论文摘要
小鼠PR结构域蛋白16（PRD1-BF1和RIZ1同源结构域蛋白16,PRDM16）作为棕色脂肪细胞分化过程中的重要转录因子,与PRDM2、PRDM3、PRDM6、PRDM8、PRDM13等同属PRDM家族。小鼠PRDM16基因位于4号染色体长臂E2上,主要包括1个N端PR域和2个C2H2型锌指结构域,成熟PRDM16编码1176个氨基酸,分子量大小约为150-170KDa,主要表达于棕色脂肪、睾丸、心脏、肾脏和肺中。该蛋白的主要的生物学功能为影响能量稳态、葡萄糖和脂质代谢以及体重调节,是白色脂肪和棕色脂肪转换的“开关”。在调节氧化应激、造血干细胞的生成及心脏等器官的发育过程中也发挥重要作用。在本研究中,我们首先通过基因工程技术将过长的PRDM16 cDNA分成6部分,通过PCR扩增PRDM16成熟肽编码片段,分别插入到pMalC2X载体乳糖操纵子后面,获得pMalC2X-PRDM16-（1/2/3/4/5/6）-Flag等6个重组载体,再将His标签及包含着GSG柔性链的TEV标签分别插入到MBP上下游,获得了N端带有His标签和MBP标签的6个融合表达载体His-pMalC2X-TEV-PRDM16（1/2/3/4/5/6）-Flag。质粒载体经转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE）3之后,筛选出可溶表达量较高的菌株,使用IPTG对其进行诱导表达,并摸索其最佳的诱导条件后扩大发酵培养,发酵产物经过镍离子亲合层析和DEAE阴离子交换纯化之后,目标蛋白纯度可达87.1%,western bloting检测结果显示该蛋白的大小和之前预测的大小相符,进一步确认了目标蛋白的表达正确性。然后以同样的方式表达并纯化出带有GST标签的PRDM16融合多肽,这些融合蛋白的表达纯化可以为后续PRDM16特异性抗体的制备打下基础。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 马秉秀
导师: 周余来
关键词: 原核表达,纯化,褐色化
来源: 吉林大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 吉林大学
分类号: Q78;Q51
总页数: 68
文件大小: 3420K
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