导读:本文包含了重组伪狂犬病病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:狂犬病,病毒,层析,蛋白,基因,免疫,衣原体。
重组伪狂犬病病毒论文文献综述
刘川玉,金宏丽,迟航,李恩涛,胡星星[1]（2019）在《表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)纯化方法的建立》一文中研究指出建立一种可线性放大、应用于表达中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)的规模化纯化方法。将收获的病毒去除细胞碎片、灭活后,分别通过3种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Cellufine~(TM )Sulfate亲和层析)进行纯化,经比较筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法。结果显示,500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率达到97.02%,病毒纯度较高,电镜下可见到病毒囊膜刺突。结合成本等方面综合考虑,此方法优于其他2种纯化方法。本试验筛选获得了一种适用于rSRV9-MERS_(S1)的纯化方法,为rSRV9-MERS_(S1)规模化纯化工艺的建立与MERS新型疫苗的研制奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年09期）
范桂芳,徐守兴,杨斓,宋文博,华琳[2]（2019）在《表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性》一文中研究指出为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10~(-7.0)/0.1 mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年07期）
傅倩芸[3]（2019）在《表达SFTSV Gn/Gc蛋白重组狂犬病病毒的构建与免疫原性研究》一文中研究指出背景:SFTS(Severe fever with thrombocytopenia syndrome)是由 SFTSV(SFTSvirus,SFTS病毒)引起的以发热和血小板减少为典型临床特征的自然疫源性人兽共患传染病。2009年该病在中国首次被发现,该病病原体是一种可感染人类并致死的新型布尼亚病毒,该病毒除感染人之外,还可以感染牛、羊、猪、狗、猫等家畜和鼠、鼩鼱等啮齿类动物。现在尚没有公认的特异性治疗方法,更无批准的人和动物的SFTSV疫苗。狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染引起的狂犬病(Rabies)是全球流行、危害严重的人兽共患传染病,病死率高达100%。我国是全球第二大狂犬病高发区,仅次于印度。全球每年因RABV感染的病犬传播造成的狂犬病死亡人数约5.9万,造成86亿美元的经济损失,严重危害人类健康。消除人类狂犬病最为经济有效的措施就是主动免疫,通过动物大规模接种狂犬病疫苗消除犬狂犬病,进而显着降低人类狂犬病发病率。鉴于SFTSV和RABV都是家养动物的常见人兽共患病原体,因此,研制一种安全、高效、经济的二联疫苗保护动物健康,具有非常重要的公共卫生学意义。目的:1.将SFTSV的保护性抗原Gn和Gc基因分别插入至RABV SAD(Street Alabama Dufferln)株基因组的假基因区,构建表达SFTSV Gn和Gc蛋白的重组狂犬病病毒SAD-Gn和SAD-Gc。2.检测SAD-Gn和SAD-Gc重组病毒的生物学特性、免疫原性、安全性和保护性,评价SAD-Gn和SAD-Gc作为二联重组活载体疫苗的潜力。方法:1.构建表达SFTSV Gn/Gc蛋白的重组狂犬病病毒SAD-Gn和SAD-Gc,通过RT-PCR、荧光抗体染色和Western blot实验鉴定重组病毒的生物学特性。2.安全性评价,免疫小鼠后,在21d观察期内,检测小鼠饮食、外形和体重,评价重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc的安全性。3.免疫原性评价,分离第2、4、6、8周的血清,利用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和终点法中和试验分别检测RABV中和抗体效价和SFTSV中和抗体效价,检测重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc的免疫原性。4.RABV攻毒保护实验,重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc免疫小鼠21d后,肌肉注射RABV固定毒CVS-24,在观察期21d内,记录小鼠发病状况和死亡情况,评价重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc对RABV的保护作用。5.SFTSV攻毒保护实验,重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc免疫小鼠4周后,肌肉注射攻毒SFTSV,7d后分离小鼠脾脏,分析病理损伤并利用荧光探针法qRT-PCR检测SFTSV病毒载量,评价重组病毒SAD-Gn和SAD-Gc对SFTSV攻毒的保护作用。结果:1.通过RT-PCR、荧光抗体染色和Western blot实验均检测到SFTSV Gn蛋白和RABV G蛋白的表达,RT-PCR实验检测到SFTSV Gc蛋白表达,且分子量与预期大小相符。2.中和抗体水平检测结果显示,SAD-Gn和SAD-Gc重组病毒能诱导小鼠产生强烈的体液免疫,SAD-Gn组4周时中和抗体效价达到峰值,RABV中和抗体效价为4.13 IU/ml,SFTSV中和抗体效价为1:277;SAD-Gc组6周时中和效价达到峰值,RABV中和抗体为4.97 IU/ml,SFTSV中和抗体效价为1:256。3.在21 d观察期内,与空白组和SAD对照组相比,SAD-Gn和SAD-Gc重组病毒对小鼠饮食和体重影响较小,未出现任何狂犬病病症。4.RABV攻毒保护实验结果显示,攻毒后观察期结束时,空白组小鼠均出现典型的狂犬病病症,存活率为0,RT-PCR结果显示,死亡小鼠死于RABV的感染。SAD组、SAD-Gn组和SAD-Gc组小鼠未出现任何异常病症,小鼠存活率为100%。5.qRT-PCR检测SFTSV病毒载量结果显示,与空白组和SAD组相比,SAD-Gn和SAD-Gc重组病毒组SFTSV核酸定量明显减少。SAD-Gn组SFTSV核酸定量最少。结论:1.成功构建表达SFTSV Gn和Gc蛋白的重组狂犬病病毒SAD-Gn和SAD-Gc。2.SAD-Gn和SAD-Gc重组病毒在小鼠体内可诱导小鼠产生强烈的免疫应答,保护小鼠抵抗RABV致死性攻击,对SFTSV攻毒起到一定保护作用。为进一步研制预防狂犬病和SFTS的二联疫苗奠定了基础。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-20）
刘川玉[4]（2019）在《表达MERS-CoV S1蛋白重组狂犬病病毒的纯化与实验免疫研究》一文中研究指出中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)是由中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)所引起的一种高度传染性人兽共患病。自2012年首例MERS患者病例被确诊以来,因其在全球范围内传播范围广、致死率高而受到世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的广泛关注。2015年我国报道出现的首例输入性MERS患者,这无疑为我国的MERS防控增加了挑战,也敲响了警钟。流行病学调查表明,单峰驼是MERS-CoV的重要中间宿主,人可通过与病畜直接或间接接触感染MERS-CoV。因此,加强针对MERS的新型疫苗研究,对单峰驼等动物宿主进行免疫源头免疫是MERS防控的关键。近年来,随着疫苗监管部门对疫苗质量、安全性要求的逐步升级,经简单粗放生产的疫苗已不能满足市场需求,必须提高疫苗纯度,加强对疫苗的纯化工艺探索研究。密度梯度离心法、沉淀法是病毒分离纯化工艺的经典方法,缺点是杂质去除效果有限,疫苗纯度低,安全性差,副作用大,无法线性放大应用于规模化生产。而一些新的分离纯化技术如膜过滤、层析等因自动化程度高、操作简便、回收率高而受到广泛关注。基于此,本研究旨在建立表达MERS-CoV S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)的悬浮培养工艺,同时研究其浓缩纯化方法,并且通过动物试验评价纯化病毒的免疫效果,为MERS新型疫苗的研究奠定基础。1、rSRV9-MERS_(S1)重组病毒悬浮培养的初步研究通过比较不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)下接毒后,BHK 21细胞的生长曲线和病毒滴度变化来确定最佳的MOI。同时对病毒的收获时间、收获次数等参数进行优化来确定病毒的悬浮培养条件。结果显示:当MOI=0.05时,以2×10~6个/mL的细胞密度作为工作细胞密度,接毒后48 h病毒滴度可达2×10~8 TCID_(50)/mL。离心收取细胞上清,用相同体积的新鲜培养液均匀重悬细胞沉淀,继续培养48 h,病毒滴度可达2×10~9 TCID_(50)/mL。2、rSRV9-MERS_(S1)重组病毒的浓缩纯化方法研究将收获的病毒培养液灭活后,分别通过叁种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 KD中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 KD中空纤维超滤柱+Cellufine~TMM Sulfate亲和层析)进行纯化,通过比较最终筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法。结果显示:500 KD中空纤维超滤柱+Sepharose4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率可高达97.02%;电镜下观察可见到纯化的病毒粒子具有较好的形态。结合生产成本等方面综合考虑,最终确定选用此种方法进行病毒的浓缩纯化。3、rSRV9-MERS_(S1)纯化病毒的实验免疫研究通过500 KD中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析法来制备纯化的病毒。同时将不同剂量(2μg、10μg、50μg)的纯化病毒及未纯化病毒免疫小鼠,通过测定抗MERS-CoV IgG抗体效价消长规律、抗MERS-CoV中和抗体水平等综合评价纯化病毒的免疫原性及免疫效果。结果显示:在抗MERS-CoV IgG抗体效价及抗MERS-CoV中和抗体水平上,不同剂量组呈现剂量依赖性效应,且抗体水平随着免疫次数的增加而升高;纯化的病毒具有良好的免疫原性,且可诱导小鼠产生良好的体液免疫应答。与未纯化病毒相比,纯化病毒可诱导小鼠较早产生高水平的体液免疫应答。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2019-05-01）
文兆海,周海滢,翟少华,陈凯云,胡远[5]（2019）在《CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定》一文中研究指出为了探究CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果,将CDV-N重组狂犬病病毒于BSR细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFD_(50)及LD_(50);将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀,按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠,利用ELISA试剂盒对狂犬病、犬瘟热的特异性抗体进行定性/定量检测。结果显示,重组病毒浓缩后的FFD_(50)值为7.85logFFD_(50)/0.1 mL,LD_(50)值为7.67logLD_(50)/0.03mL;免疫接种后第14天抗体阳性率达100%,小鼠血清中的特异性抗体IgG水平随着免疫剂量的递增而递增。试验结果可为CDV-N重组狂犬病病毒制备口服弱毒疫苗的进一步研究提供试验数据。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年04期）
阮晓凤,齐宇,张艳艳,陈腾,周鑫涛[6]（2019）在《表达猫衣原体momp蛋白的重组狂犬病病毒SRV9-MOMP的构建与鉴定》一文中研究指出为构建表达猫衣原体主要外膜蛋白(momp)的重组狂犬病病毒,以狂犬病病毒SRV9株反向遗传质粒p UC57-SRV9为骨架,在P/M基因间隔序列处插入MOMP基因,获得正确的重组全长转录质粒p UC57-SRV9-MOMP(P/M)。再将全基因组质粒与p UC57-N(SRV9)、p UC57-P(SRV9)、p UC57-G(SRV9)、p UC57-L(SRV9)4个辅助质粒共转染BSR-T7细胞系。经直接免疫荧光法验证,成功拯救出病毒SRV9-MOMP。Western-blot和RT-PCR检测表明,momp在重组病毒SRV9-MOMP感染的细胞内被稳定表达。本研究证明狂犬病病毒SRV9株具有作为载体表达外源蛋白的潜力,为研制高效、安全、经济的猫衣原体病疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年07期）
赵忠欣,孙培录,盖微微,燕丽娜,傅倩芸[7]（2019）在《表达牛流行热病毒G蛋白的重组狂犬病病毒的构建及鉴定》一文中研究指出目的以狂犬病病毒(RABV)弱毒株SAD株为载体,构建表达牛流行热病毒(BEFV)G蛋白的重组病毒SAD-BG。方法利用反向遗传技术将BEFV的G蛋白基因ORF插入到SAD株基因组的伪基因区,获得感染性克隆,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,获得重组病毒SAD-BG株。结果与结论通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定,表明BEFV G蛋白基因存在于重组病毒基因组,且能表达自身RABV G蛋白与外源BEFV G蛋白。通过BHK-21细胞和NA细胞鉴定重组病毒的生长特性,在NA细胞中重组病毒的滴度高于亲本SAD株,可达1.3×108FFU/ml。成功构建了表达BEFV G蛋白的重组病毒SAD-BG,为进一步研制预防狂犬病和牛流行热(BEF)的二联疫苗奠定了基础。(本文来源于《军事医学》期刊2019年02期）
赵维静,赵建伟,胡译文,谢静,刘琼[8]（2019）在《表面展示狂犬病病毒糖蛋白的重组乳酸菌的构建及其免疫原性的研究》一文中研究指出为开发基于乳酸菌载体表达的新型狂犬病口服疫苗,合成狂犬病病毒糖蛋白主要抗原表位区基因RVG,并通过PCR方法在其C′端融合特异性树突状细胞(DC)靶向肽编码基因后插入到乳酸菌表达载体中,以融合无关肽编码基因为对照,分别构建表达RVG基因的重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep和p SIP-409-pgsA′-RVG-ctrl。在清酒乳杆菌素的诱导下,表达产物经Western-blot和免疫荧光鉴定后,对小鼠进行口服免疫,通过流式细胞术检测免疫后小鼠脾中树突状细胞和B细胞活化效率,用ELISA检测肠道内sIgA和血清IgG分泌量。结果显示,该抗原表位区在重组乳酸菌中得到了正确表达,并且可锚定于菌体表面,pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能有效活化小鼠脾中的树突状细胞和B细胞;与其他组相比差异显着(P<0.05),且肠道内sIgA和血清IgG分泌量显着高于其他组(P<0.05),表明重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能够更好地激活黏膜免疫反应,具有良好的免疫原性。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年04期）
文兆海,毛丽萍,胡远,程瑶,周海莹[9]（2018）在《犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定》一文中研究指出探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年12期）
刘翠,殷相平[10]（2018）在《携带GFP基因的重组狂犬病病毒的拯救及其生物学特性研究》一文中研究指出本研究旨在构建一株携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组病毒,以便更快速、准确地检测疫苗效价。利用基因重组技术构建含有GFP基因的重组质粒,并利用反向遗传学操作进行重组病毒的拯救,在Vero细胞进行病毒感染并收集蛋白样品进行Western blotting试验,检测外源蛋白GFP的表达情况,测定一步法生长曲线,比较与原始毒株的生物学特性差异。结果显示,本试验成功拯救出携带GFP基因的重组狂犬病病毒毒株SAD-GFP;Western blotting试验结果显示,重组病毒可表达GFP,且随着病毒感染时间的延长,蛋白表达增多;病毒结构蛋白G蛋白表达并未受外源蛋白表达的影响,重组毒株与原始毒株的生长并无明显差异;传代后GFP仍可在病毒中稳定表达。在连续传代过程中,本试验成功拯救出SAD-GFP重组毒株,GFP基因并未丢失,且蛋白表达量并未降低,证明该位点表达的外源蛋白在病毒传代过程中可持续稳定表达,且对病毒生长特性并未产生影响。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年07期）
重组伪狂犬病病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10~(-7.0)/0.1 mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组伪狂犬病病毒论文参考文献
[1].刘川玉,金宏丽,迟航,李恩涛,胡星星.表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)纯化方法的建立[J].中国兽医学报.2019
[2].范桂芳,徐守兴,杨斓,宋文博,华琳.表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性[J].中国兽医学报.2019
[3].傅倩芸.表达SFTSVGn/Gc蛋白重组狂犬病病毒的构建与免疫原性研究[D].山东大学.2019
[4].刘川玉.表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒的纯化与实验免疫研究[D].吉林农业大学.2019
[5].文兆海,周海滢,翟少华,陈凯云,胡远.CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定[J].动物医学进展.2019
[6].阮晓凤,齐宇,张艳艳,陈腾,周鑫涛.表达猫衣原体momp蛋白的重组狂犬病病毒SRV9-MOMP的构建与鉴定[J].中国兽医科学.2019
[7].赵忠欣,孙培录,盖微微,燕丽娜,傅倩芸.表达牛流行热病毒G蛋白的重组狂犬病病毒的构建及鉴定[J].军事医学.2019
[8].赵维静,赵建伟,胡译文,谢静,刘琼.表面展示狂犬病病毒糖蛋白的重组乳酸菌的构建及其免疫原性的研究[J].中国兽医科学.2019
[9].文兆海,毛丽萍,胡远,程瑶,周海莹.犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定[J].中国兽医学报.2018
[10].刘翠,殷相平.携带GFP基因的重组狂犬病病毒的拯救及其生物学特性研究[J].中国畜牧兽医.2018
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