一种可促进重组蛋白表达量和稳定性的多功能纯化标签的开发与利用

论文摘要

自组装双亲短肽（Self-assembling amphipathic peptides,SAPs）是一类亲疏水氨基酸按一定规律分布、具有自聚合效应的短肽,融合在酶蛋白N端时,具有促进表达和稳定化的功能。根据前期研究结论,设计一条全新的基于SAPs （S1vw,HNANARARHNANARARHNANARARHNARARAR）的可促进融合蛋白表达和稳定性,并可用于镍柱亲和层析的多功能短肽标签,在大肠杆菌表达系统中,将S1vw以PT-linker（PTPPTTPTPPTTPTP）融合在碱性果胶酶（Alkaline polygalacturonate lyase,PGL）、脂肪氧合酶（Lipoxygenase,LOX）及绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的N末端时,与对应的野生型相比,PGL及LOX的粗酶活分别提高了3.1倍和1.89倍,GFP的荧光强度提高了16.22倍。S1vw的3种融合酶均可用镍柱进行亲和纯化,并具有较高的回收率。PGL及LOX在对应的热处理条件下,与野生型相比,半衰期分别提高了2.16倍和3.2倍。将GFP-S1vw在枯草芽孢杆菌及毕赤酵母表达系统中表达,发现在枯草芽孢杆菌中融合蛋白表达量提高明显,但在毕赤酵母中表达量几乎没有改变。说明在原核表达体系中,S1vw可作为一种新型的促表达、稳定化及可纯化的多功能标签。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株及质粒
•     1.1.2 试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 S1vw融合酶突变体的构建
•     1.2.2 大肠杆菌发酵培养条件
•     1.2.3 S1vw的GFP融合酶在不同表达宿主中的培养条件
•     1.2.4 酶活及荧光检测方法
•     1.2.5 酶/蛋白的分离纯化
•     1.2.6 蛋白电泳分析及蛋白浓度测定
•     1.2.7 酶的热稳定性测定方法
• 2 结果与分析
•   2.1 多功能肽S1vw序列的设计
•   2.2 S1vw融合酶表达质粒的构建
•   2.3 S1vw对不同酶/蛋白表达量的影响
•   2.4 S1vw对不同酶蛋白纯化效率的影响
•   2.5 S1vw对不同酶蛋白稳定性的影响
•   2.6 S1vw在不同表达宿主中对融合酶表达量的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵伟欣,刘松,刘立明,陈坚,堵国成

关键词: 自组装双亲短肽,融合蛋白,表达量,热稳定性,纯化,表达宿主

来源: 生物工程学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金(No.31401638)资助~~

分类号: Q78

DOI: 10.13345/j.cjb.180363

页码: 626-635

总页数: 10

文件大小: 1822K

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