导读:本文包含了原位杂交方法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:原位,技术,荧光,病毒,基因,层析,综合征。
原位杂交方法论文文献综述
焦哲,梁继翔,严治山,宋彦民,刘晓丽[1]（2019）在《猪萨佩罗病毒原位杂交检测方法的建立》一文中研究指出【研究目的】猪萨佩罗病毒(Porcine Sapelovirus,PSV)是小RNA病毒科萨佩罗病毒属病毒,主要通过粪—口传播,引起腹泻、肺炎、繁殖障碍等多系统综合症,广泛存在于国内外规模化养猪场。本研究建立了一种猪萨佩罗病毒的原位杂交检测方法,为猪萨佩罗病毒在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸分布及致病机理研究奠定基础。【材料方法】根据Genbank中PSV的基因组序列,利用DNAstar软件设计病毒5’UTR基因特异性引物:F:5’-ACACTCATTTCCCCCCTCCA-3’,R:5’-CGCCGAAGCGCGTCGCTAAC-3’,扩增长度为200bp。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
李亚楠,白昌明,刘金兰,辛鲁生,李晨[2]（2019）在《牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)间接原位杂交PCR检测方法的建立与初步应用》一文中研究指出为建立实现牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在贝类宿主组织中的精确定位方法,基于原位杂交PCR (ISPCR)技术建立了OsHV-1的间接原位杂交PCR (indirect ISPCR)检测方法,并利用该方法对OsHV-1在魁蚶主要器官的分布情况进行了检测和分析。首先选择适合原位杂交PCR的引物,在载玻片上实现对原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,然后与使用相同引物制作的地高辛标记核酸探针进行原位杂交,最后通过免疫酶标技术显示样本内OsHV-1的组织分布。为了达到最佳检测效果,对间接ISPCR的扩增循环数以及组织消化的蛋白酶K浓度进行优化。结果显示,最适PCR扩增循环数为20,蛋白酶K浓度为20μg/mL。利用经优化的间接ISPCR检测方法,对OsHV-1在魁蚶外套膜、鳃、肝胰腺、斧足和闭壳肌5个样本中的组织分布情况和亲嗜性进行检测和分析。病毒阳性信号主要分布于魁蚶外套膜结缔组织中浸润的血细胞和成纤维细胞、肝胰腺和鳃浸润的血细胞、斧足和闭壳肌中坏死肌肉细胞的细胞核中。本研究建立的间接ISPCR检测方法具有灵敏、特异和精确定位的优点,通过组织切片上显示的病毒核酸阳性信号,能判别OsHV-1在不同组织部位的分布特点和受感染的细胞类型;适用于OsHV-1感染的确诊、病毒对不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究。(本文来源于《水产学报》期刊2019年03期）
马泽林[3]（2018）在《RNAscope原位杂交技术检测PRRSV方法的建立及初步应用》一文中研究指出RNAscope原位杂交(RNAscope in situ hybridization,简称RNAscope~?)是一种新型原位杂交技术,其原理为碱基互补配对原则,结合信号级联放大技术和背景抑制策略使得该技术在实验室检测中具有一定优势。本实验利用RNAscope~?成功检测到感染动物组织切片中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),并对其特异性进行检测,结果显示,该技术在PRRSV检测中具有较高特异性。将RNAscope~?、原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)和免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)进行比较时,在连续切片上分别使用叁种技术检测PRRSV,定量分析阳性结果表明,RNAscope~?具有更高的敏感性。图像分析结果显示,在肺脏中,RNAscope~?与ISH阳性信号的位置与数量基本一致,然而IHC结果显示PRRSV阳性信号明显少于前两者。在胸腺组织中,RNAscope~?阳性信号在皮质区大量出现;ISH检测中,阳性信号在皮质区局部出现;而IHC结果中,胸腺皮质区PRRSV阳性信号较少。在淋巴结组织中,叁种技术检测PRRSV呈现的阳性信号出现的位置一致,但是RNAscope~?信号数量最多,IHC检测结果次之,ISH阳性信号少于前两者。初步数据统计结果显示,RNAscope~?的敏感性显着高于ISH和IHC。为扩展RNAscope~?和IHC技术在兽医学领域的应用范围,本研究以PRRSV感染的组织石蜡切片为样本,建立了RNAscope~?与IHC双重染色技术。该技术结合RNAscope~?独特探针与IHC特异性抗原两大优势,实现了在同一切片上核酸与蛋白的双重检测。在肺脏及淋巴结中,利用RNAscope~?检测PRRSV结合IHC检测巨噬细胞,结果显示RNAscope~?与IHC均呈现出较好的特异性和敏感性。PRRSV感染宿主后,会引起细胞凋亡,基于此在组织切片上应用RNAscope~?检测宿主凋亡相关调节基因Bid和Bcl-xl结合IHC检测PRRSV双重染色,结果可以发现PRRSV感染组织中的Bid基因表达水平有上调趋势,Bcl-xl基因表达水平有下调趋势,表明该技术在检测内源性基因过程中也有良好表现。综上,本研究成功建立了RNAscope~?与IHC双重染色技术。本研究应用RNAscope~?技术成功检测到组织切片中的PRRSV核酸,同时证明该技术操作简便,并具有高度的特异性、敏感性和重复性。RNAscope~?与IHC双重染色结果证实该技术不仅在病毒检测中具有高敏感性,在内源基因表达及信号转导等基础研究中也有广泛的应用前景。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-06-01）
刘伟,周小鸽,滕孝静,毕阔,王照情[4]（2018）在《原位荧光杂交检测在骨髓活检切片中的方法建立及优化》一文中研究指出目的建立及优化骨髓活检石蜡切片原位荧光杂交(FISH)检测流程。方法建立和优化骨髓活检石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在20例骨髓活检组织,其中5例诊断为套细胞淋巴瘤(MCL),应用FISH检测IGH/CCND1探针。结果建立骨髓活检石蜡切片的FISH检测步骤和实验条件,5例确诊MCL骨髓活检石蜡切片可检测到IGH/CCND1融合信号。证明本方法的可行性。结论骨髓活检石蜡切片FISH检测可以获得信号清晰、核形态较好、背景清晰的FISH染色结果,可以满足临床应用要求。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2018年06期）
李佳嘉,徐国祥,刘银华,浦春[5]（2018）在《两种不同预处理方法对HER2基因荧光原位杂交效果的影响》一文中研究指出目的探讨高温常压纯水法与p H9.0的乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)高温高压法对FISH检测乳腺癌HER2基因扩增表达结果的影响。方法选取皖南医学院弋矶山医院病理科2013年7月至2017年6月检测的40例浸润性乳腺癌标本,用高温常压纯水法(组一)与p H9.0的EDTA高温高压法(组二)进行FISH检测乳腺癌HER2基因扩增情况,并观察两组结果差异。结果荧光显微镜下观察,组一探针定位准确,红绿信号强度适中,亮度较强,背景清晰,视野干净易计数;组二探针信号定位不佳,锐利度明显下降,视野不干净。组一基因扩增阳性率显着高于组二(P<0.05),差异有统计学意义。结论高温常压纯水法在FISH检测乳腺癌HER2基因中可得到更准确且稳定的结果。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年23期）
崔蒙蒙,李江南,王刚,何希君,翁长江[6]（2018）在《RNAscope原位杂交技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA方法的建立》一文中研究指出为了直观、高效、特异性地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞和组织中PRRSV RNA,本研究根据HP-PRRSV Hu N4株ORF7基因序列设计8对28 bp~36 bp双"Z"结构的寡核苷酸探针(PRRSV-Nprobes),建立了一种新的PRRSV RNA原位杂交检测的方法。该方法能特异性的检测PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中PRRSV RNA,而对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)感染PAMs中的核酸呈现阴性。应用该方法检测PRRSV感染仔猪肺脏、腹股沟淋巴结和胸腺石蜡包埋组织切片中PRRSV RNA,在感染的腹股沟淋巴结中PRRSV RNA呈现集中分布,而PRRSV RNA在肺脏和胸腺中呈弥漫性分布。该方法可用于细胞和组织中核酸的定位及分布规律的研究,特别是用于病毒含量较少的潜伏感染的检测,为PRRSV实验室检测和致病机理研究奠定了良好的试验基础和技术支持。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年07期）
郭文炎[7]（2017）在《小鼠神经元的双色荧光重激活及其mRNA整体原位杂交的方法研究》一文中研究指出神经元是大脑结构和功能的基本单元。众多的神经元通过从胞体发出的突起,构成神经回路并相互联系。基因表达、蛋白活动等分子事件,在神经元及其回路上不断发生。神经元的投射和分子活动,共同构成了脑结构和功能的基础。基因表达分析结合神经元单细胞形态,有利于更好地理解神经元的类型和功能。然而,针对组织整体目前没有研究报道在一个样本上同时获取了神经元单细胞完整形态和基因表达信息。fMOST系统的发展,为全脑尺度下神经元连接图谱和分子图谱的获取奠定了成像上的基础。GFP及其pH敏感衍生物的化学层析成像,使fMOST同时具备了宽场成像的速度和共聚焦成像的分辨率。然而,双色化学层析成像既是需求又是挑战。针对小鼠全脑这种整体生物组织,在化学层析成像获取神经元形态投射时,如何同时获取基因表达信息也存在方法上的困难。围绕全脑尺度下同时获取神经元单细胞完整形态及其基因表达信息的需求,针对这两方面研究在标记方法上的具体问题,本文的主要贡献如下:(1)确定了红色荧光蛋白pHuji兼容树脂包埋和化学层析成像,并将之与EGFP或EYFP联合,实现了双色化学层析。本文根据树脂包埋和化学层析对荧光蛋白的要求,选择了可能满足这些要求的pH敏感红色荧光蛋白pHuji并将其编码基因构建到AAV病毒载体上,实现了稀疏高亮标记神经元完整形态。通过结合EGFP进行双色标记,实现了双色化学层析成像。(2)基于EGFP和pHuji的双色标记,实现了神经元形态和突触结构的同时高亮度标记,为fMOST双色化学层析同时获取神经元单细胞完整形态和突触分布奠定了基础。本文通过AAV介导pHuji标记神经元形态,完整的EGFP融合Synapsin标记突触前,完整的EGFP融合PSD95标记突触后,实现了突触的高亮度与高准确度标记。(3)基于iDISCO的组织通透方法与杂交链式反应的信号放大方法,建立了小鼠全脑荧光原位杂交的方法。以中高丰度内源或者外源基因的mRNA为靶标,设计多个寡核苷酸探针作为一级探针,荧光染料标记的发夹对作为二级探针,实现了特定mRNA的准确标记。这一整体原位杂交方法结合fMOST断层成像时核酸染料(PI或者DAPI)实时复染,在同一个样本上同时获取了mRNA分布信息和细胞构筑背景,从而发展了一种简单、快速、精确确定mRNA在全脑中表达位置的方法。(4)利用非甲醇依赖的iDISCO组织通透方法对Thy1-EGFP-M小鼠脑块进行通透,然后进行组织整体原位杂交,既获得了基因表达信息,又保留了荧光蛋白标记的神经元形态投射信息,从而证明了基于iDISCO的整体原位杂交方法与荧光蛋白标记神经元形态投射的方法具有较好的兼容性。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-08-01）
濮晓红,叶庆,陈骏,柏涛,郑金榆[8]（2016）在《荧光原位杂交(FISH)辅助诊断胰胆管癌的技术及判读方法》一文中研究指出目前对于临床上怀疑为胰胆管癌的患者,主要通过内窥镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)和细胞刷检进行术前诊断。细胞刷检病理诊断虽然特异度高,但灵敏度较低。采用荧光原位杂交(FISH)方法检测胆管脱落细胞中3、7、17号染色体和p16缺失,可以作为临床胆管癌辅助鉴别诊断新的方法。此项技术虽然在国外的应用和研究已超过10年,但是我国尚未见应用于临床胰胆管癌的报道。我院已开展此项技术用于胰胆管癌的辅助诊断,并已发表相应的文章,但是很多希望开展此项技术的医院尚对此项技术的操作和判读存在疑问。本文详细讲解了运用FISH检测胆管脱落细胞中3、7、17号染色体和p16缺失来辅助诊断胰胆管癌的技术和判读方法。(本文来源于《临床肿瘤学杂志》期刊2016年09期）
刘安军,麻献华,杨瑞,章卫平,谢志芳[9]（2016）在《优化整体原位杂交方法检测基因在幼鼠大脑中的表达》一文中研究指出目的优化整体原位杂交方法,用于检测基因在幼鼠大脑中的时空表达分布。方法通过摸索最佳蛋白酶K的消化时间,改良杂交缓冲液成分,并延长杂交时间和漂洗时间,对整体原位杂交方法进行优化,并用优化的方法检测了Cdh6、Bhlhb5和Lmo4 mRNA在出生后7天的小鼠大脑中的整体表达分布。结果采用优化的整体原位杂交方法成功地检测了3种mRNA在幼鼠全脑的区域性表达特征,特异性杂交信号强,非特异性背景低。结论成功优化了幼鼠全脑原位杂交方法,为开展后续的研究打下基础。(本文来源于《医学研究杂志》期刊2016年05期）
可小丽,曾祖聪,刘志刚,曹建萌,方伟[10]（2015）在《罗非鱼无乳链球菌的DIG-cfb原位杂交检测方法的建立》一文中研究指出为建立一种批量检测罗非鱼无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的快速敏感的原位杂交方法,本研究依据罗非鱼无乳链球菌cfb基因序列,选取其132-599 bp之间的序列为靶序列,采用PCR法制备了特异性地高辛标记的DNA探针DIG-cfb(Digoxigenin-labelled cfb probe,430 bp),同时对所制备的探针进行了测序鉴定及特异性和敏感性检测。结果表明,探针测序序列与实际Gen Bank序列相符,所制备的DIG-cfb探针与无乳链球菌基因组杂交呈阳性,与患病罗非鱼的其他细菌病原(嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、类志贺邻单胞菌以及海豚链球菌)基因组,以及与无乳链球菌亲缘关系较近的链球菌其他种(牛源链球菌、变异链球菌),斑点反应则均为阴性,d NTP对照组也为阴性,表明该方法特异性强;该方法可实现对批量样品的快速检测,具有较高的灵敏度,可检测无乳链球菌基因组的下限为1.5 ng/μL DNA。对采集于广东、海南及广西等不同地点的无乳链球菌样品,均可获得较明显的斑点反应圈,对患链球菌病的罗非鱼肝、脑组织基因组也可特异的检测出无乳链球菌。表明本研究建立的DIG-cfb原位杂交法对无乳链球菌基因组的检测具有快速、特异、敏感等特点,适合罗非鱼无乳链球菌的批量检测。(本文来源于《中国农学通报》期刊2015年35期）
原位杂交方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为建立实现牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在贝类宿主组织中的精确定位方法,基于原位杂交PCR (ISPCR)技术建立了OsHV-1的间接原位杂交PCR (indirect ISPCR)检测方法,并利用该方法对OsHV-1在魁蚶主要器官的分布情况进行了检测和分析。首先选择适合原位杂交PCR的引物,在载玻片上实现对原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,然后与使用相同引物制作的地高辛标记核酸探针进行原位杂交,最后通过免疫酶标技术显示样本内OsHV-1的组织分布。为了达到最佳检测效果,对间接ISPCR的扩增循环数以及组织消化的蛋白酶K浓度进行优化。结果显示,最适PCR扩增循环数为20,蛋白酶K浓度为20μg/mL。利用经优化的间接ISPCR检测方法,对OsHV-1在魁蚶外套膜、鳃、肝胰腺、斧足和闭壳肌5个样本中的组织分布情况和亲嗜性进行检测和分析。病毒阳性信号主要分布于魁蚶外套膜结缔组织中浸润的血细胞和成纤维细胞、肝胰腺和鳃浸润的血细胞、斧足和闭壳肌中坏死肌肉细胞的细胞核中。本研究建立的间接ISPCR检测方法具有灵敏、特异和精确定位的优点,通过组织切片上显示的病毒核酸阳性信号,能判别OsHV-1在不同组织部位的分布特点和受感染的细胞类型;适用于OsHV-1感染的确诊、病毒对不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原位杂交方法论文参考文献
[1].焦哲,梁继翔,严治山,宋彦民,刘晓丽.猪萨佩罗病毒原位杂交检测方法的建立[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[2].李亚楠,白昌明,刘金兰,辛鲁生,李晨.牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)间接原位杂交PCR检测方法的建立与初步应用[J].水产学报.2019
[3].马泽林.RNAscope原位杂交技术检测PRRSV方法的建立及初步应用[D].中国农业科学院.2018
[4].刘伟,周小鸽,滕孝静,毕阔,王照情.原位荧光杂交检测在骨髓活检切片中的方法建立及优化[J].临床和实验医学杂志.2018
[5].李佳嘉,徐国祥,刘银华,浦春.两种不同预处理方法对HER2基因荧光原位杂交效果的影响[J].世界最新医学信息文摘.2018
[6].崔蒙蒙,李江南,王刚,何希君,翁长江.RNAscope原位杂交技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA方法的建立[J].中国预防兽医学报.2018
[7].郭文炎.小鼠神经元的双色荧光重激活及其mRNA整体原位杂交的方法研究[D].华中科技大学.2017
[8].濮晓红,叶庆,陈骏,柏涛,郑金榆.荧光原位杂交(FISH)辅助诊断胰胆管癌的技术及判读方法[J].临床肿瘤学杂志.2016
[9].刘安军,麻献华,杨瑞,章卫平,谢志芳.优化整体原位杂交方法检测基因在幼鼠大脑中的表达[J].医学研究杂志.2016
[10].可小丽,曾祖聪,刘志刚,曹建萌,方伟.罗非鱼无乳链球菌的DIG-cfb原位杂交检测方法的建立[J].中国农学通报.2015
论文知识图
![条锈病分级标准[99]](http://image.cnki.net/GetImage.ashx?id=1013335629.nh0010&suffix=.jpg)
