导读:本文包含了纤毛蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:纤毛,蛋白,杆菌,基因,白细胞,基因工程,疫苗。
纤毛蛋白基因论文文献综述
连海峰,吴小翎[1]（2010）在《神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin1,NRP1)基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法构建NRP1基因特异性shRNA表达质粒,经脂质体介导转染入人胃腺癌SGC7901细胞。采用Western blot法检测细胞中NRP1蛋白的表达水平,应用流式细胞术和Annexin-V-FITC/PI法检测细胞的增殖水平和凋亡率。结果经酶切及测序鉴定证明,shRNA-NRP1质粒构建正确,转染SGC7901细胞48h后,能有效抑制NRP1蛋白的表达,G0/G1期细胞百分比显着升高,S期细胞显着减少,细胞凋亡率增加。结论 shRNA-NRP1质粒能有效抑制胃腺癌SGC7901细胞株NRP1蛋白的表达,细胞周期阻滞在G0/G1期,从而降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2010年11期）
刘艳环,郑皓,苗利光,王克坚[2]（2004）在《腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定》一文中研究指出将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。(本文来源于《特产研究》期刊2004年04期）
刘艳环,苗利光,王克坚,刘波,李理[3]（2004）在《腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达》一文中研究指出用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 ,证明该融合蛋白具有特异性(本文来源于《动物医学进展》期刊2004年02期）
张洪涛,陈立志,苗立光,刘晓颖,王克坚[4]（2003）在《腐蹄病A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析》一文中研究指出以腐蹄病A型节瘤拟杆菌染色体DNA为模板,根据设计的上、下游引物进行PCR反应,扩增出了大小约0.78kb的基因片段,用T_4DNA连接酶将PCR产物与pGEM-T-Easy载体连接,构建了重组质粒。并以EcoRV和SalI双酶切重组质粒鉴定目的基因的插入方向。经序列测定,克隆的目的基因片段为Pili基因。(本文来源于《特产研究》期刊2003年03期）
张洪涛[5]（2003）在《鹿腐蹄病A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL－2融合基因表达载体的构建与表达》一文中研究指出A型节瘤拟杆菌是引起鹿、牛、羊等反刍动物腐蹄病的主要菌型之一。菌体纤毛蛋白是其主要保护性抗原。白细胞介素2(IL-2)在特异性免疫应答中起主要作用，能促进T、B淋巴细胞的增殖和分化。已有很多实验证明IL-2作为佐剂能提高体液免疫和细胞介导的免疫反应。本项研究构建了A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白和绵羊IL-2融合基因表达载体；以绿脓杆菌为宿主菌，表达了融合基因蛋白，并可在培养上清中提取；为观察绵羊IL-2在融合基因蛋白中对免疫反应的影响，以及研制生产简便、成本低的A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白与IL-2融合基因疫苗打下了基础。研究内容如下： 用革兰氏阴性杆菌DNA快速提取法提取A型节瘤拟杆菌染色体DNA，通过PCR技术，扩增出了0.78kb的纤毛蛋白基因。PCR扩增片段与T-Easy载体连接构建了重组TE质粒，并通过EcoRV/SalⅠ双酶切，筛选出正向插入质粒(TE-Pili)进行序列测定。结果正确。 将本实验室构建的pBluescript-IL-2质粒用BamHI/EcoRⅤ双酶切，将切出的0.5kb的IL-2基因片段回收，补平。在TE-Pili载体末端的EcoRⅤ位点，插入IL-2基因，并通过EcoRⅠ酶切鉴定出正向插入质粒。大量扩增融合基因(Pili-IL-2)质粒，回收SacⅡ//SalⅠ酶切出的1.28kb Pilin-IL-2基因片段，补平，插入到HpaⅠ酶切的PPL-λ质粒中，分别用SalⅠ/Xboal，AatⅡ/Xbal双酶切，鉴定出正向插入质粒。扩增此质粒，回收BamHⅠ切出的2.5kb的基因片段，与PME290(BamHⅠ酶切后去磷酸化)载体连接。构建出融合基因表达载体，转化绿脓杆菌，获得了A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白与IL-2融合基因工程菌株。 将融合基因工程菌株在营养肉汤中培养，离心后上清用0.1M MgCl_2沉淀，离心，提取表达产物。经SDS-PAGE电泳证明表达产物为纤毛蛋白与IL-2的融合蛋白。对流免疫电泳和Western-blot实验证明融合蛋白具有纤毛蛋白特异性。利用提取的表达产物进行家兔免疫实验，结果表明该产物具有免疫原性。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2003-06-01）
刘艳环,苗利光,陈立志,刘晓颖,张洪涛[6]（2003）在《腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊的免疫试验》一文中研究指出将转化C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达质粒的工程菌PAK/2pfsC在含羧苄青霉素的营养肉汤中表达,用MgCl2法在培养物上清中提取表达产物(纤毛蛋白)。将表达的纤毛蛋白用弗氏完全佐剂乳化,制成疫苗,疫苗免疫4只健康绵羊,定期采血,用对流免疫电泳和K凝集试验检测实验绵羊的体液免疫应答及抗体水平。结果发现,免疫后5d即可产生相应抗体,21d后抗体效价达到1∶4000以上。试验表明,腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊具有较好的免疫应答和免疫保护性。(本文来源于《特产研究》期刊2003年01期）
苗利光,王克坚,陈立志,刘晓颖,徐敏[7]（2002）在《腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达》一文中研究指出用 PCR从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌扩增出具有免疫保护性抗原 0 .85 kb纤毛蛋白基因 (pili基因 ) ,并构建了该基因的表达载体。转化宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 pili基因的表达。培养 18～ 2 4h后 ,收集培养液上清 ,加入 0 .1mol/L Mg Cl2 ,离心提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 C型节瘤拟杆菌抗血清与提取的纤毛蛋白进行对流免疫电泳试验 ,结果表达的重组纤毛蛋白有特异性 ;用 SDS- PAGE和 Western- blot证明表达的蛋白是 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2002年06期）
苗利光,刘艳环,陈立志,刘晓颖,张洪涛[8]（2002）在《腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对家兔的免疫试验》一文中研究指出将转化 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达子粒的工程菌 PAK/ 2 pfs C在含羧苄青霉素营养肉汤培养基中培养 ,用 Mg Cl2 法在培养物上清中提取表达产物 (纤毛蛋白 )。将表达的纤毛蛋白产物用弗氏完全佐剂乳化 ,制成疫苗。用疫苗免疫 3只健康家兔 ,2 1 d后再次接种 ;定期采血 ,用对流免疫电泳和 K凝集实验检测试验家兔的体液免疫应答及抗体水平。结果发现 ,免疫 7d即可产生相应抗体 ,2 1 d后抗体效价达到 80 0 0×以上 ,而且高滴度抗体可维持 6个月以上。试验表明 ,腐蹄病 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗具有较好的免疫应答和免疫原性(本文来源于《动物医学进展》期刊2002年03期）
王克坚,Om,Dhungyel,余兴龙,冯书章,赵宝华[9]（2002）在《腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因表达载体的构建及表达》一文中研究指出根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因 (Pili基因 )序列 ,在 Pili基因 6 19bp Ehe 酶切位点上插入绵羊白细胞介素 - 2基因 (Ovi IL- 2基因 ) ,构建了 Pili基因与 Ovi IL- 2基因的融合基因表达载体。先用 Eco R 、Bam H 双酶切p Bluescript- Ovi IL - 2重组质粒 ,获得两端具有 Eco R 、Bam H 位点的 Ovi IL - 2基因片段 ,用 Klenow补平后 ,与经Ehe 酶切后的重组质粒 PME2 90 - Pili进行平端连接 ;转化 JM10 5感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,分别用 Bam H 、Eco R 、Xba 、Bgl 、Pvu 等进行酶切鉴定。然后将阳性重组质粒转染 BL - 2 1表达宿主感受态细胞 ,用 0 .1m ol/ L Mg Cl2沉淀法和超声波裂解法提取 BL- 2 1表达 Pili基因与 Ovi IL- 2基因融合基因表达蛋白。对流免疫电泳对重组融合蛋白的特异性分析证明 ,融合蛋白主要在宿主菌体中表达 ;SDS- PAGE电泳结果表明 ,重组融合蛋白分子大小约为 330 0 0 ,表达产物的量约占菌体的 5 .49%。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2002年02期）
苗利光,王克坚,刘艳环,陈立志,刘晓颖[10]（2002）在《腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析》一文中研究指出提取C型节瘤拟杆菌染色体DNA。用PCR技术从腐蹄病C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,将PCR产物pili基因克隆于TE载体 ,在含X - gal和IPTG的AmpLB平板上 ,挑选白色单一菌落进行质粒的筛选 ,用EcoR1酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳 ,出现一条 0 .85kb的条带 ,从而筛选出TE - pili重组质粒。对 pili基因进行序列测定 ,结果与国外报道的 pili基因序列一致。(本文来源于《特产研究》期刊2002年01期）
纤毛蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纤毛蛋白基因论文参考文献
[1].连海峰,吴小翎.神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响[J].中国生物制品学杂志.2010
[2].刘艳环,郑皓,苗利光,王克坚.腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定[J].特产研究.2004
[3].刘艳环,苗利光,王克坚,刘波,李理.腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达[J].动物医学进展.2004
[4].张洪涛,陈立志,苗立光,刘晓颖,王克坚.腐蹄病A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析[J].特产研究.2003
[5].张洪涛.鹿腐蹄病A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL－2融合基因表达载体的构建与表达[D].中国农业科学院.2003
[6].刘艳环,苗利光,陈立志,刘晓颖,张洪涛.腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊的免疫试验[J].特产研究.2003
[7].苗利光,王克坚,陈立志,刘晓颖,徐敏.腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达[J].中国兽医学报.2002
[8].苗利光,刘艳环,陈立志,刘晓颖,张洪涛.腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对家兔的免疫试验[J].动物医学进展.2002
[9].王克坚,Om,Dhungyel,余兴龙,冯书章,赵宝华.腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因表达载体的构建及表达[J].中国兽医学报.2002
[10].苗利光,王克坚,刘艳环,陈立志,刘晓颖.腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析[J].特产研究.2002
论文知识图
