基于微流控的真菌单细胞捕获和培养

论文摘要

【背景】真菌单细胞培养在研究细胞异质性及细胞生长特性等方面十分重要,因此需要建立简单便捷的方法对真菌单细胞进行培养与观察。【目的】基于微流控建立一种真菌单细胞的捕获及培养方法,同时直观地对单细胞进行定位和实时观察。【方法】利用L-edit设计芯片图案并利用等离子键合的方法制备微流控芯片;通过注射泵将红酵母菌溶液及里氏木霉孢子溶液进样以实现单细胞捕获;采用台盼蓝染色法测定酵母细胞的存活率;利用显微镜对酵母单细胞及木霉孢子的萌发、生长、繁殖过程进行观察。【结果】所制备的芯片形状完好,可实现酵母或孢子的单细胞捕获;酵母的捕获率为25.00%±1.38%;分别于0、2、4、6h对酵母进行观察,可看到酵母出芽过程;培养至48h,芯片上酵母细胞的存活率与游离培养条件下的存活率无显著性差异;分别于0、3、6、9 h对单个孢子进行观察,可以看到孢子萌发以及菌丝生长情况,且直至120h菌丝仍在生长。【结论】设计并制备了一种用于真菌单细胞捕获及定位培养的微流控芯片,这是此种芯片在真菌单细胞培养中的首次应用。细胞可在此微流控芯片上正常生长至少2 d,并可实现5 d及更长时间的培养,此方法可对真菌单细胞进行直观、定位的实时观察,有望用于多种微生物单细胞的生理、遗传性状研究,以及原生质体融合育种研究。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•     1.1.1 菌种
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•     1.1.3 培养基
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 芯片设计与制备
•     1.2.2 真菌捕获与培养
•     1.2.3 真菌性质的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 芯片设计与制备
•   2.2 真菌孢子捕获与培养
•   2.3 酵母菌捕获率测定
•   2.4 酵母菌生长
•   2.5 酵母菌活性测定
•   2.6 木霉孢子生长过程
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵莹彤,浑婷婷,詹悦维,范婷文,赵峰,钞亚鹏,孙艳

关键词: 微流控,真菌,酵母,孢子,单细胞

来源: 微生物学通报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 北京航空航天大学生物与医学工程学院生物力学与力生物学教育部重点实验室,北京航空航天大学生物医学工程高精尖创新中心,传感技术联合国家重点实验室,传感技术联合国家重点实验室中国科学院微生物研究所

基金: 国家自然科学基金(31470942,11421202,61227902,11072021),国家重点研发计划(2016YFC1100704)~~

分类号: Q93-335

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180124

页码: 522-530

总页数: 9

文件大小: 1099K

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