鸟苷二磷酸杂化磷酸钙基因传递系统的制备与细胞学评价

论文摘要

目的采用共沉淀法制备磷酸钙基因给药系统（CaP/pDNA）,考察工艺因素和处方因素对CaP/pDNA制备的影响。在此基础上,加入鸟苷二磷酸（GDP）和核定位信号（NLS）制备GDP杂化的磷酸钙基因传递系统Ca（P-GDP）/pDNA/NLS,考察GDP的加入对该系统制剂学性质以及对基因的体外转染的影响。方法通过共沉淀法,以无水CaCl2为钙源,Na2HPO4·12 H2O为磷源制备CaP/pDNA纳米粒,考察Na2HPO4浓度,搅拌速度和搅拌时间对其粒径和包封率的影响,筛选最佳工艺条件和处方组成。以Na2HPO4·12 H2O和GDP为共同磷源,制备Ca（P-GDP）/pDNA/NLS纳米粒。通过体外细胞毒实验和细胞转染实验对制剂加以优化,最终获得具有最佳制剂学性质和体外转染效果的GDP杂化的新型磷酸钙基因传递系统。结果 CaP/pDNA优化处方为Na2HPO4浓度为4 mmol·L-1,搅拌速度为200 r·min-1,反应时间为15 min。CaP/pDNA纳米粒的粒径为160.7 nm,包封率为81.2%;制备的Ca（P-GDP）/pDNA/NLS纳米粒在GDP浓度为20 mmol·L-1时转染效果最好,其粒径为182.9 nm,包封率为84.6%。与参比制剂相比,Ca（P-GDP）/pDNA/NLS纳米粒具有更高的体外转染效率。结论 GDP可以促进含有NLS的磷酸钙基因传递系统的基因的表达效率。

论文目录

• 1 仪器与材料
• 2 方法
•   2.1 共沉淀法制备CaP/pDNA
•   2.2 CaP/pDNA的单因素考察和处方优化
•   2.3 CaP/pDNA纳米粒的制剂学表征
•   2.4 pDNA/NLS复合物的制备
•   2.5 共沉淀法制备Ca （P-GDP） /pDNA/NLS纳米粒
•   2.6 不同GDP浓度对荧光蛋白表达的定性影响
•   2.7 不同GDP浓度对荧光蛋白表达的定量影响
•   2.8 不同的基因传递系统的制剂学性质以及转染效率的比较
•   2.9 体外细胞毒的研究
• 3 结果
•   3.1 共沉淀法制备CaP/pDNA纳米粒的处方优化
•     3.1.1 Na2HPO4浓度对CaP/pDNA纳米粒粒径和包封率的影响
•     3.1.2 搅拌速度的影响
•     3.1.3 搅拌时间的影响
•   3.2 处方优化的CaP/pDNA纳米粒的制剂学表征
•   3.3 GDP浓度对荧光蛋白表达的影响
•   3.4 优化的Ca （P-GDP） /pDNA/NLS纳米粒的制剂学表征
•   3.5 CaP/pDNA和Ca （P-GDP） /pDNA/NLS纳米粒体外细胞毒
•   3.6 CaP/pDNA和Ca （P-GDP） /pDNA/NLS纳米粒体外转染与表达的比较
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张熹睿,赵明,陈大为,胡海洋

关键词: 基因传递系统,磷酸钙纳米粒,鸟苷二磷酸,核定位信号,共沉淀法

来源: 沈阳药科大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,药学

单位: 沈阳药科大学药学院

分类号: R943

DOI: 10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2019.06.002

页码: 474-481

总页数: 8

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