导读:本文包含了黄色荧光蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,荧光,黄色,转染,环状,酵母,柔嫩。
黄色荧光蛋白论文文献综述
匡琛,朱晓义,张亮,范世航,华玮[1]（2019）在《含多酶切位点融合黄色荧光蛋白的植物通用载体的构建与应用》一文中研究指出以植物表达载体pCAMBIA3301为基本骨架,以黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,简称YFP)为标签蛋白构建可融合目标蛋白的表达载体,并包含可用于外源基因插入的单一识别位点的核酸酶酶切位点(SpeⅠ、XbaⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ)。为了验证载体的实用性,将构建完成的载体转化到感受态GV3101农杆菌上,进行菌落PCR鉴定,再分别瞬时转化烟草下表皮和稳定转化拟南芥。激光共聚焦显微镜观察结果显示,在阳性转基因植株上均观察到荧光,在阴性对照上没有观察到荧光,表明YFP标签蛋白在转基因受体细胞中能够正常表达。pCAMBIA3301::YFP载体的成功构建为植物蛋白亚细胞定位及过表达转基因植株等相关领域的研究提供了稳定可靠的通用型载体资源。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年16期）
高梦月,王云轲,黄先杰,张晶,华子春[2]（2018）在《黄色荧光蛋白的结构对Annexin A5凋亡检测功能的影响探究》一文中研究指出细胞凋亡早期,磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内侧翻转到细胞膜外侧, Annexin A5可与PS高亲和力结合,这是其检测凋亡的原理。绿色荧光探针标记的Annexin A5和碘化丙啶联合标记应用于流式细胞术进行细胞凋亡检测,该方法灵敏度高、特异性好、效率高,已成为目前全世界通用的细胞凋亡检测方法。除FITC-Annexin A5外, Annexin A5-EGFP融合蛋白是另一个常用的简单、可信、易于制备的凋亡检测探针。黄色荧光蛋白是绿色荧光蛋白的一种突变体,其荧光向红色光谱偏移。目前,有叁种改良的黄色荧光蛋白:Citrine、Venus、Ypet,这叁种改良的蛋白荧光更亮、更稳定、成熟更快。该文选择Citrine、Venus、Ypet来制备Annexin A5凋亡检测探针,通过原核表达和分离纯化Annexin A5-Citrine、Annexin A5-Venus和Annexin A5-Ypet融合蛋白,获得了高产量的可溶性蛋白,探究这叁种融合蛋白与凋亡细胞的结合能力,筛选出适用于流式检测的黄色荧光蛋白标记的Annexin A5,为后续研究奠定基础。以pET28a-Annexin A5-EGFP-his重组质粒为模板,利用分子生物学手段又构建了重组质粒pET28a-Annexin A5-Citrine-his、pET28a-Annexin A5-Venus-his、pET28a-Annexin A5-Ypet-his,然后通过Ni柱亲和层析纯化获得了这叁种蛋白,纯度约为90%。该文重点比较了叁者检测细胞凋亡的能力,流式细胞仪检测结果显示, Annexin A5-Citrine、Annexin A5-Venus和Annexin A5-Ypet融合蛋白均可以识别和标记凋亡细胞,它们与凋亡细胞的亲和力分别是3 113.0 nmol/L、444.3 nmol/L和391.6 nmol/L。叁者与凋亡细胞的亲和力差异很大,通过对Citrine、Venus、Ypet的氨基酸序列进行分析,该文初步发现了决定叁个黄色荧光蛋白与凋亡细胞亲和力的关键氨基酸。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年11期）
孙金钰,郑屹峰,巫启明,郭建辉,林春通[3]（2014）在《环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究》一文中研究指出采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.(本文来源于《福州大学学报(自然科学版)》期刊2014年05期）
王波,骆灵喜,李旭宁,刘欢[4]（2014）在《利用加强型绿色荧光蛋白标记黄色单胞菌的研究》一文中研究指出通过连接T载体与来自质粒pSEBG上的egfp基因而构建成质粒pZTE,并将质粒pZTE的egfp基因插入到自杀质粒pTnMod-OGm转座子上的多克隆位点Kpn I和Sal I中构建成质粒pTE-OGm,最后pTE-OGm的egfp基因转座子元件通过转座作用插入到受体菌黄色单胞菌L1的染色体中,从而使黄色单胞菌L1获得较稳定的绿色荧光标记,为进一步在MBR反应器中更好地示踪黄色单胞菌L1的生长和迁移情况奠定了基础。(本文来源于《科学技术与工程》期刊2014年24期）
孙金钰[5]（2014）在《环状排列黄色荧光蛋白（cpYFP）在毕赤酵母中的表达及性质研究》一文中研究指出在自由基生物学与医学领域,自由基的特异性检测与分析是一个热点和难点。作为超氧阴离子自由基的特异性探针,环状排列黄色荧光蛋白(cpYFP)具有重要的应用前景。然而,目前仅有极少数论文简单报道了cpYFP在大肠杆菌中的表达与分离。为了高效获得高品质的cpYFP,本论文在大肠杆菌BL21(DE3)表达的基础上,探索cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并比较了它与大肠杆菌BL21(DE3)表达的异同。针对获得的高表达重组毕赤酵母菌株,通过甲醇诱导使重组cpYFP分泌表达到发酵液中；发酵液经乙醇沉降,Macro-Prep DEAE弱阴离子交换色谱分离纯化,得到电泳纯的目的蛋白；最后,对目的蛋白的分子量、糖基化、特异性和热稳定性进行了初步的表征。实验得到的结果如下：1.采用基因工程方法,成功构建了能表达cpYFP的大肠杆菌及毕赤酵母菌株。2.对比分析两种不同表达体系的cpYFP,结果表明毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,而且荧光强度为后者的3倍。同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP。3.摇瓶培养发酵时,毕赤酵母接种14 h后进入对数期,48 h后进入稳定期,确定转接扩大培养时间为24h；通过设计一次回归正交试验,得出cpYFP在毕赤酵母表达体系的最佳诱导方案：28℃,pH7.0,诱导5天。4.发酵液经80%乙醇沉降,Macro-Prep DEAE弱阴离子交换色谱分离,得到电泳纯的目的蛋白。5.质谱分析重组cpYFP的分子量为45.54 kD较理论分子量(32.52 kD)大,经N-糖苷酶和p-消去实验,表明该蛋白经过N-糖基化及O-糖基化修饰。6.重组cpYFP对H202不敏感,与·OH-反应荧光强度略微下降,但对·O2-敏感,荧光强度明显增强。7.重组cpYFP具有较好的热稳定性,即使在100℃处理10 min,其荧光强度仍然保留93.41%。综上所述,本实验构建的重组毕赤酵母菌能够高效表达重组cpYFP,其产物易于纯化,特异性高,热稳定性较好。可见毕赤酵母可作为制备重组cpYFP的良好体系,为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源。(本文来源于《福州大学》期刊2014-06-01）
苏延红[6]（2013）在《串联黄色荧光蛋白在大鼠神经细胞中表达》一文中研究指出神经连接组学是一门新兴学科，是研究和绘制出大脑神经细胞连接（即突触）的图谱。神经连接组学要解决的首要问题是神经细胞的高亮度和高精度标记，以致于成像设备能采集到树突棘和轴突末梢。本课题组探索神经细胞的分子标记技术。为了实现高亮度标记，构建了多种串联黄色荧光蛋白质粒；为了实现标记树突棘，构建了带有定位序列的荧光蛋白质粒。作者将在培养的神经细胞中鉴定这些质粒是否能实现目的。人们已经建立了胎鼠神经细胞的体外培养方法，作者获得了多种黄色荧光蛋白质粒和带有定位序列的荧光蛋白质粒。课题的目的是观察多种荧光蛋白质粒在神经细胞中的表达，带有定位序列的荧光蛋白质粒在神经细胞中的表达。实验探索是否荧光蛋白的亮度提高，是否荧光蛋白在神经纤维中表达。通过查阅文献和练习，借鉴本实验室胎鼠神经细胞体外培养方法，掌握了神经细胞的体外培养方法，培养了神经细胞，获得了生长状态良好的神经细胞。通过查阅文献，采用脂质体转染神经细胞的方法，转染了Hela细胞和神经细胞，使用荧光显微镜观察荧光蛋白表达情况。结果观察到神经细胞和Hela细胞表达荧光蛋白，观察到荧光蛋白定位于神经细胞突起上的纤维状结构，表明多种黄色荧光蛋白质粒和带有定位序列的荧光蛋白质粒在离体培养的神经细胞中正常表达，带有定位序列的荧光蛋白质粒能在神经细胞突起上的纤维状结构中表达。本文结论多种黄色荧光蛋白质粒和带有定位序列的荧光蛋白质粒可能在神经细胞中正常表达，带有定位序列的荧光蛋白质粒可能能标记神经细胞突起上的纤维状结构。(本文来源于《华中科技大学》期刊2013-02-01）
杨帆,王建平[7]（2012）在《黄色荧光蛋白结构动力学的红外光谱研究》一文中研究指出黄色荧光蛋白(PYP)是一种具有天然光学活性的水溶性蛋白,是研究蛋白折迭和光化学性质的模型体系[1]。M100A突变体具有与天然PYP相似的基态(PG态)光谱性质,但在440nm光照射下,M100A的光循环过程会显着变慢,产生一个稳态的信号态(PB态)[2]。本工作以M100A蛋白骨架酰胺-I带为结构探针,通(本文来源于《中国化学会第28届学术年会第11分会场摘要集》期刊2012-04-13）
NashaatS.Rasheed,那沙特[8]（2011）在《大斯托克斯位移黄色荧光蛋白mAmetrine的结构分析》一文中研究指出斯托克斯位移大的荧光蛋白在多色双光子成像方面,具有重要的应用价值。斯托克斯位移指的是荧光物质的最大发射波长和最大激发波长之差。该差值若大于100 nm,则认为该荧光蛋白具有大斯托克斯位移的特性。部分荧光蛋白具有大斯托克斯位移的特性。mAmetrine是一个黄色荧光蛋白,其激发峰波长λex = 406 nm,发射峰波长λem = 526 nm,斯托克斯位移达120 nm。mAmetrine大斯托克斯位移的特性源自激发态质子转移(ESPT)和π-π电子与发光团之间的堆积相互作用。但是,其荧光发射的激发态质子转移具体路径和机制尚未知。为了更好地理解mAmetrine的功能及ESPT或者其他途径对大斯托克斯位移的作用,我们利用悬滴蒸汽扩散法进行mAmetrine蛋白结晶,然后通过蛋白结晶学方法确定其晶体结构。其中涉及到一系列的步骤:基因克隆,表达,大量纯化,结晶,衍射数据的采集、整合和提炼,原子位置的确定等等。我们得到的mAmetrine的叁维结构的晶体分辨率达2.1(A|°),其结果可用于研究ESPT或其他途径对其大斯托克斯位移的影响。为了最终证实我们对mAmetrine的结构分析,需要对其作进一步的定点突变(F203Y, S205N和E222K)(本文来源于《华中科技大学》期刊2011-11-01）
李继东,郝力力,刘贤勇,周晓艳,索勋[9]（2010）在《串联型黄色荧光蛋白表达载体的构建及其在柔嫩艾美球虫中的瞬时表达》一文中研究指出为了探索黄色荧光蛋白(YFP)在柔嫩艾美球虫子孢子中的瞬时表达情况,以柔嫩艾美球虫的组蛋白4(Histone4,H4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列为元件构建了串联型YFP重组转染载体pH4-YFP-YFP-ACT。将构建的载体经电穿孔法转染柔嫩艾美球虫子孢子,并在MDBK细胞中进行培养。结果显示,在荧光显微镜下可以观察到黄色荧光。提示,串联型YFP可以在柔嫩艾美球虫中瞬时表达。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2010年01期）
李继东,丁林军,何生虎[10]（2009）在《CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究》一文中研究指出探索CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对串联型黄色荧光蛋白(YFP)表达的调控作用,将含有串联型YFP、CMV启动子、柔嫩艾美耳球虫组蛋白4(H istone4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列的重组载体pCMV-YFP-YFP、pH4-YFP-YFP-ACT电转染Vero细胞和柔嫩艾美耳球虫子孢子,观察荧光情况。结果证明,CMV启动子不能驱动YFP在柔嫩艾美耳球虫中正常表达,而其自身基因的侧翼序列能够启动和调控串联型YFP在柔嫩艾美耳球虫中的正常表达。(本文来源于《江西农业大学学报》期刊2009年06期）
黄色荧光蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
细胞凋亡早期,磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内侧翻转到细胞膜外侧, Annexin A5可与PS高亲和力结合,这是其检测凋亡的原理。绿色荧光探针标记的Annexin A5和碘化丙啶联合标记应用于流式细胞术进行细胞凋亡检测,该方法灵敏度高、特异性好、效率高,已成为目前全世界通用的细胞凋亡检测方法。除FITC-Annexin A5外, Annexin A5-EGFP融合蛋白是另一个常用的简单、可信、易于制备的凋亡检测探针。黄色荧光蛋白是绿色荧光蛋白的一种突变体,其荧光向红色光谱偏移。目前,有叁种改良的黄色荧光蛋白:Citrine、Venus、Ypet,这叁种改良的蛋白荧光更亮、更稳定、成熟更快。该文选择Citrine、Venus、Ypet来制备Annexin A5凋亡检测探针,通过原核表达和分离纯化Annexin A5-Citrine、Annexin A5-Venus和Annexin A5-Ypet融合蛋白,获得了高产量的可溶性蛋白,探究这叁种融合蛋白与凋亡细胞的结合能力,筛选出适用于流式检测的黄色荧光蛋白标记的Annexin A5,为后续研究奠定基础。以pET28a-Annexin A5-EGFP-his重组质粒为模板,利用分子生物学手段又构建了重组质粒pET28a-Annexin A5-Citrine-his、pET28a-Annexin A5-Venus-his、pET28a-Annexin A5-Ypet-his,然后通过Ni柱亲和层析纯化获得了这叁种蛋白,纯度约为90%。该文重点比较了叁者检测细胞凋亡的能力,流式细胞仪检测结果显示, Annexin A5-Citrine、Annexin A5-Venus和Annexin A5-Ypet融合蛋白均可以识别和标记凋亡细胞,它们与凋亡细胞的亲和力分别是3 113.0 nmol/L、444.3 nmol/L和391.6 nmol/L。叁者与凋亡细胞的亲和力差异很大,通过对Citrine、Venus、Ypet的氨基酸序列进行分析,该文初步发现了决定叁个黄色荧光蛋白与凋亡细胞亲和力的关键氨基酸。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
黄色荧光蛋白论文参考文献
[1].匡琛,朱晓义,张亮,范世航,华玮.含多酶切位点融合黄色荧光蛋白的植物通用载体的构建与应用[J].江苏农业科学.2019
[2].高梦月,王云轲,黄先杰,张晶,华子春.黄色荧光蛋白的结构对AnnexinA5凋亡检测功能的影响探究[J].中国细胞生物学学报.2018
[3].孙金钰,郑屹峰,巫启明,郭建辉,林春通.环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究[J].福州大学学报(自然科学版).2014
[4].王波,骆灵喜,李旭宁,刘欢.利用加强型绿色荧光蛋白标记黄色单胞菌的研究[J].科学技术与工程.2014
[5].孙金钰.环状排列黄色荧光蛋白（cpYFP）在毕赤酵母中的表达及性质研究[D].福州大学.2014
[6].苏延红.串联黄色荧光蛋白在大鼠神经细胞中表达[D].华中科技大学.2013
[7].杨帆,王建平.黄色荧光蛋白结构动力学的红外光谱研究[C].中国化学会第28届学术年会第11分会场摘要集.2012
[8].NashaatS.Rasheed,那沙特.大斯托克斯位移黄色荧光蛋白mAmetrine的结构分析[D].华中科技大学.2011
[9].李继东,郝力力,刘贤勇,周晓艳,索勋.串联型黄色荧光蛋白表达载体的构建及其在柔嫩艾美球虫中的瞬时表达[J].中国兽医科学.2010
[10].李继东,丁林军,何生虎.CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究[J].江西农业大学学报.2009
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