一株牦牛源G6P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定及部分基因的序列分析

论文摘要

本研究的目的是分离、鉴定牦牛源牛轮状病毒（bovine rotavirus, BRV）。将经RT-PCR检测BRV阳性的牦牛腹泻粪便样本接种MA-104细胞,进行病毒分离和鉴定,并对其VP4、VP6和VP7完整基因进行测序,分析其分子特征。结果显示:病毒盲传3代后出现细胞病变,至第7代后出现细胞病变的时间稳定,经蚀斑纯化后测得病毒滴度为108.39TCID50·mL-1。分离株经RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察证实为BRV,命名为HY-1株;扩增HY-1株VP4、VP6和VP7完整基因序列,分析表明HY-1株为G6P[11]I2型;系统发育树显示,HY-1株VP4、VP6和VP7节段分别与中国牛源DQ-75株和印度牛源M-1和RUBV319株遗传演化关系最近,可能为重配毒株。与国内的G6型和P[11]型BRV毒株相比,HY-1株的VP4和VP7蛋白重要氨基酸位点变化较大。成功分离得到一株牦牛源BRV,基因型为G6P[11]型,为我国首次报道。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 临床样本及细胞系
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 临床样本的处理及接种
•   1.4 病毒的纯化及毒价测定
•   1.5 RNA的提取及反转录
•   1.6 病毒的鉴定
•     1.6.1 RT-PCR鉴定
•     1.6.2 间接免疫荧光鉴定
•     1.6.3 病毒的电镜观察
•   1.7 分离株VP4、VP6、VP7完整基因的扩增
•   1.8 分离株VP4、VP6、VP7完整基因的遗传演化和重组分析
• 2 结 果
•   2.1 病毒的分离、纯化及毒价测定
•   2.2 病毒的鉴定
•     2.2.1 RT-PCR鉴定
•     2.2.2 间接免疫荧光抗体鉴定
•     2.2.3 HY-1株病毒颗粒的形态
•   2.3 HY-1株VP4完整基因的扩增与分析
•   2.4 HY-1株VP7完整基因的扩增与分析
•   2.5 HY-1株VP6完整基因的扩增与分析
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李然,汤承,罗雪,岳华

关键词: 牦牛,牛轮状病毒,分离鉴定,分子特征

来源: 畜牧兽医学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

基金: 四川省应用基础项目(2017JY0066),国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队项目(13TD0057),西南民族大学研究生创新型科研项目(CX2017SZ060)

分类号: S852.653

页码: 592-601

总页数: 10

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