鸭圆环病毒ORF3蛋白多克隆抗体的制备与应用

论文摘要

鸭圆环病毒(DuCV)感染引起淋巴细胞凋亡,其ORF3蛋白是唯一具有凋亡活性的病毒蛋白,但目前ORF3特异性抗体的缺乏限制了其生物学功能的深入研究。DuCV包含基因I型和基因II型两种基因型,利用软件分析两基因型ORF3同源性,选取保守性肽段进行多肽合成,并与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,多次加强免疫兔子,采集血清并纯化IgG后制备ORF3多克隆抗体。ELISA检测发现此抗体能特异性与ORF3保守肽段反应,并具有较高的效价,间接免疫荧光(IFA)显示此抗体能特异性识别两基因型ORF3蛋白,但并不能用于western blot检测,说明此多抗主要识别ORF3空间构象的表位。总之,我们成功制备了特异性识别两种基因型DuCV ORF3蛋白的抗体,为今后深入探究DuCV ORF3蛋白的生物学功能提供了良好的研究工具。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 特异性DuCV ORF3抗原肽段的合成
•   1.3 多肽的溶解与保存
•   1.4 多克隆抗体的制备
•   1.5 ELISA测定兔源多克隆抗体的特异性与效价
•   1.6 间接免疫荧光
•   1.7 western blot检测多抗的反应性
• 2 结果
•   2.1 DuCV ORF3多肽氨基酸序列分析
•   2.2 ORF3兔源多克隆抗体ELISA效价测定
•   2.3 ORF3兔源多克隆抗体的应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李浩然,武专昌,刘会会,朱晓慧,韩旭,张冉,张国良,夏小静,王鑫

关键词: 鸭圆环病毒,蛋白,多肽合成,多克隆抗体

来源: 家禽科学 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 临沂大学农林科学学院,河南科技学院

基金: 国家自然科学青年基金(3160130233),国家大学生创新训练项目(201810452012),山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室开放课题基金(SDPDI201802),河南科技学院大学生创新训练计划项目(201710467009,2017CX031)

分类号: S852.65

页码: 36-40

总页数: 5

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