导读:本文包含了人成骨蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,复性,细胞,磷灰石,磷酸酶,植物,毒理学。
人成骨蛋白论文文献综述
马敬[1]（2011）在《利用油体蛋白表达系统表达人成骨蛋白的研究》一文中研究指出人成骨蛋白-1(Human Osteogenic Protein 1, hOP-1),或称骨形成发生蛋白7(Bone Morphogenetic Protein 7, BMP7),是TGF-β超家族中的一员,具有诱导IOPC(inducible osteogenic precursor cells)类细胞向成骨细胞方向转化的蛋白质,具有广阔的临床应用前景。由于人骨源有限,直接从人骨中提取人成骨蛋白受到了限制,影响了临床应用。随着基因工程技术的发展,异源表达成骨蛋白成为可能。植物生物反应器已广泛应用于外源高经济附加值的药用蛋白、脂类及一些次生代谢产物等生物制剂的生产,其成本低,不仅能满足人们生产和生活的需要,而且可以拓宽植物的应用范围。利用植物油体表达系统表达人成骨蛋白有非常广泛的前景。植物种子中油体蛋白(oleosin)是一类镶嵌在油体表面的小分子碱性蛋白,在种子中高水平表达并大量积累,由于其脂溶性的特点,很容易将油体蛋白与种子中其他蛋白分开。而且当外源小分子量蛋白插入到油体蛋白的N端或C端后,不会影响到油体蛋白在植物油体上的定位及表达,而且外源蛋白本身也能高水平表达。在油料作物种子中利用油体蛋白做载体生产药用蛋白及其它有用物质,具有独特的优越性。花生作为我国最重要的油料作物之一,既可以榨油和深加工,又可以生食,更为重要的是油体蛋白在花生种子中高水平表达并大量积累。所以,在花生种子中利用油体蛋白表达人成骨蛋白将具有广阔的前景。本研究初步建立了花生油体蛋白表达体系表达人成骨蛋白的植物生物反应器体系,并且在转基因烟草种子中进行了表达,为在花生中转化及利用该体系大规模生产人成骨蛋白和其它外源蛋白奠定了基础。研究内容和结果如下:人成骨蛋白-1基因密码子的优化:根据植物中密码子表达的偏好性,将本实验室已经克隆得到的人成骨蛋白-1基因的cDNA序列通过软件分析进行优化后重新合成序列,为在植物中高效表达人成骨蛋白奠定了基础。人成骨蛋白-1的原核表达:首先将人成骨蛋白-1基因的全长cDNA序列(420 bp),连接到原核表达载体PET28a上,在大肠杆菌中进行原核表达,实验结果显示人成骨蛋白-1能够正确表达,融合蛋白分子量约为15.7 KD,与预期大小基本一致。原核表达的蛋白可用于抗体制备及后期成骨蛋白检测研究。花生油体蛋白基因和启动子的克隆:根据NCBI中花生油体蛋白的基因序列,设计引物,克隆得到了花生油体蛋白的全长基因及其启动子。植物表达载体的构建和优化:将人成骨蛋白基因连接到花生油体蛋白基因的3’端,在油体蛋白基因和成骨蛋白基因间插入肠肽酶基因序列,便于后期重组蛋白从油体蛋白上的分离。构建由花生油体蛋白基因启动子驱动的“花生油体蛋白-肠肽酶-成骨蛋白”的融合植物表达载体。本研究还将pCAMBIA1301、pCAMBIA1302两个载体进行改造优化,将两个载体中的潮霉素(Hyg)抗性改为卡那(Kan)抗性,以降低研究及开发成本。遗传转化和表达验证:利用叶盘转化法转化烟草,通过RT-PCR的方法检测了人成骨蛋白基因在转基因烟草中的表达情况。结果表明在叶、花中没有检测到融合蛋白基因的表达,在种子中高水平表达。为了进一步验证结果,可以对pCAMBIA1301-oleosin-BMP-7-GUS和pCAMBIA1302-oleosin-BMP-7-GFP侵染后得到的转基因阳性植株进行GUS染色显示和GFP亚细胞定位来反映融合蛋白的表达情况。(本文来源于《山东师范大学》期刊2011-05-20）
赵玉驰,王大平,赖苑威,熊建义,王力刚[2]（2011）在《纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶复合重组人成骨蛋白1修复骨缺损》一文中研究指出背景:纳米级的羟基磷灰石纤维蛋白凝胶材料与人体内组织成分更为相似,具有良好的生物与力学性能,但缺乏骨诱导作用。目的:观察纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨的骨缺损修复能力。方法:制备新西兰大白兔单侧桡骨缺损模型后,以数字表法随机分为3组,分别植入不同材料行骨缺损修复:纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组、纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组、空白对照组(未植入任何材料)。术后4,8,12周行大体标本观察、X射线、扫描电镜、放射性核素骨扫描及生物力学测试,比较各组材料修复骨缺损的能力。结果与结论:术后4,8,12周,纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组X射线评分、成骨效果、放射性核素聚集强度、生物力学强度均高于纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组(P < 0.05)。空白对照组骨缺损区无骨性连接,骨端硬化,骨缺损未能修复。说明纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨具有良好的骨缺损修复能力,有望成为一种理想的骨缺损修复材料。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2011年08期）
赵传志,苏磊,李爱芹,夏晗,李长生[3]（2009）在《油体蛋白与人成骨蛋白-1基因融合植物表达载体的构建及融合蛋白性质预测》一文中研究指出克隆大豆油体蛋白特异启动子及油体蛋白基因的全长序列,利用连接PCR的方法,通过一个肠肽酶位点将人成骨蛋白成熟肽编码序列连接到油体蛋白基因3’端并克隆到表达载体pCAMB IA1302中,构建"油体蛋白-肠肽酶-人成骨蛋白"植物表达载体。通过酶切、PCR和测序鉴定,证明表达载体构建成功,将其命名为pCAM-oleo-Bmp7。通过蛋白分析软件DNAstar、S ignalP3.0和ProtComp v8.0等软件对重组蛋白的理化性质、二级结构、信号肽和细胞定位进行了分析和预测,证明融合蛋白很好的保留了原来两个蛋白的二级结构和理化性质。(本文来源于《西南农业学报》期刊2009年05期）
王素红,韩金祥,王世立,张翠,葛鲁娜[4]（2008）在《可溶性重组人成骨蛋白-1的制备》一文中研究指出目的制备可溶性重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),并尝试制备注射制剂。方法rhOP-1工程菌经发酵表达,收集菌体,提取包涵体,用SP-FF阳离子层析柱纯化。取纯度达95%以上的rhOP-1蛋白,透析复性,加入L-精氨酸作为复性助溶剂,制备成冻干粉末,以不加助溶剂的rhOP-1为对照。将制备的冻干粉末复溶后,观察rhOP-1溶解性,并检测其活性。结果复性液中加入L-精氨酸的复性rhOP-1蛋白浓度为0.5mg/ml,回收率可达60%,冻干粉末复溶后,溶解性及rhOP-1活性良好。结论用此复性方法制备的rhOP-1溶液作为注射剂,有较好的应用前景。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2008年07期）
田海泉,李放,马舟涌,陈晓斌,王晓伟[5]（2008）在《壳聚糖支架复合重组人成骨蛋白1对体外培养兔髓核和纤维环细胞蛋白聚糖合成的影响》一文中研究指出背景:成骨蛋白1有效刺激软骨细胞蛋白聚糖和胶原蛋白合成已被证实,椎间盘内注射成骨蛋白1可增加椎间盘高度也在动物模型中得到证实。目的:体外评价重组人成骨蛋白1对培养于壳聚糖凝胶中的兔椎间盘细胞增殖和蛋白聚糖合成的作用。设计、时间及地点:成组设计,实验于2007-08/2008-02在北京军区总医院骨科实验室完成。材料:清洁级4月龄日本大耳兔5只。重组人成骨蛋白1为Sigma分装。医用级壳聚糖,脱乙酰度95.11%,黏度155mPa.s,Mr870000,由北京纵横洋洲医药生物科技有限公司提供。方法:无菌条件下取日本大耳兔椎间盘10个,分离其髓核和纤维环细胞并接种于自制壳聚糖凝胶支架,在培养液中加入重组人成骨蛋白1,并分为3组:对照组(无重组人成骨蛋白1)、100μg/L重组人成骨蛋白1组、200μg/L重组人成骨蛋白1组。主要观察指标:培养7,14,21d时对培养物DNA含量、蛋白聚糖合成量(35SO42-摄入量、硫酸盐黏多糖含量)进行检测。结果:100,200μg/L重组人成骨蛋白1组的DNA含量没有减少,对照组DNA含量逐渐下降。100,200μg/L重组人成骨蛋白1组蛋白聚糖合成量明显高于对照组,200μg/L重组人成骨蛋白1组升高更为显着。100,200μg/L重组人成骨蛋白1组在3个时间点均呈现上升趋势,培养14d和21d的差异有显着性意义(P<0.001)。结论:重组人成骨蛋白1可有效促进体外培养的兔髓核和纤维环细胞增殖及蛋白聚糖合成。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2008年27期）
李俊玲,王世立,韩金祥,王国栋,赵甜娜[6]（2007）在《重组人成骨蛋白-1复性条件的优化》一文中研究指出目的优化重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性条件。方法将表达rhOP-1的大肠杆菌菌体在冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8mol/L尿素溶解,纯化后进行梯度透析复性。利用TotalLab软件分析目的蛋白二聚体的含量,用体内法和体外法测定其生物学活性。结果经纯化后,目的蛋白纯度达97%以上。最佳复性条件为4℃,pH9.0,蛋白浓度为0.4～0.8mg/ml,尿素浓度为2mol/L,L-Arg浓度为0.4mol/L;目的蛋白复性率达75%以上,复性后蛋白具有较高的生物学活性。结论已确定了rhOP-1包涵体梯度透析复性的最佳条件。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2007年06期）
赵甜娜,韩金祥,王世立,贾金秋,张维东[7]（2006）在《重组人成骨蛋白-1骨修复材料的毒性研究》一文中研究指出目的探讨重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)明胶海绵骨修复材料的体内毒性反应,为其临床应用奠定基础。方法选用昆明种小鼠80只,雌雄各半。随机分成对照组和观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组20只,均予乙醚麻醉,无菌条件下将rhOP-1/明胶海绵复合物置于观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠股部肌间隙,剂量分别为3、10、25 m g,术后不用抗生素。正常饲养2、4周时观察各组血液、血生化指标改变及主要脏器的组织形态和脏器系数变化。结果各观察组术后3 d活动力差,食欲减少,7 d后恢复。观察组与对照组各血液学指标结果无统计学差异;血生化指标中除蛋白含量、ALT、A ST观察组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)外,其余指标未见异常;4周时两组血液、血生化指标及组织学形态、脏器系数差异无统计学意义(P均>0.05)。结论rhOP-1明胶海绵骨修复材料体内使用无毒、安全、可靠。(本文来源于《山东医药》期刊2006年29期）
赵甜娜,韩金祥,王世立,吴坚美[8]（2006）在《明胶海绵复合重组人成骨蛋白-1的骨修复材料免疫原性及肌肉刺激性实验研究》一文中研究指出目的考察以明胶海绵为载体的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)骨修复材料的免疫原性及肌肉刺激性。方法以明胶海绵为载体制备rhOP-1骨修复材料,间接ELISA方法观察该骨修复材料植入小鼠体内的免疫原性反应,病理切片观察其对周围肌肉的影响及形态变化。结果ELISA结果表明,此法制备的以明胶海绵为载体的rhOP-1骨修复材料未引起小鼠的特异性抗体产生。植入部位肌肉虽出现炎细胞浸润现象,但炎症反应呈可逆性,未发现肌肉组织的坏死,且组织钙化现象明显。结论明胶海绵复合rhOP-1的骨修复材料在免疫原性和肌肉刺激性方面安全可靠。(本文来源于《中国生化药物杂志》期刊2006年04期）
李俊玲,王世立,韩金祥,王国栋,孙杰[9]（2006）在《重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的复性》一文中研究指出目的优化大肠杆菌表达的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性的条件。方法将表达rhOP- 1的E．coli菌体冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8 mol／L尿素溶解、纯化后进行梯度透析复性并利用TotolLab 软件分析目的蛋白二聚体的含量,测定其生物学活性。结果经纯化后,纯度达97％以上的rhOP-1包涵体目的蛋白可以部分复性,复性后蛋白具有较高的生物学活性。结论确定了rhOP-1包涵体体外梯度透析复性的最佳条件。(本文来源于《山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集》期刊2006-07-01）
王国栋,王世立,韩金祥,孙杰,车婧[10]（2006）在《重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究》一文中研究指出目的获得高纯度的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法表达rhOP-1工程菌经发酵后,裂菌、提取包涵体,层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良M TT法检测rhOP-1对N IH 3T 3细胞增殖和对硝基苯酚法(PNPP)检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性。结果经纯化的rhOP-1纯度可达98%。体外rhOP-1浓度在0.06~6μg/m l可明显促进细胞生长和ALP活性;体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后,可明显提高体内钙含量,且成骨趋势明显。结论原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性。(本文来源于《山东医药》期刊2006年14期）
人成骨蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:纳米级的羟基磷灰石纤维蛋白凝胶材料与人体内组织成分更为相似,具有良好的生物与力学性能,但缺乏骨诱导作用。目的:观察纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨的骨缺损修复能力。方法:制备新西兰大白兔单侧桡骨缺损模型后,以数字表法随机分为3组,分别植入不同材料行骨缺损修复:纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组、纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组、空白对照组(未植入任何材料)。术后4,8,12周行大体标本观察、X射线、扫描电镜、放射性核素骨扫描及生物力学测试,比较各组材料修复骨缺损的能力。结果与结论:术后4,8,12周,纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组X射线评分、成骨效果、放射性核素聚集强度、生物力学强度均高于纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组(P < 0.05)。空白对照组骨缺损区无骨性连接,骨端硬化,骨缺损未能修复。说明纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨具有良好的骨缺损修复能力,有望成为一种理想的骨缺损修复材料。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人成骨蛋白论文参考文献
[1].马敬.利用油体蛋白表达系统表达人成骨蛋白的研究[D].山东师范大学.2011
[2].赵玉驰,王大平,赖苑威,熊建义,王力刚.纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶复合重组人成骨蛋白1修复骨缺损[J].中国组织工程研究与临床康复.2011
[3].赵传志,苏磊,李爱芹,夏晗,李长生.油体蛋白与人成骨蛋白-1基因融合植物表达载体的构建及融合蛋白性质预测[J].西南农业学报.2009
[4].王素红,韩金祥,王世立,张翠,葛鲁娜.可溶性重组人成骨蛋白-1的制备[J].中国生物制品学杂志.2008
[5].田海泉,李放,马舟涌,陈晓斌,王晓伟.壳聚糖支架复合重组人成骨蛋白1对体外培养兔髓核和纤维环细胞蛋白聚糖合成的影响[J].中国组织工程研究与临床康复.2008
[6].李俊玲,王世立,韩金祥,王国栋,赵甜娜.重组人成骨蛋白-1复性条件的优化[J].中国生物制品学杂志.2007
[7].赵甜娜,韩金祥,王世立,贾金秋,张维东.重组人成骨蛋白-1骨修复材料的毒性研究[J].山东医药.2006
[8].赵甜娜,韩金祥,王世立,吴坚美.明胶海绵复合重组人成骨蛋白-1的骨修复材料免疫原性及肌肉刺激性实验研究[J].中国生化药物杂志.2006
[9].李俊玲,王世立,韩金祥,王国栋,孙杰.重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的复性[C].山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集.2006
[10].王国栋,王世立,韩金祥,孙杰,车婧.重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究[J].山东医药.2006
论文知识图
