲霉H4中。在液态发酵条件下,脂肪酶活力最高的转化子的酶活力比出发菌株H4高10.16 U·mL-1。

论文目录

• 1 实验方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 试剂和溶液
•   1.3 重组表达载体的构建
•     1.3.1 米曲霉H4对潮霉素敏感度的验证
•     1.3.2 pUC18-hygB-LIP重组表达载体的构建
•   1.4 原生质体转化及转化子筛选
•     1.4.1 原生质体再生与转化
•       （1）原生质体再生。
•       （2）原生质体转化。
•     1.4.2 转化子筛选
•   1.5 脂肪酶的表达
•   1.6 对硝基苯酚法（p-NP）测定脂肪酶活力
•     1.6.1 酶活力定义
•     1.6.2 标准曲线的绘制
•     1.6.3 脂肪酶活力的测定
• 2 结果与讨论
•   2.1 米曲霉H4对潮霉素B和氯丙嗪敏感度的验证
•   2.2 pUC18-hygB-LIP重组表达载体的构建
•   2.3 载体pUC18-hygB-LIP的转化与转化子的筛选
•     2.3.1 原生质体酶解时间的优化
•     2.3.2 转化子筛选
•   2.4 脂肪酶活力的测定
•     2.4.1 标准曲线的绘制
•     2.4.2 液态发酵产酶活力的测定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李童,李燕萍

关键词: 米曲霉,异源表达,液态发酵,脂肪酶

来源: 南昌大学学报(理科版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学中德联合研究院,南昌大学食品学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(31260389)

分类号: TS262.4

DOI: 10.13764/j.cnki.ncdl.2019.03.008

页码: 246-250+256

总页数: 6

文件大小: 617K

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