长霜足蛛毒素的分子多样性和活性研究

论文摘要

长霜足蛛（Cyriopagopus longipes）是一种栖息在泰国、老挝和柬埔寨等东南亚国家的大型捕鸟蛛。到目前为止,还没有关于长霜足蛛毒素研究的报道,本论文将首次研究长霜足蛛多肽毒素的多样性和粗毒的活性,为长霜足蛛多肽毒素的进一步研究奠定基础。首先构建了长霜足蛛毒腺cDNA文库,随机挑选出文库中的单克隆进行测序,获得了323条表达序列标签。这些表达序列标签经过软件分析,其中120条编码类毒素前体蛋白,46条编码细胞蛋白相关序列,157条没能匹配到任何已知的序列。通过软件预测323条表达序列标签表达的蛋白,显示这些表达序列标签可表达104条毒素前体序列,进一步比较这些毒素前体序列的序列相似性后将它们归类为10个超家族。比较10个超家族的序列进行分析后发现,长霜足蛛中多肽毒素大多含有3对二硫键,小部分有4对二硫键,极少的毒素为不含二硫键的线性肽,并且发现长霜足蛛毒素前体序列和虎纹捕鸟蛛的毒素前体序列有很高的相似性。通过构建进化树以及序列的对比方式,分析虎纹捕鸟蛛和长霜足蛛毒素前体的序列差异性,发现两种蜘蛛的部分毒素的前体序列有很高的相似度,在进化关系上有较高的亲缘性,为研究长霜足蛛和虎纹捕鸟蛛进化关系提供了依据。通过高效液相色谱分离长霜足蛛的粗毒共得到40多个色谱峰,经过质谱鉴定总共得到64种多肽分子,其中超过一半的多肽毒素的分子量在3000-5000Da范围内。动物实验显示长霜足蛛粗毒对小鼠的LD50为0.708 mg/kg,对美洲蜚蠊的致死作用效果较弱,200?g/g的浓度仅能造成麻痹作用。膜片钳实验检测了长霜足蛛粗毒在100?g/mL的浓度下对大鼠DRG细胞电压门控离子通道的影响,结果显示粗毒对DRG细胞的钠、钾和钙离子通道都有一定的抑制作用,对高电压激活钙通道的抑制率最高,达到67.7%±5.1%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 蜘蛛毒素的研究进展
•   1.1 引言
•   1.2 蜘蛛毒液的组成成分
•   1.3 cDNA文库
•   1.4 蜘蛛多肽毒素活性探究
•   1.5 研究思路和背景
• 第二章 长霜足蛛毒腺的转录组学研究
•   2.1 前言
•   2.2 材料、仪器和试剂
•     2.2.1 实验材料
•     2.2.2 实验仪器
•     2.2.3 实验试剂
•   2.3 实验方法
•     2.3.1 长霜足蛛毒腺的分离和毒腺总RNA的提取
•     2.3.2 长霜足蛛cDNA文库的构建
•     2.3.3 cDNA文库的单克隆测序以及生物信息学分析
•   2.4 实验结果
•     2.4.1 长霜足蛛毒腺cDNA文库的构建
•     2.4.2 EST序列聚类分析
•     2.4.3 长霜足蛛cDNA文库中的毒素功能基因
•     2.4.4 长霜足蛛和虎纹捕鸟蛛毒素前体的进化树分析
•   2.5 讨论
• 第三章 长霜足蛛毒液的主要成分及生物学活性探究
•   3.1 前言
•   3.2 材料、仪器和试剂
•     3.2.1 实验材料
•     3.2.2 实验仪器
•     3.2.3 实验试剂
•   3.3 实验方法
•     3.3.1 长霜足蛛毒液的反相高效液相色谱的分离纯化
•     3.3.2 长霜足蛛毒素MALDI-TOF质谱鉴定
•     3.3.3 长霜足蛛粗毒对美洲蜚蠊和ICR小鼠的毒性测定
•     3.3.4 大鼠DRG细胞的急性分离
•     3.3.5 全细胞模式膜片钳电生理活性检测
•   3.4 实验结果
•     3.4.1 长霜足蛛粗毒的分离纯化以及质谱鉴定
•     3.4.2 长霜足蛛粗毒所含毒素的分子多样性
•     3.4.3 长霜足蛛粗毒对美洲蜚蠊和ICR小鼠的毒性测定
•     3.4.4 长霜足蛛粗毒对DRG细胞电压门控离子通道活性的影响
•   3.5 讨论和进一步的研究展望
• 参考文献
• 缩写表
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王周全

导师: 梁宋平,容明强

关键词: 长霜足蛛,文库,蜘蛛毒素,进化树

来源: 湖南师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 湖南师范大学

分类号: Q958

总页数: 68

文件大小: 4023K

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