王文杰（黑龙江中医药大学附属第二医院150000）
【关键词】血型抗体血型血清检测
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）10-0015-02
1酶试验技术实验
1.1实验原理
酶试验技术可用于不同的血清学试验中，蛋白水解酶可作用于红细胞表面的多糖链上，切断带有负电荷的羧基基团的唾液酸，从而减少红细胞表面负电荷以及红细胞间的排斥力，使之容易产生凝集反应，因此酶试验技术可以增强一些血型抗原与抗体的反应，其中以Rh和Kidd血型系统最为显著。然而，蛋白水解酶处理红细胞时，也可使一些红细胞抗原的结构破坏或变性，其中以M、N、s、Fya、Fyb最为显著。因此，应用酶试验技术可以根据酶处理红细胞与抗体反应的格局，以及对受检抗体的血清学特性的分析，对抗体的特异性作出鉴定。酶试验技术尚可用于增强红细胞对抗体的吸附能力，与DTF结合使用可去除包被在红细胞上的自身抗体，也可使包被在红细胞上的补体成分C3b和C4b转化成C3d和C4d，因此酶试验技术可用于不同的血清学工作中。在免疫血液学实验室中较常用的蛋白水解酶有菠萝酶、无花果蛋白酶、木瓜酶和胰蛋白酶等。
1.2酶试验分类和操作程序
1.2.1酶试验分类酶试验技术有一步法和二步法之分。一步法为直接加酶试液于受检血清，操作简单，但敏感性较差。二步法是先以酶试液预处理红细胞，然后与受检血清反应，敏感性较佳。
1.2.2酶试验一步法操作程序
(1)实验目的：检测血型抗体。
(2)实验材料：1％的菠萝酶或木瓜酶等酶试液、IgG抗－D血清、正常人AB型血清、受检血清、5％的受检者红细胞悬液、5％的O型Rh阳性试剂红细胞悬液和生理盐水。
(3)实验操作：取试管4只，分别标为受检者姓名、自身对照、阳性和阴性对照；加入各反应物，在37％水浴中孵育15min后，120g/min，离心1min，或1000g／min，离心15s，轻轻悬浮红细胞，肉眼观察凝集、评分并记录结果。
(4)结果判读：阳性对照应显凝集反应，阴性对照及自身对照应是无凝集反应。然后观察受检查者试管，如果显凝集反应，表示受检查血清中有抗体存在；如无凝集现象，则受检查血清中无抗体存在。
1.2.3酶试验二步法操作程序
(1)实验目的：检测血型抗体。
(2)实验材料：二步法菠萝酶液的制备：2份1％菠萝酶液加1份0.2％半胱氨酸盐水溶液，混匀待用；二步法无花果蛋白酶液的制备：1份无花果蛋白酶液加9份pH7.3的PBS，混匀、待用；其他试剂：包括IgG抗－D血清、正常人AB型血清、受检查者血清、5％的受检者红细胞悬液、5％的O型Rh阳性试剂红细胞悬液和生理盐水等。
(3)操作程序：酶预处理红细胞的制备：将O型Rh阳性试剂红细胞、受检查者红细胞，分别置于大试管中，用生理盐水洗涤2次后，做成压积红细胞，取各管的压积红细胞1份，分别加入等体积的二步法酶液，混合后，放置于37℃水浴中处理10min，取出后用生理盐水洗3次，配成5％的红细胞悬液待用；取试管4只，分别标明受检查者姓名、自身对照、阳性对照和阴性对照；加入各反应物，混匀后置于37℃水浴中6min，取出后，120g／min，离心1min，或1000g/min，离心15s，先观察是否有溶血，然后轻摇试管，悬浮红细胞，肉眼检查凝集现象、评分和记录结果。
2微柱凝集试验技术
2.1实验原理
1986年Lappierre发明的微柱凝集试验，是将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行，微柱检测系统的上端为反应室，将凝胶或小玻璃珠作为凝集反应的介质装入微柱中，介质中尚含有按各种凝集反应所需要的试剂如促凝剂、定型试剂、抗球蛋白试剂等，按不同的血型血清学工作需要，形成不同的微柱凝集检测管[1]。在作检测时，根据不同的试验目的，在微柱凝集检测管中加入检测样本的红细胞、检测样本的血清或血浆，或试剂红细胞、定型血清等。微柱凝集检测管中的凝胶或小玻璃珠的间隙形成了分子筛作用，凝集反应阳性的红细胞凝块留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶或小玻璃珠的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。
2.2实验材料
根据不同的血型血清学工作需要，选择相应的微柱凝集检测系统(严格按试剂说明选择和使用)，微柱凝集离心系统，微量加液器，检测样本的红细胞悬液，检测样本的血清或血浆，或试剂红细胞悬液，定型血清和生理盐水等。
2.3实验操作
2.3.1按试剂说明配制好检测样本的红细胞悬液，检测样本的血清或血浆，试剂红细胞悬液，定型血清等。
2.3.2按试剂说明在对应的微柱凝集检测管中加入样本的红细胞悬液，或检测样本的血清或血浆，或试剂红细胞悬液，或定型血清。
2.3.3按试剂说明孵育和在专用微柱凝集离心机中离心。
2.3.4按试剂说明的方法判读凝集反应结果。
2.4微柱凝集试验技术的优点
微柱凝集试验技术是新型的血型血清学检测技术，具有易于操作标准化、自动化、判读客观和可靠、敏感度高、能检出B(A)或A(B)型红细胞而避免误定为AB型、结果可长期保存、有利于大量样本操作等优点。
2.5微柱凝集试验技术的局限性和注意点
必须严格按试剂盒的规定操作，使工作人员依赖性大，不利于血型专业技术的积累和提高；微柱凝集试验有可能难于鉴别或漏检某些ABO亚型抗原；微柱凝集试验技术不适合于直接抗球蛋白试验阳性的红细胞样本，也不适合于酶处理的红细胞样本的检测工作。在实验过程中，如果红细胞悬液中如有颗粒物质，或血样本的血浆蛋白异常，会干扰实验结果的判读。微柱凝集检测系统是商业化产品，因此实验的成本较经典的血型血清学检测技术高[2]。
参考文献
[1]张春来,陈晓建,于咏梅,谷彦霞,陈召江,杨振中;应用柱凝集技术进行Rh血型抗原分型的研究[J];临沂医学专科学校学报;2004年02期
[2]武建;柱凝集技术的临床应用及其实验研究现状[J];中国输血杂志;2003年05期