去分化联合IDO基因修饰增强人脐带间充质干细胞的抗氧化应激存活及Treg细胞诱导能力

论文摘要

【目的】研究去分化处理联合吲哚胺-2,3-双加氧酶（IDO）基因修饰,对人脐带间充质干细胞（hMSC）抗氧化应激生存能力及诱导调节性T淋巴细胞（Treg）能力的影响。【方法】通过对hMSC的短暂成脂分化诱导和恢复培养,获得去分化hMSC（De-hMSC）。实验组De-hMSC感染携带IDO基因的重组逆转录病毒,对照组为感染绿色荧光蛋白（ZsGreen1）基因的De-hMSC以及正常培养的未感染De-hMSC和hMSC。通过Western blot检测被感染细胞的IDO蛋白表达,应用流式细胞术测定IDO基因修饰型De-hMSC（IDO/De-hMSC）的免疫表型,同时鉴定其成骨和成脂分化能力。利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术比较各组细胞在300μmol/L t-BHP作用下的抗氧化应激生存能力,采用三色荧光标记流式细胞术测定含各组细胞培养上清的条件培养基对正常人外周血单个核细胞（PBMC）中Treg细胞含量的影响。【结果】IDO/De-hMSC仍具有间充质干细胞的免疫表型和成骨、成脂分化能力。在300μmol/L t-BHP作用下,De-hMSC的细胞存活率较hMSC明显增加（P<0.05）,经IDO基因修饰后De-hMSC的细胞存活优势无明显改变（P>0.05）。与未修饰的各对照组相比,含IDO/De-hMSC上清的条件培养基能明显上调PBMC中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的含量（P<0.05）。【结论】成脂去分化联合IDO基因修饰不影响hMSC的干细胞特性,并能同时增强h MSC的抗氧化应激生存能力及其对Treg细胞的诱导能力,是一种有望在免疫抑制治疗中发挥作用的间充质干细胞修饰策略。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 细胞培养
•   1.3 去分化hMSC的诱导
•   1.4 IDO基因修饰型De-hMSC的制备
•   1.5 IDO基因修饰型De-hMSC的鉴定
•   1.6 细胞凋亡检测
•   1.7 Treg细胞含量测定
•   1.8 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 De-hMSC诱导过程中的细胞形态变化
•   2.2 De-hMSC的基因修饰及干细胞特征鉴定
•   2.3 去分化及IDO基因修饰对hMSC抗氧化应激存活能力的影响
•   2.4 IDO/De-hMSC条件培养基对正常人淋巴细胞Treg亚群比例的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 匡梅娜,黄思瑞,鲁欣,周畅,胡耀华,唐震林,袁茵

关键词: 人脐带间充质干细胞,去分化,吲哚胺,双加氧酶,基因修饰

来源: 中山大学学报(医学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 广东药科大学生命科学与生物制药学院,华南师范大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金(81502973),广东省自然科学基金(2014A030310259),广东药科大学“创新强校工程”资助项目(2014KQNCX142)

分类号: R329.2

DOI: 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2019.0027

页码: 187-194

总页数: 8

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