改良SDS法提取书虱总RNA的效果评估

论文摘要

目的建立有效的提取书虱总RNA的方法。方法分别采取改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取书虱总RNA;采用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性;核酸蛋白分析仪测定RNA纯度和浓度,纯度以A260/A280、A260/A230表示,通过浓度推算产率;以β-actin为目的基因,RT-PCR法初步评价RNA提取效果。同时,用改良SDS法探究不同数量的书虱总RNA提取效果。结果改良SDS法产率最高。经方差分析,3种方法的浓度差异具有统计学意义（F=17.874,P<0.001）,经SNK法每组互比,改良SDS法浓度较高,其次为TRIzol法,传统SDS法较低。TRIzol法未见28s条带;传统SDS法有gDNA污染;而改良SDS法电泳结果显示28s、18s条带完整清晰,条带之间无明显弥散现象,说明提取的RNA完整性较高。3种方法提取的RNA经RT-PCR均能扩增出阳性条带。30只书虱即可获得高质量RNA,满足后续实验要求。结论改良SDS法操作简单、成本低、耗时少,适于书虱总RNA的提取。

论文目录

• 材料和方法
•   一、书虱
•   二、主要试剂
•   三、三种方法提取书虱RNA效果比较
•     1.TRIzol法
•     2.传统SDS法
•     3.改良SDS法
•       （1）配置实验试剂:
•       （2）实验步骤:
•   四、改良SDS法KAc缓冲液最适pH值
•   五、改良SDS法书虱最低适宜数量
•   六、RNA提取效果鉴定
•     1. RNA电泳检测:
•     2. RNA浓度与纯度测定:
•     3. RT-PCR扩增β-actin基因:
•     4. 统计分析:
• 结 果
•   一、三种方法提取书虱总RNA比较
•     1. 琼脂糖凝胶电泳分析
•     2. RNA浓度与纯度分析
•   二、改良SDS法KAc缓冲液最适pH值
•   三、改良SDS法书虱最低适宜数量
•   四、 RT-PCR扩增β-actin基因
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 卢莹,黄文雨,黄梦蕊,王波,陈潜,刘啸,汪书然,孙恩涛

关键词: 提取,改良法,书虱

来源: 热带病与寄生虫学 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 皖南医学院检验学院

基金: 国家自然基金项目(31870352),皖南医学院大学生科研基金项目(WK2018S49),安徽省大学生创新创业项目(201810368137)

分类号: R384.3

页码: 199-202

总页数: 4

文件大小: 471K

下载量: 54