miR-218-2-3P靶向SIN3A基因影响NK/T细胞淋巴瘤的增殖和凋亡

论文摘要

目的·探讨miR-218-2-3P在NK/T细胞淋巴瘤中的表达情况,及其通过靶向SIN3A基因对NK/T细胞淋巴瘤增殖、凋亡及周期的影响。方法·采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）检测miR-218-2-3P在正常人NK细胞和NK/T细胞淋巴瘤细胞NK92MI、NKYS中的表达。采用脂质体3000瞬时转染法向NK92MI细胞分别转染含无义序列的抑制剂（inhibitor NC）、miR-218-2-3P抑制剂（mi R-218-2-3P inhibitor）及不含片段的转染试剂,并采用qPCR和蛋白质印迹法（Western blotting）分别检测上述3组即inhibitor NC组、miR-218-2-3P inhibitor组及空白对照组细胞中miR-218-2-3P及SIN3A蛋白的表达水平。通过CCK8法检测3组细胞的增殖活力。利用流式细胞仪检测3组细胞的凋亡率和周期。采用双荧光素酶报告基因实验检测SIN3A是否为miR-218-2-3P的靶基因。向NK92MI细胞分别转染mi R-218-2-3P inhibitor+SIN3A干扰小RNA（si-SIN3A）、miR-218-2-3P inhibitor+含无义序列的干扰小RNA（si-NC）,并采用CCK8法检测该2组细胞的增殖活力。结果·与正常人NK细胞相比,NK92MI细胞、NKYS细胞中miR-218-2-3P的表达显著升高（均P<0.05）。与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-218-2-3P inhibitor组NK92MI细胞的增殖活力减弱（均P<0.05）、凋亡率增加（均P<0.05）且发生了G0/G1期细胞周期阻滞（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示SIN3A为miR-218-2-3P的靶基因。与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-218-2-3P inhibitor组的SIN3A蛋白表达水平升高（均P<0.05）。下调SIN3A表达,能够恢复由转染miR-218-2-3P inhibitor减弱的细胞增殖活力（均P<0.05）。结论·miR-218-2-3P在NK92MI、NKYS细胞株中表达较高,其可能通过靶向调控SIN3A对NK/T细胞淋巴瘤的增殖、凋亡及周期产生影响。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞、试剂与仪器
•   1.2 细胞培养
•   1.3 细胞转染及分组
•   1.4 反转录与qPCR检测
•   1.5 细胞增殖检测
•   1.6 细胞凋亡、细胞周期检测
•   1.7 双荧光素酶报告基因实验检测
•   1.8 蛋白质印迹法检测
•   1.9 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 qPCR检测NK/T细胞淋巴瘤细胞系中miR-218-2-3P的表达情况
•   2.2 qPCR检测转染miR-218-2-3P inhibitor后NK92MI细胞中miR-218-2-3P的表达情况
•   2.3 CCK8法检测沉默miR-218-2-3P对NK92MI细胞增殖的影响
•   2.4 流式细胞术分析NK92MI细胞转染miR-218-2-3Pinhibitor后细胞凋亡率的改变
•   2.5 流式细胞术检测NK92MI细胞转染miR-218-2-3P inhibitor后细胞周期的变化
•   2.6 双荧光素酶报告基因实验检测miR-218-2-3P的靶向基因
•   2.7 Western blotting检测SIN3A蛋白的表达
•   2.8 CCK8法检测下调SIN3A表达后NK92MI细胞的增殖活性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王佳琳,季迪,陈祥,杨博,余林

关键词: 细胞淋巴瘤,基因,增殖,凋亡,细胞周期

来源: 上海交通大学学报(医学版) 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科

基金: 重庆市科学技术委员会科技惠民计划项目(cstc2015jcsf10001-02-03)~~

分类号: R733.1

页码: 1394-1401

总页数: 8

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