Islet-1诱导C3H10T1/2心肌样细胞分化中Akt参与干性维系的研究

论文摘要

第一部分Islet-1诱导C3H10T1/2心肌样分化过程Akt参与干性维持的作用研究目的:探究在Islet-1诱导的C3H10T1/2心肌样细胞分化过程中Akt与干性因子的表达调控是否相关。方法:在C3细胞中转染过表达Islet-1的慢病毒,构建心肌样细胞分化模型,通过反转录定量PCR（RT-qPCR）检测蛋白激酶（Akt）及干性因子Sox2,Nanog的基因表达;western blotting检测Akt及干性因子的蛋白表达;免疫荧光检测干性因子及Akt的定位改变。采用Akt激活剂SC79与抑制剂MK2206分别作用于C3细胞,western blotting检测p-Akt表达情况以摸索出药物最佳浓度;以两种药物的最佳浓度分别作用于C3细胞后,RT-qPCR检测干性因子基因表达,western blotting检测干性因子蛋白表达,免疫荧光检测干性因子定位改变。结果:转入Islet-1后C3发生了心肌样细胞分化,分化过程中Akt活性及入核量降低,但干性因子的基因表达、蛋白表达、细胞定位均未发生改变;摸索出的SC79最佳作用浓度为4ug/ml,MK2206最佳作用浓度为1umol/L。激活及抑制Akt后,干性因子的mRNA表达、蛋白表达及核定位均未产生改变。结论:在Islet-1诱导的C3心肌样细胞分化模型中,未发现Akt直接参与干性因子表达调控的证据,其间的发生机制有待进一步探究。第二部分刺五加苷诱导间充质干细胞成骨分化过程中Akt与干性维系的作用研究目的:探讨刺五加苷（Acanthopanax）诱导间充质干细胞（BMSCs）成骨分化过程中Akt是否通过干性调控而发挥作用。方法:提取SD大鼠的BMSCs,在培养第3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45,CD29,CD90;在经典成骨诱导培养基中加入刺五加苷使之浓度为1×10-8mol/L,称刺五加苷组。采用含刺五加苷组及经典成骨组的成骨诱导液作用于MSCs诱导培养12天,RT-q PCR检测成骨分化相关基因的基因水平,Western blotting检测p-Akt,Akt,Sox2,Nanog的蛋白表达水平;培养21天行矿化钙结节茜素红染色。结果:第3代BMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准;RT-q PCR检测结果显示,诱导12天后,刺五加苷组成骨分化相关基因BSP,OSX,OCN表达量高于不含刺五加苷的经典成骨组及阴性对照,P<0.05;RUNX表达量虽高于阴性对照组,却低于经典成骨组,P<0.05。茜素红染色结果显示刺五加苷组矿化钙结节多于经典成骨组,提示该浓度刺五加苷成骨诱导效果较经典成骨组更佳。Western blotting结果显示,成骨诱导后p-Akt显著增强,干性因子却无变化。提示Akt可能促进BMSCs的成骨分化,但该作用并不是依赖于调控干性因子的表达而实现。结论:刺五加苷能协同地塞米松促进BMSCs成骨分化,其作用可能与Akt通路活化有关,但其作用并不直接通过调控干性因子的表达而实现。

论文目录

• 英汉缩略语名词符号
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 Islet-1诱导C3H10T1/2心肌样细胞分化中Akt参与干性维持的研究
•   1 材料与方法
•   2 实验结果
•   3 讨论
•   参考文献
• 第二部分 刺五加苷诱导间充质干细胞成骨分化中Akt参与干性维系的研究..
•   1 材料与方法
•   2 实验结果
•   3 讨论
•   参考文献
• 全文总结
• 文献综述
•   参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的论文题目

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 黄月

导师: 朱静

关键词: 干性因子,刺五加苷,成骨分化

来源: 重庆医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 重庆医科大学

分类号: R329.2

总页数: 58

文件大小: 2700K

下载量: 22