葡萄糖醛酸木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵条件优化

论文摘要

为了研究葡萄糖醛酸木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中异源表达,笔者从枯草芽孢杆菌中克隆得到带有自身信号肽的葡萄糖醛酸木聚糖酶基因,将其构建到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒中,转化入枯草芽孢杆菌WB800,得到重组菌。通过发酵条件以及培养基成分优化,重组菌中葡萄糖醛酸木聚糖酶酶活达到76.0 U/mL,约为优化前产酶量的5.4倍。葡萄糖醛酸木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中实现高效异源表达,为其进一步的实际应用奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的DNA操作
•   1.3 葡萄糖醛酸木聚糖基因的克隆
•   1.4 表达载体的构建
•   1.5 葡萄糖醛酸木聚糖酶的发酵培养及表达
•   1.6 表达产物的分析鉴定
•   1.7 发酵条件优化
•     1) 培养时间对菌株生长及产酶的影响。
•     2) 培养温度对菌株生长及产酶的影响。
•     3) 培养基起始pH对菌株生长及产酶的影响。
•   1.8 培养基碳源优化
•     1) 碳源对菌株生长及产酶的影响。
•     2) 碳源浓度对菌株生长及产酶的影响。
• 2 结果与讨论
•   2.1 葡萄糖醛酸木聚糖酶基因克隆
•   2.2 重组工程菌的构建结果
•     2.2.1 质粒的构建结果
•     2.2.2 葡萄糖醛酸木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的表达
•   2.3 葡萄糖醛酸木聚糖酶发酵条件的优化
•     2.3.1 发酵时间对产酶的影响
•     2.3.2 发酵温度对产酶的影响
•     2.3.3 培养基起始pH对产酶的影响
•   2.4 培养基碳源优化
•   2.5 培养基碳源浓度的优化
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭亚兰,周雨朦,吴斌,何冰芳

关键词: 葡萄糖醛酸木聚糖酶,枯草芽孢杆菌,异源表达,穿梭质粒,木聚糖

来源: 生物加工过程 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 南京工业大学生物与制药工程学院,南京正大天晴制药有限公司,南京工业大学药学院

基金: 国家自然科学基金(21776135)

分类号: TQ925

页码: 379-384

总页数: 6

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