从江香猪源干扰素α2、β在生菜中的瞬时表达及其对PRRSV复制抑制作用的研究

论文摘要

为在生菜中瞬时表达从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β和IFN-β,检测其抗猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）的活性,本实验采用从江香猪源干扰素特异引物分别从p UCm-CJpoIFN-α2、p UCm-CJpoIFN-α2β、p UCm-CJpoIFN-β质粒中扩增IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β基因序列,分别克隆至植物表达载体p BI121中,构建含不同干扰素的重组质粒。将各质粒分别转化根癌农杆菌LBA4404,采用真空渗透法将携带重组质粒的根癌农杆菌感染生菜,经用GUS染色和ELISA方法检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用q PCR方法和细胞病变抑制试验检测生菜中表达的从江香猪源干扰素蛋白抗PRRSV的活性。结果显示:本实验构建了含从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β的植物表达载体PBI121-IFN-α2、PBI121-IFN-α2β、PBI121-IFN-β;GUS染色和ELISA检测结果显示从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中实现了瞬时表达;q PCR检测结果显示生菜中瞬时表达的从江香猪源干扰素蛋白在Marc145细胞中对PRRSV的复制有明显抑制作用;生菜中表达的从江香猪源IFN-α2、IFN-β、IFN-α2β分别经47、49、47稀释在Marc145细胞中仍然能够抑制100 TCID50PRRSV的致细胞病变作用。本实验实现从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中的瞬时表达且表达蛋白具有较强抑制PRRSV的复制作用,本研究为从江香猪源干扰素抗PRRSV新复合型药物蛋白的开发利用提供参考依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 引物的设计与合成
•   1.3 含从江香猪源各干扰素植物表达载体的构建与鉴定
•   1.4 从江香猪源干扰素浸染液的制备
•   1.5 根癌农杆菌介导从江香猪源干扰素的真空渗透瞬时表达
•   1.6 从江香猪源干扰素在生菜中瞬时表达的检测
•   1.7 生菜中瞬时表达的从江香猪干扰素蛋白对PRRSV抑制作用的检测
• 2 结果
•   2.1 含从江香猪源各IFN植物表达载体的构建与鉴定结果
•   2.2 从江香猪源IFN在生菜中瞬时表达的检测结果
•   2.3 从江香猪源干扰素生菜中瞬时表达蛋白的ELISA检测结果
•   2.4 从江香猪源干扰素生菜中瞬时表达蛋白对PRRSV抑制作用检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,徐丽,陈广,张喜懿,龚新勇,陈彦希,文明

关键词: 从江香猪源干扰素,生菜,瞬时表达,猪繁殖与呼吸综合征病毒

来源: 中国预防兽医学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 贵州大学动物科学学院/预防兽医实验室,贵州省动物生物制品工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金(31460668),贵州省科学技术基金(黔科合J字[2015]2046),贵州省高层次创新型人才培养(黔财教[2017]),贵州大学博士基金([2013]12),贵州省科技平台及人才团队计划(黔科合平台人才[2018]5253),贵州省研究生工作站计划项目(GZZ2017002)

分类号: S852.651

页码: 744-749

总页数: 6

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