基于转录组测序的冈田绕眼果蝇aoattacin基因筛选及在昆虫细胞中表达、抑菌活性检测

论文摘要

通过分析冈田绕眼果蝇转录组数据得到抗菌肽aoattacin基因,在昆虫细胞Sf9中表达并检测其抑菌活性。通过转录组分析得到抗菌肽aoattacin基因,全基因合成其序列,构建重组pFast-bac1-aoattacin载体,通过转染DH10Bac细胞获得重组杆状病毒,转染昆虫Sf9细胞,以获得P1代病毒和通过扩增获得P2代病毒,并检测基因在Sf9细胞里的表达。通过SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达情况,通过最小抑菌浓度测定表达产物的抑菌活性。结果表明通过筛选转录组数据得到一个高表达aoattacin基因,在昆虫细胞Sf9中成功表达,抑菌实验显示抗菌肽Aoattacin对受试革兰氏阳性及阴性菌等多种细菌具有抑制作用,或为一种新型广谱抗菌肽。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 冈田绕眼果蝇总RNA提取和反转录
•     1.2.2 抗菌肽aoattacin基因的筛选、分析、验证及合成
•     1.2.3 重组质粒pFast-bac1-aoattacin的构建及鉴定
•     1.2.4 重组Bacmid的构建及鉴定
•     1.2.5 aoattacin基因在Sf9细胞中表达及验证
•     1.2.6 Aoattacin的抑菌活性检测
• 2 结果
•   2.1 抗菌肽基因的筛选、分析及全基因合成
•   2.2 重组质粒pFast-bac1-aoattacin的构建及鉴定
•   2.3 重组Bacmid的构建及鉴定
•   2.4 Aoattacin蛋白的表达、纯化与分析
•   2.5 抑菌活性检测
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 蔡娟,刘流,王灵军,曹建平,郑明辉,刘晖

关键词: 冈田绕眼果蝇,转录组,抗菌肽,真核表达,抑菌活性

来源: 生物技术通报 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 遵义医科大学,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

基金: 国家自然科学基金项目(81560336,81760373),贵州省科技厅科技基金(黔科合基础[2016]1168,黔科合J字[2010]2160),遵义医学院博士启动基金(F-795),卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(WSBKFKT-201609)

分类号: Q78

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0157

页码: 118-124

总页数: 7

文件大小: 3317K

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