胞凋亡论文_杨晓春

导读:本文包含了胞凋亡论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:内膜,子宫,内质网,凋亡,胃癌,肝细胞,生长因子。

胞凋亡论文文献综述

杨晓春^[1]（2014）在《抑制JNK3促进BH3模拟物S1诱导的人卵巢癌耐药胞凋亡》一文中研究指出卵巢癌是女性常见肿瘤，位居女性肿瘤发病率第五位和妇科肿瘤致死率第一位。手术和基于铂类药物的联合化疗是其常规治疗手段，但是因其近70%复发和耐药的形成，致使其五年期生存率不高于40%。所以对卵巢癌耐药机制的深入研究尤为必要。研究显示，卵巢癌耐药的产生与抗凋亡的Bcl-1家族成员（如Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL等）高表达紧密相关，这使得抗凋亡和促凋亡相之间的平衡发生倾斜，促使细胞逃逸凋亡而产生耐药。近年来将靶向于Bcl-2家族抗凋亡蛋白的特异性抑制剂应用于肿瘤治疗，相关基础研究不断增加。现已开发了一系列模拟促凋亡成员BH3结构域的小分子抑制剂（如ABT-737/263、Obatoclax和AT-101等）。新型BH3模拟物S1能够同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL，并具有较高的亲合力。已有报道显示S1能够诱导胶质瘤细胞U251、白血病细胞K562、肝癌细胞SMMC-7721、肺癌细胞SCLC、卵巢癌细胞SKOV3和SKOV3/DDP等多种肿瘤细胞系发生凋亡。本研究室已有研究显示S1在胶质瘤细胞及卵巢癌细胞中，经由线粒体途径介导了凋亡的发生，同时也发生了内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）途径诱导的凋亡，内质网凋亡蛋白Caspase-4信号级联及(c-Jun N-terminalkinase, JNK)途径被激活。ERS触发的未折迭蛋白反应（Unfolded ProteinResponse，UPR）既可能作为适应性途径缓解细胞所面临的应激状态，也可能因严重应激而促使细胞发生凋亡。目前认为，UPR信号途径可以诱导细胞自噬而发挥抵抗凋亡的效应，而Bcl-2家族蛋白与UPR、自噬和凋亡等信号转导途径密切相关。因此，靶向抗凋亡蛋白Bcl-2的BH3模拟物则通过直接或间接影响这些信号转导途径而决定细胞的命运。研究结果显示UPR信号途径的主要通路之一(inositol-requiring kinase1, IRE1)可激活JNK，JNK既能激活凋亡信号，又能介导自噬的活化，还能够调节活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成，对细胞命运的决定至关重要。然而，已有研究多采用JNK广谱抑制剂，无法区别与验证JNK亚型的作用，最近发现的新的特异性抑制剂等为研究JNK亚型的功能提供了可能。本研究中，我们采用BH3模拟物S1处理人卵巢癌耐药细胞，以高通量方式对UPR信号通路相关84个基因进行筛选，发现JNK3持续高表达，并通过应用特异性抑制剂Ⅻ和siRNA对JNK3表达在人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中的作用及机制进行了探讨。方法(1) MTT法检测BH3模拟物S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率。(2) S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP，采用PCR array法检测UPR信号通路84种基因变化，筛选差异表达基因；qPCR确认JNK1、JNK2和JNK3表达基因变化；Western Blot分析JNK3蛋白表达变化。(3)根据JNK3的基因序列（GenBank：NM_002753）以及RNAi设计原理，构建叁条寡核苷酸序列沉默其表达，命名为Si1，Si2和Si3，并通过荧光标签、RT-PCR、Western blot等技术进行验证，筛选有效沉默序列。(4)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，光镜下观察细胞形态变化，MTT法检测细胞存活率；TUNEL染色法检测凋亡变化。(5)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，Western blot分析Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白的表达；Western blot分析JNK下游信号分子c-Jun、p-c-Jun、p53、Noxa和Bax蛋白表达变化；JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势的变化；同时，Western blot分析细胞内质网应激相关蛋白Grp78和CHOP的表达。(6) DCFH-DA染色观察人卵巢癌耐药细胞ROS水平；抗氧化剂NAC预处理细胞后合用S1和抑制剂Ⅻ，MTT法检测细胞存活率。(7) AO及Lyso-Tracker Red染色检测胞内酸性结构累积情况；Western blot检测LC3-Ⅱ及p62蛋白的表达；自噬抑制剂氯喹与S1合用检测存活率。结果1. MTT检测显示，S1能够剂量依赖性及时间依赖性降低卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的存活率。2. PCR array法检测结果显示，在短时间点（3h）UPR信号通路多种未折迭蛋白伴侣分子（包括PERK、ATF6和IRE1叁条应答途径）表达上调应答了应激，长时间点（24h）则呈下降趋势，表明ERS趋缓，而JNK3则持续高表达，同时JNK家族其他亚型无明显变化。Western blot检测也显示JNK3蛋白水平表达上调。3.结合mRNA及Western blot检测确认Si3为JNK3有效沉默序列。4.较之S1处理，抑制剂Ⅻ和siRNA干预后，光镜下皱缩细胞增多；细胞存活率显着降低；抑制剂Ⅻ与S1联合应用后细胞凋亡率增加。5.较之S1处理，抑制剂Ⅻ或siRNA与S1合并干预后，Bcl-2表达降低，同时Cleaved Caspase-3蛋白的表达增加；JNK靶标分子c-Jun、p-c-Jun表达明显下降；而c-Jun的负性调节靶标p53表达上调，相应地，p53下游分子Noxa和Bax表达亦明显上调；线粒体膜电位显着下降；未折迭蛋白反应伴侣分子Grp78表达降低、CHOP表达升高。6.抑制剂Ⅻ与S1联合应用后，胞内ROS水平显着增加，氧化损伤导致的存活率降低可被抗氧剂NAC所逆转。7. AO及Lyso-Tranker Red染色结果显示抑制剂Ⅻ与S1联合应用后胞内酸性结构明显增多；同时LC3-Ⅱ表达在S1组、S1合并Ⅻ处理组均显着增加，p62表达在合并处理组显着增加，相应地siRNA干预后也呈现出LC3-Ⅱ和p62表达升高的趋势；氯喹合并S1处理SKOV3/DDP细胞进一步降低了存活率。结论1. BH3模拟物S1能够降低卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率；UPR相关基因JNK3的高表达可能与SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性密切相关。2.抑制JNK3可通过阻断其下游靶蛋白c-Jun的活化，诱导p53表达增加，上调凋亡相关蛋白Noxa和Bax的表达，从而加剧S1诱导卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP凋亡。3.抑制JNK3通过促进细胞氧化损伤从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。4.抑制JNK3通过阻断细胞自噬通量从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。本文首次探讨了JNK家族的亚型JNK3在卵巢癌细胞耐药中的作用，JNK3可能通过减少氧化损伤和激活自噬途径发挥了促进细胞存活的作用。因此JNK3可能是逆转肿瘤细胞耐药的一个潜在靶标。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-04-01）

沈建国,王林波^[2]（2006）在《肝细胞生长因子基因转染对胃癌MKN-45细胞凋亡抑制作用的研究》一文中研究指出目的:研究肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)在阿霉素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡中的影响,以探讨HGF在诱导胃癌化疗耐药中的作用。方法: PU C-SR α-HGF、pIRES2-EGFP荧光载体分别用Bam HI酶切后回收目的片段,T4 DNA连接酶连接HGF cDNA 及pIRES2-EGFP Bam HI片段,重组质粒分别用Bam HI、 Pst I和Kpn I酶切鉴定HGF基因真核表达荧光载体。HGF 重组载体及空质粒载体分别用lipofectamine 2000脂质体转染胃癌MKN-45细胞株,G418筛选转染MKN-45细胞,运用 RT-PCR及Western blot方法检测HGF的表达情况,建立稳定表达HGF基因的转染细胞株并鉴定HGF的功能。分别用不同浓度的阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染MKN-45细胞,MTT法测定阿霉素对叁组细胞的抑制作用,DNA凋亡条带法、DAPI染色细胞凋亡计数法及流式细胞仪PI染色法检测叁组细胞之间细胞凋亡发生的差异。实验数据采用SPSS 10．0统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析。结果:PUC—SR α—HGF cDNA片段约为2．3kb,HGF cDNA Bam HI片段(2．5kb)与pIRES2- EGFP(5．3kb)连接反应后重组质粒pIRES2-EGFP-HGF分别用Pst I和Kpn I酶切后产生的片段大小证实HGF插入方向均正确。HGF转染MKN-45细胞用RT—PCR方法可检测到 HGF mRNA的表达,同时在其细胞培养液中可检测到HGF 蛋白。用HGF转染细胞的培养液培养MDCK细胞后,发现 MDCK细胞与细胞之间连接消失,细胞呈离散性生长。分别用不同浓度阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染胃癌细胞后,MTT结果发现HGF重组质粒转染细胞可显着降低阿霉素诱导的细胞抑制作用,0．1ug／ml阿霉素作用细胞48小时后DNA凋亡条带分析发现,空质粒转染及未转染MKN-45细胞出现典型的180～200bp阶梯状凋亡条带, 而HGF重组质粒转染细胞未见凋亡条带。0．05ug／ml阿霉素作用细胞后DAPI染色凋亡细胞计数结果发现HGF重组质粒转染细胞的凋亡发生率为11．4±1．6%,而空质粒转染和未转染细胞分别为29．1±2．9％和28．9±3．6％,差异具有显着性 (p<0．01)。流式细胞仪PI染色结果同样发现阿霉素对HGF重组质粒转染细胞的诱导细胞凋亡率明显较空质粒转染和未转染细胞低,差异具有统计学意义。结论:肝细胞生长因子基因转染的胃癌MKN-45细胞分泌的HGF具有正常的生理功能, 可用于HGF对肿瘤细胞生物学效应的研究。阿霉素对HGF 重组质粒转染细胞诱导的细胞凋亡作用较空质粒转染和未转染细胞小,说明HGF可显着抑制阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡,也进一步提示HGF发挥的细胞抗凋亡效应可能是引起胃癌细胞化疗耐药的一个重要机制。(本文来源于《第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集》期刊2006-10-01）

彭冬先,何援利^[3]（2001）在《扭胞凋亡与子宫内膜异位症的研究进展》一文中研究指出细胞凋亡又称程序性细胞死亡,指有核细胞在一定条件下通过启动内部机制,经过一连串的细胞变性,最终发生的主动死亡过程。细胞凋亡是组织生长、更新以及清除异常细胞的重要手段。子宫内膜异位症(内异症)是子宫内膜出现在子宫腔以外,是一种同不孕有关的常见病,且发病率呈上升趋势,占妇女人群的10％左右,引起腹痛、痛经、性交困难和不孕等。近年研究表明细胞凋亡在子宫内膜异位症的发生、发展和治疗中具有重要的意义,现就细胞凋亡与子宫内膜异位症的研究进展综(本文来源于《医学研究通讯》期刊2001年07期）

胞凋亡论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的:研究肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)在阿霉素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡中的影响,以探讨HGF在诱导胃癌化疗耐药中的作用。方法: PU C-SR α-HGF、pIRES2-EGFP荧光载体分别用Bam HI酶切后回收目的片段,T4 DNA连接酶连接HGF cDNA 及pIRES2-EGFP Bam HI片段,重组质粒分别用Bam HI、 Pst I和Kpn I酶切鉴定HGF基因真核表达荧光载体。HGF 重组载体及空质粒载体分别用lipofectamine 2000脂质体转染胃癌MKN-45细胞株,G418筛选转染MKN-45细胞,运用 RT-PCR及Western blot方法检测HGF的表达情况,建立稳定表达HGF基因的转染细胞株并鉴定HGF的功能。分别用不同浓度的阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染MKN-45细胞,MTT法测定阿霉素对叁组细胞的抑制作用,DNA凋亡条带法、DAPI染色细胞凋亡计数法及流式细胞仪PI染色法检测叁组细胞之间细胞凋亡发生的差异。实验数据采用SPSS 10．0统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析。结果:PUC—SR α—HGF cDNA片段约为2．3kb,HGF cDNA Bam HI片段(2．5kb)与pIRES2- EGFP(5．3kb)连接反应后重组质粒pIRES2-EGFP-HGF分别用Pst I和Kpn I酶切后产生的片段大小证实HGF插入方向均正确。HGF转染MKN-45细胞用RT—PCR方法可检测到 HGF mRNA的表达,同时在其细胞培养液中可检测到HGF 蛋白。用HGF转染细胞的培养液培养MDCK细胞后,发现 MDCK细胞与细胞之间连接消失,细胞呈离散性生长。分别用不同浓度阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染胃癌细胞后,MTT结果发现HGF重组质粒转染细胞可显着降低阿霉素诱导的细胞抑制作用,0．1ug／ml阿霉素作用细胞48小时后DNA凋亡条带分析发现,空质粒转染及未转染MKN-45细胞出现典型的180～200bp阶梯状凋亡条带, 而HGF重组质粒转染细胞未见凋亡条带。0．05ug／ml阿霉素作用细胞后DAPI染色凋亡细胞计数结果发现HGF重组质粒转染细胞的凋亡发生率为11．4±1．6%,而空质粒转染和未转染细胞分别为29．1±2．9％和28．9±3．6％,差异具有显着性 (p<0．01)。流式细胞仪PI染色结果同样发现阿霉素对HGF重组质粒转染细胞的诱导细胞凋亡率明显较空质粒转染和未转染细胞低,差异具有统计学意义。结论:肝细胞生长因子基因转染的胃癌MKN-45细胞分泌的HGF具有正常的生理功能, 可用于HGF对肿瘤细胞生物学效应的研究。阿霉素对HGF 重组质粒转染细胞诱导的细胞凋亡作用较空质粒转染和未转染细胞小,说明HGF可显着抑制阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡,也进一步提示HGF发挥的细胞抗凋亡效应可能是引起胃癌细胞化疗耐药的一个重要机制。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。